苗愛東，楊 靜，徐軼飛

抗霉栓為醫(yī)療機構(gòu)非標準制劑，由酮康唑和半合成脂肪酸甘油酯等輔料制成，具有抗真菌作用，臨床主要用于治療霉菌引起的陰道疾?。?］?，F(xiàn)行標準采用三氯甲烷萃取后在242.5 nm波長處測定其含量，方法的準確性和重復(fù)性不好，無法有效控制該制劑的質(zhì)量。為了能夠更好的控制該制劑的質(zhì)量，參考相關(guān)文獻［2-7］，建立了高效液相色譜法(HPLC)測定抗霉栓中酮康唑含量的方法，現(xiàn)報告如下。

1 儀器與試藥

Agilent 1200型高效液相色譜儀(美國安捷倫科技有限公司，包括四元泵、脫氣機、DAD檢測器、自動進樣器和ChemStation化學工作站);METTLER TOLEDO AG 285電子天平(d=0.01 mg，上海梅特勒－托利多儀器有限公司);酮康唑?qū)φ掌?中國藥品生物制品檢定所，批號:100294-200602，純度99.9%);抗霉栓(某醫(yī)療機構(gòu)提供，批號:20100415、20100621、20100807);甲醇為色譜純，其他試劑均為分析純，水為重蒸水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱:Agilent Zorbax SB-C18(4.6 mm ×150 mm，5 μm);流動相:甲醇-水(74∶26);流速:1.0 ml/min;檢測波長:239 nm;柱溫:40℃。在此條件下，酮康唑與其他色譜峰分離良好，保留時間約為12 min，理論塔板數(shù)按酮康唑峰計算不低于3000。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品儲備液:精密稱取經(jīng)80℃減壓干燥至恒重的酮康唑?qū)φ掌?0 mg，置于50 ml量瓶中，加無水乙醇至刻度，搖勻，得1.6 mg/ml的對照品溶液儲備液。

2.2.2 供試品溶液:取本品10粒，精密稱定。置燒杯中，微溫(43℃)使其溶化，攪拌，至冷凝，精密稱取本品0.54 g，置于50 ml量瓶中，加無水乙醇適量，置80℃水浴中使其溶解，放冷至室溫，以無水乙醇稀釋至刻度，搖勻，放置于冰水浴中2 h，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

2.2.3 陰性對照溶液:根據(jù)處方及生產(chǎn)工藝制備缺酮康唑的陰性樣品，按供試品溶液的制備方法，制成陰性對照溶液。

2.3 專屬性試驗 取對照品溶液、供試品溶液及陰性對照溶液，按上述色譜條件測定，記錄色譜圖。結(jié)果顯示，陰性對照對酮康唑的測定無干擾。見圖1。

圖1 高效液相色譜法測定3種溶液專屬性試驗色譜圖

2.4 線性關(guān)系考察 分別精密吸取酮康唑?qū)φ掌穬湟?1.0、2.0、4.0、5.0、6.0、7.5 ml，無水乙醇定容至10 ml量瓶中，按“2.1”項下色譜條件進樣10 μl，記錄色譜峰面積值。酮康唑進樣量m(μg)為橫坐標，酮康唑色譜峰面積值為縱坐標，繪制工作曲線，得回歸方程為:A=1504.6 m －59.44(r=0.9998，n=6)。結(jié)果表明，酮康唑在 1.80 ～13.50 μg范圍內(nèi)與色譜峰面積值呈良好的線性關(guān)系。

2.5 精密度試驗 取對照品溶液按“2.1”項下色譜條件，10 μl重復(fù)進樣6次測定。結(jié)果表明酮康唑峰面積相對標準差(RSD)為0.53%(n=6)，提示儀器的精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗 取供試品溶液(批號:20100415)，按“2.1”項下色譜條件，在 0、2、4、8、12 h分別 10 μl進樣測定。結(jié)果酮康唑的峰面積RSD為1.79%(n=6)，提示供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.7 重復(fù)性試驗 取同一樣品(批號:20100415)6份，按“2.2”項下方法制備供試品溶液，按“2.1”項下色譜條件，分別10 μl進樣測定。結(jié)果酮康唑的平均含量為標示量的95.06%，RSD為1.27%(n=6)，表明方法的重現(xiàn)性良好。

2.8 加樣回收率試驗 精密量取已知含量(標示量的95.06%)的同一樣品9份，精密加入適量酮康唑?qū)φ掌穬湟?，按?.2”項下制備供試品溶液，按“2.1”項下色譜條件，分別 10 μl進樣測定，計算回收率，結(jié)果見表1。

2.9 樣品測定 取3批抗霉栓樣品，按“2.2”項下方法制備供試品溶液，10 μl進樣測定酮康唑的含量，結(jié)果見表2。

3 討論

采用甲醇－醋酸鹽溶液為流動相體系測定復(fù)方制劑中酮康唑含量的報道較多［8-13］。在本實驗過程中，發(fā)現(xiàn)采用甲醇－水(74∶26)為流動相時，酮康唑色譜峰型對稱性良好，可以滿足含量測定的要求，且其他色譜峰無干擾。

有文獻報道，酮康唑色譜峰在239 nm下的面積最大，故確定其為檢測波長［5-7］。本實驗具有簡單、快速的優(yōu)點，方法的準確度和重復(fù)性好，用于抗霉栓中酮康唑的含量測定，可提高該制劑的質(zhì)量控制標準，為更好地進行質(zhì)量評價提供參考和幫助。

表1 抗霉栓樣品加樣回收率試驗結(jié)果(n=9)

表2 抗霉栓樣品酮康唑含量測定結(jié)果(n=3)

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