韓 智 龔 蕾 王會霞 - 江 豐

(1. 湖北省食品質(zhì)量安全監(jiān)督檢驗研究院，湖北 武漢 430070；2. 湖北省食品質(zhì)量安全檢測工程技術(shù)研究中心，湖北 武漢 430070)

定量核磁共振波譜(Qualitative Nuclear Magnetic Resonance, qNMR)是20世紀(jì)新興的食品分析檢測技術(shù)，經(jīng)過近60年的發(fā)展，已成為食品科學(xué)、食品分析、食品認證、食品質(zhì)量控制的重要工具。與常用的現(xiàn)代分析技術(shù)如色譜法(氣相色譜、液相色譜、薄層色譜)、波譜法(質(zhì)譜、紫外可見光譜、傅里葉變換紅外光譜、拉曼光譜)、電泳法(聚丙烯酰胺凝膠電泳、毛細管電泳)、免疫分析法、微生物學(xué)和遺傳學(xué)分析法相比，qNMR在化合物定量方面具有許多優(yōu)點，其允許對樣品進行無損定量分析，所需樣品量少，還具有高精密度、準(zhǔn)確度、靈敏度、特異性、耐用性等優(yōu)點，具有與色譜技術(shù)相媲美的適用性[1-3]。此外，qNMR還具有分析時間短、重現(xiàn)性高的特點，也不需要標(biāo)準(zhǔn)品即可進行定量[4-5]。

磷是人體必需元素，但過量攝入會引起高磷血癥，磷的缺乏又會引起軟骨病[6]。31P原子核天然豐度為100%，靈敏度為1H的1/15，在核磁共振掃描(NMR)中具有較大范圍的化學(xué)位移(約7.00×10-4)，不同的含磷化合物能得到有效分離，因此定量核磁共振磷譜(31P-qNMR)技術(shù)是一種可靠的定量分析工具[7]。近年來，31P-qNMR技術(shù)被廣泛應(yīng)用于橄欖油等級鑒定、畜禽肉新鮮度鑒別、牛奶中甘油磷酰膽堿定量測定、酪蛋白中磷脂酰絲氨酸定量測定、淀粉來源辨別、聚磷酸鹽螯合劑的檢測、果蔬中有機磷農(nóng)藥定量測定等[8]。

目前，國內(nèi)外有關(guān)31P-qNMR的綜述包括人體磷脂研究[9]、橄欖油等級鑒定[10]、食品科學(xué)應(yīng)用[11]、土壤分析應(yīng)用[12]、食品脂質(zhì)研究[13]、qNMR的高級應(yīng)用[14]。但在食品分析檢測中的研究尚未見報道。文章擬對31P-qNMR技術(shù)在磷脂、磷酸鹽、功能成分、純度分析、有機磷農(nóng)藥降解規(guī)律等方面的研究進行系統(tǒng)綜述，旨在為31P-qNMR在食品分析檢測中的應(yīng)用提供依據(jù)。

1 31P-qNMR定量原理

定量核磁的基本原理為圖譜中信號的響應(yīng)值(即峰面積)與所檢測的核(如31P)的數(shù)目呈正比，與核的化學(xué)性質(zhì)無關(guān)，一般只需對該化合物中某一基團上質(zhì)子引起的峰面積進行比較，即可求出其絕對含量[15]。

qNMR定量方法主要有兩種：① 相對定量法(外標(biāo)法)，稱取一定已知含量的標(biāo)準(zhǔn)品配成一系列不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，相同試驗條件下，以特征峰面積為縱坐標(biāo)、濃度為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，測定未知樣品溶液的NMR譜圖，計算其相應(yīng)的峰面積，由標(biāo)準(zhǔn)曲線推算未知樣品濃度。② 絕對定量法(內(nèi)標(biāo)法)，選擇已知準(zhǔn)確含量的標(biāo)準(zhǔn)物作為內(nèi)標(biāo)物，在未知樣品溶液中加入已知量的內(nèi)標(biāo)，由內(nèi)標(biāo)化合物特征峰面積與樣品中某一特征峰面積的比值即可計算樣品濃度，內(nèi)標(biāo)法是qNMR最常見的定量方法，其計算公式為[16]:

(1)

式中：

mx——待測物含量，mg/L；

mstd——內(nèi)標(biāo)含量，mg/L；

Mx——待測物分子量；

Mstd——內(nèi)標(biāo)分子量；

Ax——待測物定量峰信號面積；

Astd——內(nèi)標(biāo)物定量峰信號面積；

nx——待測樣品定量峰包含的磷原子數(shù)；

nstd——內(nèi)標(biāo)物包含的磷原子數(shù)。

2 31P-qNMR定量分析的影響因素

采樣參數(shù)(觀測核、中心頻率、譜寬、采樣點數(shù)、增益)、脈沖序列參數(shù)(脈沖寬度、射頻場強、延遲時間、掃描次數(shù))、數(shù)據(jù)處理參數(shù)(窗函數(shù)、變換點數(shù)、線性因子)等均會影響31P-qNMR的定量結(jié)果[17]。在實際分析檢測中，標(biāo)準(zhǔn)品的選擇、延遲時間、掃描次數(shù)對試驗結(jié)果的影響較大。

2.1 標(biāo)準(zhǔn)品的選擇

qNMR試驗所選的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)具有結(jié)構(gòu)穩(wěn)定、純度較高、易溶于氘代試劑、不與樣品中任何成分發(fā)生反應(yīng)、與樣品定量峰分離度好、信號明顯易識別等特點[15]。常用的31P-qNMR標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)有2-氨基乙基膦酸[18]、甲胺磷[19]、膽固醇[20]、磷酸[21]、六甲基磷酰三胺[22]、亞甲基二膦酸[23]、甲基膦酸[6]、磷酸鈉[4]等。

2.2 延遲時間

延遲時間(D1)直接影響激發(fā)核能否恢復(fù)至平衡基態(tài)，而能否恢復(fù)基態(tài)影響核磁的響應(yīng)信號，因此合適的D1對qNMR定量結(jié)果影響較大，一般認為qNMR的D1≥5T1(5倍弛豫時間)。過長的D1增加了單次掃描所需的時間，通過加入順磁物質(zhì)可以縮短延遲時間，還可以引入校正因子f校正D1時間不足導(dǎo)致的定量偏差[24-25]。

2.3 掃描次數(shù)

相同操作條件下，靈敏度與掃描次數(shù)呈正比[17]，掃描次數(shù)太少，數(shù)據(jù)重現(xiàn)性差，對于痕量物質(zhì)的分析可以增加掃描次數(shù)，以此提高儀器的靈敏度，降低物質(zhì)的檢出限。但掃描次數(shù)過多會造成試驗效率低，因此qNMR定量需優(yōu)化掃描次數(shù)，使掃描時間和靈敏度達到最佳平衡。

3 31P-qNMR在食品檢測中的應(yīng)用

3.1 食品活性磷脂分析檢測

磷脂幾乎存在于所有機體細胞中，動物磷脂主要來源于蛋黃、牛奶、動物體腦組織、肝臟、腎臟及肌肉組織，植物磷脂主要存在于油料種子中；磷脂具有生物學(xué)功能，受到世界各國的廣泛關(guān)注[18]。傳統(tǒng)的磷脂檢測方法有索氏提取法、酸水解法和氯仿—甲醇提取法等，但存在耗時長，有機溶劑消耗量大的缺點，且具有毒害作用[13]。

Spyros等[7]使用2-氯-4,4,5,5-四甲基二氧磷雜環(huán)烷與單甘油脂和雙甘油三酯的游離羥基進行磷酸化，在NMR譜圖中將磷的響應(yīng)峰進行歸一化積分，得到初榨橄欖油中單甘油脂和雙甘油脂的準(zhǔn)確含量。Yao等[26]利用31P-qNMR比較了水提和酶輔助水提兩種不同處理方法對全脂大豆粉、豆粕、擠壓膨化豆粕及奶油中磷脂含量的影響，發(fā)現(xiàn)使用酶輔助水提的得率更高，該方法使用氯仿—甲醇—乙二胺四乙酸銫混合提取液提取磷脂類化合物，通過NMR直接上機定量測定，各種磷脂在譜圖中得到了較好的分離，奶油中總磷脂含量為0.09%～0.75%，游離油脂含量為6%～78%。Brinkmann-Trettenes等[27]以磷酸三甲酯為內(nèi)標(biāo)，通過改變提取溶液的pH值，定量檢測二肉豆蔻酰磷脂酰膽堿、二肉豆蔻酰磷脂酰乙醇胺、二肉豆蔻酰磷脂酰甘油、雙磷脂酰甘油4種磷脂，此4種磷脂化合物在譜圖中分離度好，定量限為1.30 mmol/L，相比于傳統(tǒng)的酶法測定，qNMR法抗干擾能力強，適合深色樣品的測定，方法的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)為1.0%～8.7%，重復(fù)性RSD<3%。Garcia等[28]以MDPA為外標(biāo)，氘代氯仿—甲醇—5 mmol/L環(huán)己二胺四乙酸銫(V氘代氯仿∶V甲醇∶V環(huán)己二胺四乙酸銫=100∶40∶20)為提取試劑，分別鑒定出人奶、馬奶、駱駝奶、牛奶中含有12，11，9，7種磷脂，人奶和駱駝奶中的鞘磷脂和縮醛磷脂含量更高，分別為78.3，117.5 μg/mL，縮醛磷脂含量分別為27.3，24.0 μg/mL，這兩種物質(zhì)對嬰幼兒的發(fā)育具有重要作用；磷脂總含量從高到低依次為駱駝奶、人奶、牛奶、馬奶，含量分別為0.503，0.324，0.265，0.101 mmol/L，該檢測方法具有靈敏度高、前處理簡單、損失較少的優(yōu)點，適合嬰兒母乳替代品、營養(yǎng)強化劑和保健食品中磷脂含量的檢測。Lucas-Torres等[29]利用31P-qNMR研究了常規(guī)加熱和微波加熱對橄欖油質(zhì)量的變化情況，結(jié)果顯示常規(guī)加熱會導(dǎo)致二酰甘油和游離脂肪酸含量顯著增加，進而損害橄欖油質(zhì)量，微波加熱可使橄欖油中二酰甘油之間存在異構(gòu)化反應(yīng)，可延長橄欖油的保質(zhì)期。Dais等[30]利用高分辨率多核(1H，13C，31P)及多維NMR光譜，使用復(fù)雜的二維NMR試驗，對魚油中的各種成分進行了系統(tǒng)的二維分析，結(jié)果表明n-1?；満头词街舅岬暮糠秶謩e為1.9%～2.9%，3.7%～5.2%。

崔常樂等[31]利用31P-qNMR測定了大豆磷脂中的磷脂酰膽堿，發(fā)現(xiàn)定量結(jié)果普遍比高效液相色譜蒸發(fā)光散射檢測法(HPLC-ELSD)的偏大，可能是因為核磁的overhauser效應(yīng)(NOE)帶來了積分誤差，通過重復(fù)測定，使用校正系數(shù)f將31P-qNMR的結(jié)果進行校正，結(jié)果準(zhǔn)確。Malmos等[32]利用qNMR技術(shù)對黑巧克力中卵磷脂及銨磷脂類乳化劑類型及含量進行了精確定性定量分析，方法定量限為1.1～1.9 g/kg，準(zhǔn)確度為4%～12%，精密度為11%～19%。Mayar等[33]比較了膽酸緩沖鹽、CHCl3-MeOH-H2O混合提取液及甲醇對磷脂和溶血磷脂的提取效率，結(jié)果顯示用甲醇重復(fù)提取3次的回收率和穩(wěn)定性好，在400，700 MHz核磁波譜儀上的定量限分別為0.15，0.10 mg/g，加標(biāo)回收率為96%～108%。Van等[34]利用400 MHz核磁定量測定了植物油原油和精煉油中磷脂和含磷降解產(chǎn)物，發(fā)現(xiàn)不同pH對不同磷脂的分離及峰型有顯著影響，選擇pH為9.0的提取試劑提取8種磷脂，并測定了不同目標(biāo)物的弛豫時間T1為0.9～10.6 s，選擇15 s作為定量，并用校正因子f=1.11校正延遲時間最長的化合物，得8種化合物的回收率為94%～100%，定量限為100 μmol/100 g。

3.2 磷酸鹽分析檢測

磷酸鹽是食品工業(yè)常用的食品添加劑，可用作水分保持劑、膨松劑、酸度調(diào)節(jié)劑、穩(wěn)定劑、凝固劑、抗結(jié)劑。常用的磷酸無機鹽檢測方法為離子色譜法，但該方法存在陰性離子干擾多、前處理復(fù)雜的缺點。

Sojka等[35]鑒別出市售三聚磷酸鈉中含有焦磷酸鈉、三偏磷酸鈉、磷酸氫二鈉3種雜質(zhì)，并定量測出其含量，同時指出使用去耦脈沖序列可能會產(chǎn)生NOE效應(yīng)，使核磁共振信號增強，造成定量結(jié)果偏大。Stanislawski等[24]在含有多種磷酸鹽的混合溶液中添加順磁試劑4-氨基-2,2,6,6-四甲基哌啶酰氧基，縮短了各化合物的弛豫時間，猝滅了NOE效應(yīng)，使用NMR采集時間2 h，定量測定了三偏磷酸鈉、四偏磷酸鈉、磷酸氫二鈉、焦磷酸鈉，其檢出限為200 mg/kg。Belloque等[36]使用31P-qNMR測定了牛奶中的無機磷和磷酸絲氨酸，使用外標(biāo)法定量，單個樣品采集時間1.7 h，無機磷的線性范圍為162～1 993 mg/kg，磷酸絲氨酸的線性范圍為38～402 mg/kg，利用此方法測得牛奶中含有焦磷酸鹽含量為58～576 mg/kg。Hrynczyszyn等[23]利用亞甲基二膦酸作為外標(biāo)，利用硼酸—EDTA堿式緩沖液提取了肉制品中的4種磷酸鹽KH2PO4, Na2H2P2O7, K4P2O7和Na5P3O10，其回收率為95%～99%，回收率變異系數(shù)≤5%；該方法具有良好的精密度，變異系數(shù)為0.39%～3.40%，試驗發(fā)現(xiàn)利用水直接提取肉制品中磷酸鹽的提取率較低(<90%)，使用緩沖鹽提取的回收率較高。Szyk等[22]利用六甲基磷酰三胺作為內(nèi)標(biāo)試劑，使用硼酸-EDTA堿式緩沖液測定了肉制品中的4種磷酸鹽Na2H2P2O7、K4P2O7、Na5P3O10、Na3P3O9，使用校正因子f校正HMPA和磷酸鹽的磷原子響應(yīng)當(dāng)量，掃描參數(shù)為延遲時間5 s，掃描次數(shù)196，使用此方法的回收率為96.5%～98.0%，檢出限為32 mg/kg，定量限為82 mg/kg。K?llo等[6]以甲基膦酸作為內(nèi)標(biāo)物，對10種市售飲料中的磷酸鹽進行了分析，飲料經(jīng)NaOH固定pH值使其化學(xué)位移不發(fā)生變化，經(jīng)直接上機測試，樣本中的磷酸鹽濃度為3.5～6.1 mmol/L。盧愛民等[37]建立了核磁共振磷譜(31P-NMR)快速測定可樂飲料中的磷酸根含量的定量分析方法，以磷酸二氫鉀(KH2PO4)配制標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，在0.25～4.00 mg/mL濃度范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系。將該方法用于可樂中磷酸根含量的測定，測得可口可樂和百事可樂中的磷酸根含量分別為0.846 2，0.908 4 mg/mL，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為0.44%，0.46%，加標(biāo)回收率分別為96.4%，109.7%。

3.3 功能成分的分析檢測

植物中有效成分的確定一般包含提取、純化及鑒定，鑒定常采用X晶體衍射、紫外及紅外輔助定性，NMR技術(shù)則能確定化合物的構(gòu)型及立體結(jié)構(gòu)。Christophoridou等[38]使用亞磷酸化環(huán)己醇作為內(nèi)標(biāo)物，利用31P核磁共振波譜檢測和定量酚類化合物，該方法利用衍生試劑2-氯-4,4,5,5-四甲基二氧磷雜環(huán)烷與酚類化合物的羧基進行衍生結(jié)合，根據(jù)31P化學(xué)位移識別亞磷酸化化合物，通過整合31P核磁共振波譜中的適當(dāng)信號，可實現(xiàn)初榨橄欖油中大量酚類化合物的定量，該研究定量了20種酚酸，如鄰香豆酸、對香豆酸、阿魏酸、咖啡酸等；研究了不同溫度下化學(xué)位移的改變，當(dāng)溫度為20～30 ℃時，化學(xué)位移偏移了2.0×10-8～6.0×10-8；利用順磁物質(zhì)乙酰丙酮鉻的順磁性降低了磷原子核的弛豫時間，從而縮短了檢測時間。Crestini等[20]采用定量31P核磁共振和二維異核核磁共振波譜相結(jié)合的新分析方法，測定了兒茶、五味子和金合歡中原花青素的化學(xué)成分，以乙酰丙酮鉻作為松弛劑，吡啶和氘代氯仿(V吡啶∶V氘代氯仿=1.6∶1.0)作為提取液，膽固醇作為內(nèi)標(biāo)，加入2-氯-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧磷烷作為衍生試劑，將樣品在20 ℃下溫浴60 min，上機測試，通過分析原花青素中黃烷-3-醇的A-、B-、C-環(huán)基團，鑒定出黃烷-3-醇單元的氧化模式，同時獲取了原花青素樣品的指紋圖譜，并通過異核單量子關(guān)系(HSQC)技術(shù)測定了其純度。Melone等[39]報道了一種前所未有的qNMR分析方法，該方法可以同時對單寧中的所有官能團進行結(jié)構(gòu)和定量表征，使用2-氯-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧磷雜環(huán)烷引物原位標(biāo)記所有不穩(wěn)定的H基(脂肪族、酚羥基和羧酸)，使用31P-NMR定量測定其含磷官能團，為復(fù)雜的生物活性多酚化合物的結(jié)構(gòu)鑒定和定量提供了可能。

3.4 有機磷農(nóng)藥檢測

31P-NMR技術(shù)在有機磷化合物中應(yīng)用廣泛，包括有機磷農(nóng)藥抑制乙酰膽堿酯酶的機理、有機磷農(nóng)藥的毒性與分子結(jié)構(gòu)關(guān)系、人體中有機磷農(nóng)藥代謝研究、有機磷農(nóng)藥的復(fù)合解毒劑研究、環(huán)境和食品中農(nóng)藥殘留研究、有機磷在環(huán)境中的降解、有機磷在解毒劑中降解機理研究等[40]。Gurley等[41]利用31P-qNMR技術(shù)研究了有機磷農(nóng)藥，通過使用弛豫試劑減少掃描時間，25 min內(nèi)的方法檢出限為25 μg/mL。Mortimer等[42]使用31P-qNMR測定了10個西藍花和卷心菜中的有機磷農(nóng)藥(二硫醚，二嗪酮，樂果、對硫磷、甲基疊氮磷)，以三苯基膦作為內(nèi)標(biāo)，延遲時間為1.0 s，掃描次數(shù)4 800次，其檢出限達0.5 mg/kg。Krolski等[43]研究了二硫代磷酸酯類農(nóng)藥在土壤中的代謝，發(fā)現(xiàn)硫丙磷主要有硫丙磷亞砜和硫丙磷砜兩種代謝產(chǎn)物，90 d后硫丙磷降解完全，轉(zhuǎn)化為硫丙磷亞砜和硫丙磷砜，其含量分別為64%，36%。Talebpour等[44]利用六甲基磷酰三胺作為內(nèi)標(biāo)，用甲醇提取番茄中的敵百蟲，并直接進行NMR定量分析，方法的檢出限為55 mg/kg，重復(fù)性≤9.0%，平均回收率為99%～112%，31P-qNMR 技術(shù)解決了因敵百蟲不穩(wěn)定而造成氣相色譜和液相色譜都不易測定的難題。Molaabasi等[45]以苯線磷和乙酰甲胺磷作為內(nèi)標(biāo)物質(zhì)，使用NMR研究了環(huán)糊精對有機磷農(nóng)藥苯丙胺進行手性對映體的識別，兩種手性對映體的化學(xué)位移分別為5.54×10-6，5.66×10-6，檢出限分別為0.006 8，0.006 0 mg/mL，并以香蕉汁為對象進行加標(biāo)回收試驗，其回收率為94%～107%。Ansari等[19]建立了31P-qNMR同時檢測水介質(zhì)中4種有機磷農(nóng)藥(丙硫磷、溴苯磷、異柳磷、甲胺磷)的新方法，該方法的延遲時間為24 s，掃描次數(shù)為128～256次，內(nèi)標(biāo)為甲胺磷，其定量限為0.10～2.60 mg/L，加標(biāo)回收率為82%～94%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差<4%，該方法簡單、無基質(zhì)干擾、選擇性強、快速，可應(yīng)用于其他樣品基體。周霞云[16]利用磷酸三苯酯作為內(nèi)標(biāo)，使用qNMR定量測定毒死蜱和甲基對硫磷，兩種化合物的加標(biāo)回收率分別為87.25%～92.70%，79.8%～93.1%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為0.90%～2.46%，0.85%～1.56%。Belmonte-Sánchez等[46]利用31P-qNMR 定量測定了蔬菜中洗滌劑羥基亞乙基二膦酸(HEDP)，使用Na2HPO4作為內(nèi)標(biāo)校正，HEDP的線性范圍為0.01%～0.05%，延遲時間為0.01 s，掃描時間為1 min 時方法的檢出限為0.017%，掃描時間為60 min時的檢出限為0.003%，方法的加標(biāo)回收率為95.0%～105.4%，10種蔬菜洗滌液中HEDP含量為0.003%～0.050%。

3.5 化合物純度及不確定度評價

NMR被廣泛應(yīng)用于食品分析用標(biāo)準(zhǔn)品純度及不確定度評價、農(nóng)藥純度鑒定等領(lǐng)域。Greenhalgh等[47]使用磷酸三苯酯作為內(nèi)標(biāo)，使用乙酰丙酮鉻作為順磁試劑測定了11種工業(yè)級有機磷殺毒劑的純度和主要雜質(zhì)含量。Al-Deen等[4]以磷酸鈉作為內(nèi)標(biāo)物質(zhì)測定草甘膦和丙溴磷純度，使用1H-NMR 測得草甘膦純度為97.07%，σ= 0.68，使用31P-qNMR測其純度為96.53%，σ= 0.90；使用1H-NMR測得丙溴磷純度為94.63%，σ= 0.14，使用31P-NMR 測其純度為94.62%，σ= 0.59。Al-Deen等[48]使用31P-qNMR法測定了草甘膦純度的不確定度，單次測定純度的擴展不確定度為0.82%(95%置信區(qū)間，k=2)。Shamsipur等[21]使用磷酸作為內(nèi)標(biāo)，用31P-qNMR檢測敵百蟲、毒死蜱、殺螟松、二嗪農(nóng)、草甘膦5種有機磷農(nóng)藥純度，其線性范圍為25～300 mg/L，前4種農(nóng)藥檢出限為3 mg/L，草甘膦檢出限為16.3 mg/L，分析結(jié)果與氣相色譜儀檢測結(jié)果無顯著性差異，使用該方法不需要任何前處理，方便簡潔，可快速測定農(nóng)藥中的有效純度。盧愛民等[49]以重水為溶劑、磷酸二氫鉀為內(nèi)標(biāo)，以化學(xué)位移δ0.017，δ41.86作為定量峰，根據(jù)公式計算出草銨膦原藥的有效成分含量，測得同一批次原藥中有效成分含量平均值為98.73%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.18%，此方法簡單、快捷，不需要待測組分標(biāo)準(zhǔn)品，可用作一些特殊樣品的定性定量分析。Weber等[50]使用同時含有H和P原子的磷酸三苯酯，以有證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)(CRM)磷酸三苯酯為內(nèi)標(biāo)，用31P-qNMR法測得磷酸三(2-氯乙基)磷酸酯純度為(98.43±0.66)%，以膦乙酸作為內(nèi)標(biāo)測其純度為 (98.45±0.44)%。分別使用磷酸三苯酯和膦乙酸作為內(nèi)標(biāo)，以1H-qNMR作為定量，其純度分別為(98.41±0.53)%，(98.88±0.52)%。使用31P-NMR的圖譜簡單、定量分析快速，是一種很有前途的純度測定方法。

4 結(jié)論及展望

定量核磁共振磷譜技術(shù)不需要待測物的標(biāo)準(zhǔn)品即可完成對未知物的定量分析，原理易懂、前處理簡單、準(zhǔn)確度高，被廣泛應(yīng)用于食品活性磷脂檢測、磷酸鹽檢測、有機磷農(nóng)藥檢測、生物活性物質(zhì)檢測及標(biāo)準(zhǔn)品純度鑒定等方面，是一種強大的分析工具。但是定量核磁共振磷譜也存在一定的缺陷，比如靈敏度不高，對微量成分進行準(zhǔn)確定量仍存在難度，需進一步開發(fā)適合31P檢測的高靈敏度的探頭；并且核磁共振設(shè)備的普及率遠不及其他色譜儀器，從而限制了這項技術(shù)的廣泛應(yīng)用。但是隨著科技的發(fā)展量核磁共振技術(shù)必將會迎來廣闊的應(yīng)用前景。