馬建民，段素云，劉瑩，郭彤

牛至混懸劑對雞體內(nèi)外抗氧化性研究

馬建民，段素云，劉瑩，郭彤*

（北京農(nóng)業(yè)職業(yè)學(xué)院畜牧獸醫(yī)系，北京 102442）

為了研究牛至1 % β-環(huán)糊精混懸劑的抗氧化活性，試驗(yàn)牛至1 % β-環(huán)糊精混懸劑和甲醇提取液對ABTS自由基的體外清除能力，并以40日齡散養(yǎng)北京柴雞為研究對象，以牛至1 % β-環(huán)糊精混懸劑為添加劑，研究牛至1 % β-環(huán)糊精混懸劑對北京柴雞血清中超氧化物歧化酶（SOD）活性和丙二醛（MDA）含量的影響。結(jié)果表明：牛至1 % β-環(huán)糊精混懸劑和甲醇提取液對ABTS自由基的清除能力IC50值分別為0.124 mg/ml和0.157 mg/ml，無顯著差異；牛至混懸劑能極顯著提高北京柴雞血清中的SOD（P<0.01）活性和降低MDA含量（P<0.01）。說明牛至1 % β-環(huán)糊精混懸劑在雞體內(nèi)外均表現(xiàn)出抗氧化活性，可以作為抗氧化添加劑在家禽養(yǎng)殖中推廣和使用。

牛至；抗氧化；北京柴雞；2,2-聯(lián)氮基-雙-二氨鹽；超氧化物歧化酶；丙二醛

家禽生產(chǎn)過程中，可能會由于飼糧中存在的問題，如溫度、光照和通風(fēng)不足、腸道菌群的失衡、飼用抗生素的濫用及細(xì)菌或病毒感染等因素產(chǎn)生氧化應(yīng)激，并因此受到不同程度的氧化損傷[1]。氧化應(yīng)激是動物體內(nèi)存在的過氧化物和自由基數(shù)量超過了其抗氧化能力。在氧應(yīng)激中家禽激活機(jī)體復(fù)雜的調(diào)節(jié)機(jī)制，消耗了自身生長或生產(chǎn)所需要的大量能量來防御氧化損傷，這將導(dǎo)致家禽養(yǎng)殖成本的增加，生產(chǎn)性能或產(chǎn)品品質(zhì)下降。為了提高機(jī)體抗氧化能力，在家禽飼糧中添加抗氧化物質(zhì)是重要的有效緩解氧化應(yīng)激損傷的手段之一[2]。

牛至有效成分牛至精油被證實(shí)具有較強(qiáng)的抗氧化活性[3]，能促進(jìn)家禽生產(chǎn)[4-5]。生產(chǎn)牛至精油類產(chǎn)品，可使用超臨界流體進(jìn)行提取[6]，然后進(jìn)行包膜處理[7-9]，工藝復(fù)雜，成本高，主要原因?yàn)榕Ｖ辆筒蝗苡谒?，易容于有機(jī)溶劑，很難用水浸出。林霜霜[10]研究顯示牛至水提取物抗氧化能力低于有機(jī)溶劑提取物。也有相反的結(jié)論，早克然·司馬義[11]研究牛至水提取物比醇提取物具有顯著的體外清除自由基能力。可能的解釋是，牛至中即含有水溶性和也含精油類脂溶性抗氧化成分。β-環(huán)糊精具有“內(nèi)親油，外親水”的空腔結(jié)構(gòu)，具有促進(jìn)植物中非極性小分子的溶出作用[12]。把牛至粉浸泡于1 % β-環(huán)糊精水溶液中，制成牛至1 % β-環(huán)糊精混懸劑，通過體外和體內(nèi)實(shí)驗(yàn)，評測牛至1 % β-環(huán)糊精混懸劑抗氧化能力，為牛至產(chǎn)品的開發(fā)提供新的思路。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試驗(yàn)動物 2020年9月9日至2020年10月14日，在北京王家磨養(yǎng)殖場選擇160只40日齡北京柴雞。

1.1.2 藥品 牛至，購自玉林市玉州區(qū)菩提藥源食品經(jīng)營部。

1.1.3 主要試劑 2,2-聯(lián)氮基-雙-（3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸）二氨鹽（ABTS）、甲醇（分析純），均購自國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；超氧化物歧化酶（SOD）活性檢測試劑盒、丙二醛（MDA）含量檢測試劑盒，均購自北京索萊寶科技有限公司。

1.1.4 主要儀器 分級超細(xì)連續(xù)式水冷粉碎機(jī)（DLF-555），購自溫州頂歷醫(yī)療器械有限公司；超聲清洗機(jī)（KQ-500DV），購自昆山市超聲儀器有限公司；高速離心機(jī)（GT10-1），購自北京時代北利離心機(jī)有限公司；多功能酶標(biāo)儀（Spectra Max i3X），購自美谷分子儀器（上海）有限公司。

1.2 方法

1.2.1 牛至混懸劑的制備 將牛至干燥，粉碎，過100目篩，得牛至粉。精確稱取牛至粉末20 g，置玻璃瓶中，量取500 ml 1 % β-環(huán)糊精溶液，密封，40 ℃超聲40 min，210 ℃滅菌20 min，得牛至混懸劑。

1.2.2 牛至甲醇提取液 精確稱取牛至粉0.20 g，置離心管中，量取甲醇5 ml，密封，40 ℃ 超聲40 min，離心取上清液，得牛至甲醇提取液。

1.2.3 體外抗氧化能力 供試品溶液的制備：分別精密量取牛至混懸劑和甲醇提取液1 ml，置10 ml容量瓶中，用甲醇定容，混勻，取適量10 000 r/min離心10 min，得供試品溶液。ABTS自由基溶液配制：精密稱取ABTS試劑200 mg，用蒸餾水定容至50 ml容量瓶中，再精密稱取35 mg過硫酸鉀，用蒸餾水定容至50 ml容量瓶中，搖勻后與ABTS水溶液混合，在室溫黑暗處反應(yīng)12~16 ｈ，得ABTS自由基儲備液。再用甲醇稀釋ABTS自由基儲備液，使其在734 nm吸光度值為0.90±0.02，即得ABTS自由基溶液。依次吸取0、2、4、8、16、32 μl供試品溶液置96孔板中，依次加入甲醇70、68、62、54、38 μl，混勻，分別加入ABTS自由基溶液140 μl，避光室溫，反應(yīng)6 min，734 nm測定吸光值，平行3次。根據(jù)以下公式計算ABTS自由基清除率，并計算出半數(shù)抑制率IC50值。

式中：I為供試品溶液對ABTS自由基的清除率；A0為ABTS自由基空白對照的吸光度值；AS為供試品溶液與ABTS自由基反應(yīng)后的吸光度值。

1.2.4 試驗(yàn)動物分組與給藥 北京柴雞按體重隨機(jī)分為對照組和試驗(yàn)組，每組兩個重復(fù)，每個重復(fù)40只北京柴雞。每組北京柴雞置50 m2欄中散養(yǎng)。對照組飼喂基礎(chǔ)飼糧，參照NRC（1994）蛋雞的營養(yǎng)需要配制，試驗(yàn)組每0.6 kg基礎(chǔ)飼糧添加100 ml牛至混懸劑，進(jìn)行拌飼給藥。試驗(yàn)期間動物自由采食和飲水。試驗(yàn)為期35 d，其中前7 d為預(yù)試期，各組均飼喂基礎(chǔ)飼糧，正試期28 d，按組別飼喂各組飼糧。

1.2.5 血清中SOD活性檢測和MDA含量測定 在正試期的第28 d從各重復(fù)中選取5只試驗(yàn)北京柴雞，翅下靜脈采血3 ml，靜置1 h后于4 000 r/min離心10 min，分離血清，采用試劑盒法測定血清MDA含量和SOD活性。

1.2.6 統(tǒng)計學(xué)分析 采用SPSS21.0軟件對試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計分析，試驗(yàn)數(shù)據(jù)以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示，采用t檢驗(yàn)對實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行差異顯著性分析，P＜0.05表示差異顯著，P＜0.01表示差異極顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 牛至混懸劑清除ABTS自由基的能力

ABTS在過硫酸鉀作用下被氧化成綠色的ABTS自由基，抗氧化物抑制ABTS自由基的產(chǎn)生，使得綠色變淡，因此在734 nm處測量加入抗氧化物質(zhì)前后ABTS自由基的吸光度值變化，可以計算出樣品的總抗氧化能力。牛至混懸劑和甲醇提取液對ABTS自由基的清除能力結(jié)果見表1。

表1 供試品溶液對ABTS自由基的清除能力

在測量范圍內(nèi)，隨著牛至混懸劑和甲醇提取液濃度的增加，對ABTS自由基的清除能力都呈現(xiàn)出對數(shù)增加，半數(shù)抑制率IC50分別為0.124 mg/ ml和0.157 mg/ml。牛至混懸液對ABTS自由基的清除能力略高于牛至甲醇提取液，但統(tǒng)計學(xué)檢測差異不顯著。

2.2 牛至混懸劑對北京柴雞血清抗氧化指標(biāo)的影響

表2 牛至混懸劑對北京柴雞血清抗氧化指標(biāo)的影響

注：同列數(shù)據(jù)進(jìn)行比較，大寫字母完全不同表示差異極顯著（P＜0.01）

由表2可知，與對照組相比，飼糧添加牛至混懸劑極顯著降低北京柴雞血清MDA含量和極顯著提高血清SOD活性。

3 討論

3.1 牛至混懸劑雞體外抗氧化能力

牛至混懸劑對ABTS自由基的清除能力高于牛至甲醇提取液。β-環(huán)糊精促進(jìn)了牛至中揮發(fā)油成分的溶出，提高了水溶液的抗氧化水平。

3.2 牛至混懸劑雞體內(nèi)抗氧化能力

生物體內(nèi)，氧化應(yīng)激過程中產(chǎn)生的自由基作用于脂質(zhì)發(fā)生過氧化反應(yīng)，其氧化終產(chǎn)物MDA，會引起蛋白質(zhì)、核酸等生命大分子的交聯(lián)聚合，且具有細(xì)胞毒性。MDA含量是反映機(jī)體抗氧化潛在能力的重要參數(shù)，可以反映機(jī)體脂質(zhì)過氧化速率和強(qiáng)度，也能間接反映組織過氧化損傷程度。SOD是機(jī)體代謝所產(chǎn)生內(nèi)源性抗氧化酶，清除機(jī)體產(chǎn)生的自由基，活性高低可反應(yīng)機(jī)體抗氧化的防御能力。北京柴雞用牛至混懸劑按照每0.6 kg飼糧添加100 ml懸液，進(jìn)行拌飼給藥能及顯著提高血清中SOD活性和降低MDA含量，具有良好的抗氧化應(yīng)激作用。

4 結(jié)論

牛至混懸劑制備簡單，體外抗氧化活性高于牛至甲醇提取物，能極顯著增加家禽抗氧防御能力，減少家禽的氧化應(yīng)激損傷?？梢宰鳛橹参锟寡趸苿┰谛竽琉B(yǎng)殖中進(jìn)行推廣。

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*通訊作者

（2020–10–28）

S816.76

A

1007-1733（2021）01-0014-03