李建英，宮 月，邢 慶

（黑龍江江世藥業(yè)有限公司，黑龍江 哈爾濱 150069）

注射用骨肽（I）系采用現(xiàn)代生物技術，以胎牛四肢骨為原料提取的，加適量輔料甘露醇制成的無菌凍干粉，含有多種骨代謝類細胞生長因子，具有調節(jié)骨代謝，刺激成骨細胞增殖，促進新骨形成的作用。用于增生性骨關節(jié)疾病，風濕、類風濕性關節(jié)炎的治療，具有促進骨折愈合的功效。本文重點研究了注射用骨肽（I）促骨愈合的療效及其作用機制。

1 材 料

1.1 藥物與主要試劑

注射用骨肽（I），（黑龍江江世藥業(yè)有限公司生產，規(guī)格10mg/支，批號1907303）。水合氯醛（麒麟實業(yè)有限公司生產，批號1705323），滅菌注射用水（山東華魯制藥有限公司生產，批號 1801282）；氯化鈉注射液（哈爾濱三聯(lián)藥業(yè)有限公司，批號 170110D10）。大鼠轉化生長因子β1（TGF-β1）酶聯(lián)免疫試劑盒(武漢生物純度有限公司，批號 201806）。大鼠骨形態(tài)發(fā)生蛋白（BMP）酶聯(lián)免疫試劑盒(武漢生物純度有限公司，批號 201806）。

1.2 實驗動物

健康雄性大鼠28只，體重120～160g，由遼寧長生生物技術股份有限公司提供，許可證號：SCXK（遼）2015-0001，編號：211002300022971

1.3 主要儀器

電子天平（型號JJ2000，編號DWS-YQ-084）；超凈工作臺（型號CJ-2F，編號DWS-YQ-085）；X射線機（型號BLX-5，編號DWS-YQ-088）；離心機（型號5245，編號DWS-YQ-065）；酶標儀（型號ST-360,編號DWS-YQ-077）。

2 方 法

選用健康雄性 SD大鼠28只，隨機選取健康 SD大鼠8只，作為注射用骨肽（ I）對照組。余下20只，將其用5%的水合氯醛腹腔麻醉，在翻正反應消失后，將其仰臥固定，左后肢去毛后用酒精將皮膚消毒，沿著左后脛骨粗隆下外側縱行切開皮膚1.5～2 cm，剝離肌肉，避開神經血管，暴露脛骨，在脛骨粗隆下約0.5 mm處，用鋼鋸形成1.5mm×1mm骨折。逐層縫合包扎傷口后，用高分子樹脂繃帶固定[1-2]。 仰臥拍攝X光片，根據(jù)骨折程度篩選16只，隨機分為骨折不治療模型組、注射用骨肽（I）治療組，每組8只。注射用骨肽（I）治療組給予注射用骨肽（I）4.49mg/kg，1次/d，連續(xù)兩周。骨折不治療模型組給予等容量生理鹽水，1次/d，連續(xù)兩周。為排除骨折情況下自身 TGF-β1、 BMP水平升高因素的影響，注射用骨肽（I）對照組給與治療組同等劑量注射用骨肽（I），1次/ d，連續(xù)兩周。分別在給藥第7天、第14天，給藥后30min后，5%水合氯醛麻醉，尾緣靜脈取血測定血清中TGF-β1、BMP水平；給藥第21天，麻醉后拍攝X光片，對脛骨骨折程度進行評分。 評分標準為3級：骨折斷口清晰，可見骨縫線、或出現(xiàn)錯位； 2級：骨折斷口模糊，可見骨縫線、或出現(xiàn)錯位； 1級：骨折斷口模糊，骨縫線消失，見少量凹陷； 0級： 骨折消失，斷口愈合。

3 結 果

數(shù)據(jù)結果均以（ ±S）表示。采用SPSS for Windows 21.0軟件對數(shù)據(jù)進行分析處理。多樣本組間均數(shù)比較采用單因素方差分析(One-Way ANOVA)和LSD多重比較分析法進行。顯著水平α=0.05，P＜0.05為具有統(tǒng)計學意義。

注射用骨肽（I）治療組給藥兩周血清TGF-β1、BMP水平明顯升高，且明顯高于其他兩組，差異顯著（P＜0.05）；注射用骨肽（I）對照組給藥兩周血清TGF-β1、BMP水平明顯升高，且高于骨折不治療模型組，見表1。跟骨折不治療模型比較，注射用骨肽（I）治療組給藥3周骨折程度明顯減輕，愈合率明顯升高。差異顯著（P＜0.05），見表2。

表1 注射用骨肽（I）對大鼠生長因子的影響

表2 注射用骨肽（I）對骨折大鼠的治療作用

4 討 論

骨折是指骨的完整性破壞或連續(xù)性中斷，骨折愈合是一個復雜的生理過程，分為血腫炎癥機化期、骨痂形成期、骨痂塑形期三個階段。隨著現(xiàn)代骨科的發(fā)展，骨折愈合已經從傳統(tǒng)的機械治療向分子生物學治療的方向演變，眾多研究證實多種促進骨折愈合的骨代謝生長因子在骨折愈合和重塑過程起了十分重要[3]。這類因子包括: 骨形態(tài)發(fā)生蛋白（BMP）, 轉化生長因子、胰島素樣生長因子、成纖維細胞生長因子等。其中起主要作用的是骨形態(tài)發(fā)生蛋白以及轉化生長因子。

骨形態(tài)發(fā)生蛋白（ BMP）是廣泛存在于骨基質中的一種酸性多肽，可誘導成骨活性，誘導血管周圍游走間充質細胞或骨髓基質干細胞轉化為骨細胞和軟骨細胞，促進新骨形成，達到修復骨折的功效[4]。骨形態(tài)發(fā)生蛋白具有抑制破骨細胞的生成及其功能，在骨痂改建中起到重要作用[5]。本實驗結果顯示，骨折大鼠給藥2周，血清骨形態(tài)發(fā)生蛋白明顯升高，藥物能促進骨形態(tài)發(fā)生蛋白分泌，加快骨折愈合進程[6-8]。

轉化生長因子是一族具有多種功能的蛋白多肽，廣泛存在于動物正常組織細胞以及轉化細胞中，具有促進細胞增殖、調節(jié)細胞分化、促進細胞外基質合成作用、拮抗炎性細胞因子的作用[9]。本實驗結果顯示，骨折大鼠給藥2周，血清轉化生長因子水平明顯升高。具有消炎促進骨折愈合的作用。

綜上所述，注射用骨肽（I）能促進人體中骨形態(tài)發(fā)生蛋白和轉化生長因子的合成，兩者協(xié)同作用，誘導間充質細胞轉化為骨細胞和軟骨細胞，促進骨痂的形成，加快骨折愈合的過程，注射用骨肽（I）采用胎牛四肢骨為原料，牛的BMP與人類的BMP的分子量最為接近，組織相容性等方面優(yōu)于豬骨及其他動物骨。且新生牛的BMSCs的增殖能力和活性更強。新生動物相比于成年動物細胞增殖能力更強，活性更好。注射用骨肽（I）在治療骨折方面優(yōu)勢明顯，效果顯著。