何鳳蘭 鄭曉陽 馮麗萍 黃文鋒

1.廣東省陽江市人民醫(yī)院藥學(xué)部，廣東 陽江 529500；2.廣東陽江市檢測(cè)檢驗(yàn)中心，廣東 陽江 529500

養(yǎng)陰潤肺糖漿是我院自擬處方中成藥制劑，由地黃、麥冬、玄參、川貝母、白芍、牡丹皮等8味藥材組成[1],深得廣大患者的認(rèn)可，銷量較大。養(yǎng)陰潤肺糖漿主治陰虛肺熱引起的咳嗽、咽干、喉痛聲啞、痰中帶血等癥，療效顯著。但其自擬標(biāo)準(zhǔn)中還沒有含量測(cè)定項(xiàng)目，地黃在該處方中屬君藥，針對(duì)地黃的有效成份是梓醇進(jìn)行檢測(cè)，以控制其內(nèi)在有效成分，同時(shí)將其作為養(yǎng)陰潤肺糖漿的質(zhì)量控制指標(biāo)，保證產(chǎn)品質(zhì)量，提高療效，故增加含量測(cè)定項(xiàng)目。本實(shí)驗(yàn)采用HPLC法，能有效分離養(yǎng)陰潤肺糖漿中地黃的主要成分梓醇[2]，很好地控制產(chǎn)品質(zhì)量。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 SHIMADZU—LC20A型高效液相色譜儀(日本島津,UV檢測(cè)器)；FA135S型電子分析天平(上海精密儀器儀表有限公司)；KQ-3200DV型數(shù)控超聲波清洗器(昆山超聲儀器有限公司)及各種玻璃儀器[3]。

1.2 試藥 梓醇對(duì)照品(批號(hào)：110808-200508，中國藥品生物制品檢定所)；供試品：養(yǎng)陰潤肺糖漿(批號(hào)：180327，180417，180424)，缺地黃的養(yǎng)陰潤肺糖漿(批號(hào)：180314，陽江市人民醫(yī)院)；乙腈(色譜純)、磷酸(分析純)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 梓醇照高效液相色譜法[4](通則0512)[5]色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)。色譜柱：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，TM-C18(4.6 mm×150 mm，0.5 μm),流動(dòng)相：乙腈-0.1%磷酸溶液(1∶99)；流速：1.0 mL/min；檢測(cè)波長：210 nm；柱溫：25 ℃。進(jìn)樣量10 μL，流速1 mL·min-1。結(jié)果在上述色譜條件下，理論塔板數(shù)按梓醇峰計(jì)算不低于5000，梓醇分離良好，陰性無干擾，如圖1～3所示。

圖1 養(yǎng)陰潤肺糖漿樣品液HPLC圖

圖2 梓醇對(duì)照品液HPLC圖

圖3 缺地黃的養(yǎng)陰潤肺糖漿陰性對(duì)照液HPLC圖

取供試品溶液10 μL，注入高效液相色譜儀中，檢測(cè)，記錄供試品色譜圖，結(jié)果測(cè)得梓醇峰理論塔板數(shù)為5230,分離度為2.431,拖尾因子為1.03，符合規(guī)定。

2.2 對(duì)照溶液的制備 精密稱取干燥至恒重的梓醇對(duì)照品10.0 mg，加流動(dòng)相定容至50 mL，搖勻，得0.2 mg/mL的梓醇對(duì)照品溶液；精密量取上述溶液0.5 mL，置10 mL量瓶中，加流動(dòng)相至刻度，搖勻，即得濃度為10 μg/mL的梓醇對(duì)照品溶液。

2.3 供試品溶液的制備 精密量取養(yǎng)陰潤肺糖漿2.0 mL，加流動(dòng)相定容至50 mL，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。

2.4 陰性對(duì)照液的制備 本院的投料處方去掉地黃，制法: 按照本院投料處方與工藝，制成缺地黃的養(yǎng)陰潤肺陰性對(duì)照糖漿1000 mL(批號(hào)：180314，陽江市人民醫(yī)院)，再按“2.3供試品溶液的制備”方法制備缺地黃的陰性對(duì)照溶液，注入高效液相色譜儀中，測(cè)定，結(jié)果陰性糖漿在梓醇峰相應(yīng)保留時(shí)間位置沒有干擾，如圖3所示。

2.5 線性關(guān)系考察 精密吸取上述制得的0.2 mg/mL的梓醇對(duì)照品溶液1、3、5、7、9 mL分別置100 mL容量瓶中，加流動(dòng)相至刻度，搖勻，即得2 μg/mL、6 μg/mL、10 μg/mL、14 μg/mL、18 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)液。分別吸取10 μL，注入高效液相色譜儀中，測(cè)量峰面積A。以對(duì)照品溶液濃度C為橫坐標(biāo)(X)，峰面積A為縱坐標(biāo)(Y)[6]，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線：Y=5815.5X-3439.1，r=0.9996。結(jié)果梓醇在2～18 μg范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系。

2.6 精密度試驗(yàn) 精密量取對(duì)照品溶液10 μL，連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)定梓醇的峰面積A，結(jié)果平均峰面積為13616.3，RSD=0.14%，結(jié)果表明精密度良好。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批號(hào)(180327，含量為0.2765 mg/mL)的養(yǎng)陰潤肺糖漿6份，按“2.3供試品溶液的制備”方法制備供試品溶液，注入高效液相色譜儀中，測(cè)定，結(jié)果RSD為0.5%，表明本方法重現(xiàn)性良好。

2.8 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一養(yǎng)陰潤肺糖漿(批號(hào)：180327)供試品溶液，分別于供試品溶液制備后的0、2、4、6、8 h進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果RSD=0.05%，表明供試品溶液在制備后8 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.9 準(zhǔn)確度(加樣回收率)試驗(yàn) 取已知含量的養(yǎng)陰潤肺糖漿(批號(hào)：180327、0.2765 mg/mL)各6份，置50 mL量瓶中，再分別加入梓醇對(duì)照品適量，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得加樣回收供試品溶液。吸取供試品溶液各10 μL，分別注入高效液相色譜儀中，計(jì)算回收率，結(jié)果平均回收率為99.4%(n=6)，RSD=0.6%，表明本法準(zhǔn)確度良好，見表1。

2.10 含量測(cè)定 取3批養(yǎng)陰潤肺糖漿，分別按“2.3 供試品溶液的制備”方法制備供試品溶液，吸取供試品溶液各10 μL，分別注入高效液相色譜儀中，測(cè)定并計(jì)算含量，結(jié)果見表2。

表1 準(zhǔn)確度試驗(yàn) (n=6)

表2 含量測(cè)定

3 討論

由于梓醇性質(zhì)的影響，檢測(cè)波長選擇210 nm；梓醇的吸收峰較大且干擾小，效果較好,故選擇210 nm波長。

文獻(xiàn)報(bào)道[7]梓醇 HPLC 圖譜中梓醇色譜峰形不太好，與相鄰峰的分離度不高，對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性易造成影響。本實(shí)驗(yàn)通過實(shí)驗(yàn)進(jìn)行了合理調(diào)整，確定實(shí)驗(yàn)的流動(dòng)相條件以乙腈-0.1%磷酸溶液(1∶99)為流動(dòng)相。由于供試品雜質(zhì)峰比較多，可在供試品制備過程中，先加10 mL甲醇，過微孔濾膜(0.45 μm)，揮干，再加流動(dòng)相溶解并定容至50 mL，供試品雜質(zhì)濃度降低，達(dá)到更理想的分離效果。

本方法快速、方便，分離度好，無其他成分干擾,適合于養(yǎng)陰潤肺糖漿中梓醇的含量測(cè)定。