王 行，楊 陽，何慧容，康克國，唐 英

卵巢上皮性腫瘤是最多見的卵巢腫瘤，其來源于卵巢表面的生發(fā)上皮[1]，其發(fā)生原因與持續(xù)排卵、遺傳因素、未孕、不孕、月經(jīng)延遲等有關(guān)[2]。目前，早期診斷并評估病情進(jìn)展而采取相應(yīng)治療措施是提高該病治療效果的關(guān)鍵[3]。相關(guān)研究表示，卵巢上皮性腫瘤的發(fā)生與細(xì)胞黏附因子及細(xì)胞凋亡等基因密切相關(guān)[4]。凋亡相關(guān)蛋白3(apoptosis associated protein 3， APR3)的過高表達(dá)在多種腫瘤細(xì)胞中均有細(xì)胞聯(lián)系，對腫瘤分化、凋亡起到重要作用；活化白細(xì)胞黏附分子(activated leukocyte cell adhesion molecule, ALCAM)廣泛存在于人體各器官，是一種跨膜糖蛋白，與腫瘤發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移等有關(guān)[5]。因此，本研究選取98例卵巢上皮性腫瘤患者作為研究對象，分析卵巢上皮性腫瘤患者APR3和ALCAM的表達(dá)及與臨床病理特征和預(yù)后的相關(guān)性。現(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1臨床資料 選取本院2014年10月—2017年4月收治的98例卵巢上皮性腫瘤患者作為研究對象，均經(jīng)病理檢查證實。納入標(biāo)準(zhǔn)：術(shù)前未接受化療、放療等輔助治療；臨床資料均完整；無其他惡性疾病；患者均簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：合并肝、腎、心臟等臟器嚴(yán)重疾病者；合并嚴(yán)重神經(jīng)功能、認(rèn)知功能障礙者；依從性差者。年齡18～43(32.31±6.65)歲；良性42例，交界性31例，惡性25例。

1.2儀器與試劑 SP試劑盒(北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司)、免疫組化二抗試劑盒(武漢博士德生物工程有限公司)、磷酸鹽緩沖液(PBS，北京賽默飛世爾生物化學(xué)制品有限公司)、APR3兔抗人多克隆抗體(SANTACRUZ公司)、ALCAM抗體(美國abcam公司)。

1.3APR3和ALCAM蛋白表達(dá)水平檢測方法 參考文獻(xiàn)[1]方法：SP法，石蠟切片標(biāo)本厚2 μm，烘烤60℃，二甲苯脫蠟，浸泡3次。3次離子水中浸泡抗原修復(fù)切片，PBS洗3次。內(nèi)源性過氧化物酶阻斷劑滴加，室溫孵育15 min，沖洗。一抗(GPCR124多克隆抗體濃度1∶100)滴加，室溫孵育1 h，沖洗。辣根酶標(biāo)羊抗小鼠/兔IgG聚合物滴加，室溫孵育30 min。對照組采用PBS代替一抗；滴加山羊抗兔二抗(eBioscience)室溫孵育30 min。二氨基聯(lián)苯胺顯色，蘇木精復(fù)染，梯度乙醇脫水，樹膠封片。

1.4結(jié)果判定 APR3和ALCAM的免疫組化結(jié)果判定[6]：由兩位病理科醫(yī)生在400倍光鏡下隨機(jī)選取10個視野對染色細(xì)胞數(shù)量和染色程度進(jìn)行評分，其中陽性細(xì)胞數(shù)量<1%為0分，1%～10%為1分，11%～50%為2分，>50%為3分；染色程度中無染色為0分，弱陽性顯黃色為1分，中等陽性顯淺棕色為2分，強(qiáng)陽性顯棕褐色為3分。并將二者所得分?jǐn)?shù)合計：0～3分為無表達(dá)或低表達(dá)，4～6分為高表達(dá)。所有患者治療結(jié)束后均隨訪3年，隨訪截止日期為2020年1月30日。

2 結(jié)果

2.1APR3和ALCAM在卵巢上皮性腫瘤組織中的表達(dá) APR3和ALCAM在惡性上皮性腫瘤組織中高表達(dá)率明顯高于良性及交界性上皮性腫瘤(P<0.05)。見表1。

表1 APR3和ALCAM在卵巢上皮性腫瘤組織中的表達(dá)[例(%)]

2.2不同臨床病理特征惡性卵巢上皮性腫瘤患者APR3蛋白表達(dá)情況比較 惡性卵巢上皮性腫瘤患者APR3蛋白表達(dá)與年齡無關(guān)(P>0.05)，而與臟器、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM Ⅲ～Ⅳ期和組織低分化有關(guān)(P<0.01)。見表2。

表2 不同臨床病理特征惡性卵巢上皮性腫瘤患者APR3蛋白表達(dá)情況比較(例)

2.3不同臨床病理特征惡性卵巢上皮性腫瘤患者ALCAM蛋白表達(dá)情況比較 惡性卵巢上皮性腫瘤患者ALCAM蛋白的表達(dá)與年齡無關(guān)(P>0.05)，但存在臟器、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、低分化、TNM Ⅲ～Ⅳ期的患者ALCAM蛋白高表達(dá)者比例較高(P<0.01)。見表3。

表3 不同臨床病理特征惡性卵巢上皮性腫瘤患者ALCAM蛋白表達(dá)情況比較(例)

2.4惡性卵巢上皮性腫瘤患者預(yù)后情況 隨訪3年后，25例惡性卵巢上皮性腫瘤患者3年總生存率52.00%(13/25)。APR3高表達(dá)和低表達(dá)的3年總生存率分別為27.78%(5/18)、71.43%(5/7)。APR3高表達(dá)患者3年總生存率低于低表達(dá)者(P<0.05)。ALCAM高表達(dá)和低表達(dá)的3年總生存率分別為21.05%(4/19)、66.67%(4/6)。ALCAM高表達(dá)患者3年總生存率低于低表達(dá)者(P<0.05)。

2.5APR3和ALCAM表達(dá)與惡性卵巢上皮性腫瘤病理特征的相關(guān)性分析 經(jīng)Spearman相關(guān)進(jìn)行分析，APR3和ALCAM水平與TNM分期呈正相關(guān)，但與組織分化程度呈負(fù)相關(guān)(P<0.05，P<0.01)。見表4。

表4 APR3和ALCAM表達(dá)與惡性卵巢上皮性腫瘤病理特征的相關(guān)性分析

3 討論

據(jù)統(tǒng)計，在卵巢腫瘤中，卵巢上皮性腫瘤占50%～70%，其中，卵巢上皮性腫瘤占卵巢惡性腫瘤的85%～90%[7]。近年來，卵巢上皮性腫瘤的發(fā)病率呈上升趨勢[8]。由于該病早期良性腫瘤時進(jìn)展緩慢且無明顯癥狀，多數(shù)晚期惡性時可侵犯鄰近器官，引發(fā)破裂、感染、惡變等并發(fā)癥，故及時明確診斷并改善預(yù)后是目前臨床上的研究熱點(diǎn)[9-10]。目前尚不清楚該病發(fā)展和轉(zhuǎn)移機(jī)制，臨床上缺乏相應(yīng)有效的分子標(biāo)志物。

隨著生物學(xué)研究的進(jìn)展，研究者發(fā)現(xiàn)相關(guān)生物蛋白改變在卵巢上皮性腫瘤的發(fā)生和進(jìn)展中具有舉足輕重的病理作用，與卵巢上皮性腫瘤預(yù)后關(guān)聯(lián)大[11]。本研究結(jié)果顯示，ALCAM及APR3在良性腫瘤、交界性腫瘤及惡性腫瘤中的陽性表達(dá)率逐漸升高，且在惡性腫瘤中表達(dá)水平高于良性及交界性腫瘤。隨著惡性卵巢上皮性腫瘤臨床分期增高，組織分化程度的增加，ALCAM及APR3蛋白的高表達(dá)率也顯著上升。由此可知，ALCAM及APR3蛋白與惡性卵巢上皮性腫瘤患者病情的發(fā)展密切相關(guān)。

ALCAM又稱為CD166和MEMD，是免疫球蛋白基因超家族的成員，主要表達(dá)在白細(xì)胞和胸腺上皮細(xì)胞，同時也是淋巴細(xì)胞抗原CD6的配基[12]。近年來大量文獻(xiàn)已經(jīng)證明ALCAM與多種癌癥的發(fā)生、發(fā)展具有相關(guān)性，ALCAM在涎腺腺樣囊性癌中呈高水平狀態(tài)，該因子可誘導(dǎo)癌癥進(jìn)展，引起復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移，對癌癥的發(fā)生具有促進(jìn)作用[13]。而也有相關(guān)研究表示，ALCAM在癌癥中表達(dá)水平越高、復(fù)發(fā)越早、預(yù)后越差[14]。提示ALCAM與癌癥進(jìn)展具有相關(guān)性。而APR3與細(xì)胞凋亡密切相關(guān)，相關(guān)研究對全反式維甲酸誘導(dǎo)細(xì)胞內(nèi)APR3情況發(fā)現(xiàn)，APR3不僅可以抑制細(xì)胞凋亡，還可促進(jìn)細(xì)胞分化、發(fā)育，在多種全反式維甲酸敏感細(xì)胞中顯示APR3轉(zhuǎn)錄呈上升趨勢[15]。還有研究報道APR3作為抑制成骨細(xì)胞增殖重要的輔助因子，可促進(jìn)成骨細(xì)胞的分化[16]。由此可知，ALCAM及APR3蛋白的表達(dá)與卵巢上皮性腫瘤具有相關(guān)性，本研究結(jié)果與文獻(xiàn)報道一致。

本研究還發(fā)現(xiàn)，ALCAM及APR3的表達(dá)與患者年齡無關(guān)，而與TMN分期呈正相關(guān)，與組織分化程度呈負(fù)相關(guān)，表明了ALCAM及APR3參與了卵巢上皮性組織病變過程，在一定程度上可對腫瘤細(xì)胞及相關(guān)因子產(chǎn)生推進(jìn)作用，這與相關(guān)國外文獻(xiàn)[17]研究結(jié)果一致。同時，通過3年隨訪惡性卵巢上皮性腫瘤患者分析ALCAM及APR3表達(dá)及生存率的關(guān)系，結(jié)果顯示二者表達(dá)的差異與惡性卵巢上皮性腫瘤生存率具有相關(guān)性，當(dāng)患者病情越重，臨床分期增高，分化程度越低，導(dǎo)致患者體內(nèi)細(xì)胞增殖能力增強(qiáng)，出現(xiàn)臟器、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，病情惡化，APR3和ALCAM高表達(dá)患者3年總生存率越低[18]。

綜上所述，APR3與ALCAM表達(dá)在惡性卵巢上皮性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及臟器、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等過程中發(fā)揮著重要作用，臨床上可根據(jù)APR3與ALCAM的表達(dá)情況評估病情并指導(dǎo)制訂治療方案。