陳 躍，趙 春 ，趙 娜

(溫州市中醫(yī)院 1.檢驗(yàn)科；2.神經(jīng)內(nèi)科，浙江 溫州 325000)

缺血性腦卒中是因血管阻塞而導(dǎo)致的腦組織缺血性損傷，具有高發(fā)病率、高致殘率和高死亡率的特點(diǎn)[1]。缺血性腦卒中多由細(xì)胞炎癥因子、氧化應(yīng)激反應(yīng)等導(dǎo)致的冠脈粥樣硬化引起[2]。有研究[3]表明，早期強(qiáng)化治療可提高缺血性腦卒中患者日常生活活動能力的恢復(fù)速度，故早期診斷缺血性腦卒中顯得尤為重要。應(yīng)急誘導(dǎo)蛋白家族-2(Sestrin2)對維持機(jī)體代謝穩(wěn)定具有重要意義。Sestrin2沉默后，缺血性腦卒中小鼠模型的腦損傷程度會加重，Sestrin2的抗氧化活性可保護(hù)神經(jīng)，是腦卒中發(fā)生后潛在的內(nèi)源性保護(hù)因子之一[4]，對缺血性腦卒中的早期診斷具有潛在作用。研究[5]表明，半胱氨酸蛋白酶抑制劑C(胱抑素C)與缺血性腦卒中存在相關(guān)性。本文檢測缺血性腦卒中患者血清中Sestrin2與胱抑素C含量，評價(jià)血清Sestrin2與胱抑素C在缺血性腦卒中早期診斷及預(yù)后評估中的臨床價(jià)值。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2018年5月—2019年2月于溫州市中醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科住院接受診治的缺血性腦卒中患者119例，均經(jīng)頭顱CT或MRI證實(shí)、符合中華醫(yī)學(xué)會神經(jīng)病學(xué)分會關(guān)于缺血性腦卒中診斷標(biāo)準(zhǔn)[6]。根據(jù)《中國腦血管病指南》[7]標(biāo)準(zhǔn)，將發(fā)病時(shí)間48 h內(nèi)歸為急性組，發(fā)病時(shí)間大于2周歸為慢性組。急性組57例：男31例，女26例；年齡49～94歲，平均(72.2±10.7)歲；慢性組62例：男42例，女20例；年齡42～93歲，平均(71.3±9.9)歲。

另根據(jù)影像學(xué)梗死面積分組[7]，小面積梗死組(直徑<1.5 cm)37例，中面積梗死組(直徑1.5～3 cm)55例，大面積梗死組(直徑>3 cm且累及1個(gè)以上腦葉)27例。排除其他原因引起的顱內(nèi)病變(如大腦短暫性缺血及其他神經(jīng)系統(tǒng)疾病等)患者，排除心血管疾病(如冠心病、心力衰竭、心梗等)、腎臟疾病(如腎小球腎炎、腎病綜合征、腎功能衰竭等)、內(nèi)分泌系統(tǒng)性疾病(如垂體甲狀腺激素分泌異常等)、自身免疫性疾病及腫瘤等其他嚴(yán)重的器質(zhì)性病變患者。

另選取同期頭顱CT或MRI掃描結(jié)果均未見異常，無神經(jīng)系統(tǒng)疾病、心梗、腦梗等既往病史的健康志愿者為對照組共59人，男40人，女19人；年齡47～90歲，平均(71.7±10.0)歲。缺血性腦卒中急性組、慢性組和對照組的性別、年齡比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，缺血性腦卒中小面積梗死組、中面積梗死組和大面積梗死組的性別、年齡比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)，所選患者均簽署知情同意書。

1.2 檢測方法 所有研究對象禁食12 h后采集空腹靜脈血約3 mL，置于分離膠促凝管內(nèi)，室溫放置不超過2 h后，3 500 r/min 離心5 min，離心半徑10 cm，收集血清。血清胱抑素C含量采用羅氏Roche cobas c701全自動生化分析儀根據(jù)免疫比濁法測定，檢測試劑盒購自浙江伊利康生物技術(shù)有限公司。血清Sestrin2含量測定采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)，試劑盒購自上海江萊生物公司。

2 結(jié)果

2.1 研究對象血清Sestrin2和胱抑素C水平比較 急性組血清Sestrin2水平高于慢性組和對照組，慢性組血清Sestrin2水平高于對照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。急性組血清胱抑素C水平高于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

表1 研究對象血清Sestrin2和胱抑素C水平比較

2.2 不同梗死面積組血清Sestrin2和胱抑素C水平比較 小面積梗死組血清Sestrin2和胱抑素C水平均低于大面積梗死組和中面積梗死組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。中面積梗死組血清Sestrin2和胱抑素C水平均低于大面積梗死組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

表2 不同梗死面積組血清Sestrin2和胱抑素C水平比較

2.3 血清Sestrin2和胱抑素C的診斷性能 Sestrin2和胱抑素C的ROC曲線下面積(AUC)分別為0.754、0.684，臨界值分別為13.74 ng/mL、0.86 mg/L，見圖1。經(jīng)多因素回歸分析建立Sestrin2和胱抑素C組合的Logistic回歸模型，AUC為0.763，臨界值分別為13.56 ng/mL、0.89 mg/L，靈敏度為71.9%，特異度為71.2%，見表3。

圖1 血清Sestrin2和胱抑素C對缺血性腦卒中診斷的ROC曲線

表3 血清Sestrin2和胱抑素C對缺血性腦卒中的診斷性能

3 討論

Sestrins2屬于高度保守的蛋白質(zhì)家族，可在人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞缺氧條件下被激活[8]，可作為抗氧化劑來清除過量的活性氧(ROS)。在缺血、缺氧條件下，Sestrins2作為P53的靶蛋白可通過調(diào)節(jié)AMPK -mTOR信號傳導(dǎo)通路，誘導(dǎo)自噬，共同起到保護(hù)細(xì)胞的作用[9]，是一種能夠保護(hù)細(xì)胞免受各種損傷的應(yīng)激誘導(dǎo)蛋白。有研究[10]發(fā)現(xiàn)，腦卒中發(fā)病與氧化應(yīng)激存在著密切聯(lián)系，卒中病情也與氧化應(yīng)激存在一定相關(guān)性。胱抑素C可抑制半胱氨酸蛋白酶，任何含胞核的細(xì)胞均可以分泌胱抑素C。胱抑素C具有多種生物學(xué)特性，與Sestrin2蛋白在維持機(jī)體穩(wěn)態(tài)方面具有重要意義。胱抑素C蛋白的代謝過程較為簡單，主要經(jīng)腎小球?yàn)V過，無腎小管的重吸收，全部由腎排出體外，經(jīng)常被作為評價(jià)腎功能的指標(biāo)。近年來發(fā)現(xiàn)胱抑素C在缺血環(huán)境下，由神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞分泌，作為拮抗缺血、缺氧的保護(hù)因子參與動脈粥樣硬化和缺血性腦卒中的發(fā)生、發(fā)展[11]。

本研究結(jié)果顯示，急性組Sestrin2水平明顯高于慢性組和對照組，這可能是由于Sestrin2需要通過AMPK和mTOR-S6K途徑清除細(xì)胞內(nèi)的氧自由基及激活自噬途徑來避免神經(jīng)細(xì)胞發(fā)生凋亡[12]。也有研究[13]表明，Sestrin2是一種應(yīng)激傳感器，可抵抗應(yīng)激誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡，并結(jié)合Akt的促生存功能和mTOR的負(fù)調(diào)控，達(dá)到保護(hù)腦組織作用。本研究結(jié)果還顯示，急性組胱抑素C水平明顯高于對照組，可能由于大腦缺血刺激神經(jīng)細(xì)胞釋放，并對半胱氨酸蛋白酶起到抑制作用，對腦組織起到保護(hù)作用。也有研究[14]認(rèn)為，缺血性腦卒中血管破損及炎性反應(yīng)會導(dǎo)致胱抑素C 水平升高。慢性組胱抑素C水平相較對照組差異不明顯，可能是由于隨著時(shí)間推移，胱抑素C自然代謝下降的原因。另外，本研究結(jié)果顯示，小面積梗死組血清Sestrin2和胱抑素C水平均明顯低于大面積梗死組和中面積梗死組，中面積梗死組血清Sestrin2和胱抑素C水平均明顯低于大面積梗死組。Sestrin2高表達(dá)可能由于梗死面積越大，神經(jīng)損傷越多而導(dǎo)致氧化應(yīng)激反應(yīng)越大，這與張金枝等[15]研究結(jié)果相似。胱抑素C也隨著腦組織缺血損傷程度加深而分泌增加，實(shí)現(xiàn)保護(hù)和修復(fù)神經(jīng)作用[16]。同樣有研究[17]結(jié)果顯示，梗死面積大的患者胱抑素C高表達(dá)。

同為腦卒中的神經(jīng)保護(hù)因素，Sestrin2的AUC為0.754，胱抑素C的AUC為0.684。本研究為評估兩指標(biāo)聯(lián)合檢測的診斷性能，運(yùn)用二元Logistic回歸，利用兩指標(biāo)的線性組合計(jì)算預(yù)測概率[18]，結(jié)果顯示聯(lián)合檢測的AUC高于單項(xiàng)檢測。

綜上所述，血清Sestrin2和胱抑素C可作為缺血性腦卒中的潛在生物標(biāo)志物，可對早期診斷急性腦卒中提供有效參數(shù)，兩者聯(lián)合檢測更具有診斷價(jià)值。本研究尚有不足之處，后期需進(jìn)一步擴(kuò)大樣本量，為缺血性腦卒中早期診斷及病情預(yù)測提供客觀的理論依據(jù)。