范巧菊，徐 男，隋小芳，費(fèi)秀斌，黃佳濱，陳尚君(.佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院，黑龍江 佳木斯 54003；.珠海市人民醫(yī)院，廣東 珠海 59000)

高血壓是一種十分常見的疾病，是冠心病、腦卒中、周圍血管疾病、心力衰竭、腎功能不全、視網(wǎng)膜出血、視力障礙的重要影響因素[1]。9.78億成年人(約占據(jù)全球成年人的28%)罹患高血壓[2]。遺傳基因是誘發(fā)高血壓疾病發(fā)生的因素之一[3]。H型高血壓是伴有高同型半胱氨酸血癥，即Hcy≥10 μmol/L[4]。血漿同型半胱氨酸升高是許多不良事件發(fā)生的危險(xiǎn)因素，如癡呆、阿爾茨海默病、骨折，尤其是心血管疾病[5]。一項(xiàng)來自中國卒中一級預(yù)防試驗(yàn)的多社區(qū)隨機(jī)研究顯示，在20,702名成人中，只有19.7%的高血壓患者沒有發(fā)生H型高血壓[6]。

1 資料與方法

1.1 研究對象

所有研究對象是2018-01～03于佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院就診的高血壓患者279例，其中有139例H型高血壓患者(H組)和140例原發(fā)性高血壓患者(HT組)。原發(fā)性高血壓組標(biāo)準(zhǔn)納入標(biāo)準(zhǔn)參照2017年《高血壓防治指南》；H型高血壓組納入標(biāo)準(zhǔn)，即符合原發(fā)性高血壓且Hcy≥10μmol/L。所有以上研究對象是長期居住在佳木斯地區(qū)且沒有血緣關(guān)系的漢族人，本研究已經(jīng)通過佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院倫理委員會的認(rèn)可，且已經(jīng)獲得研究對象的知情同意書，同意提供外周靜脈血做基因型檢測分析。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

采集研究對象外周血2mL放入EDTA真空抗凝管中，貯藏于-20℃冰柜中。用鹽析法從冷凍EDTA外周血中提取基因組DNA。采用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)限制片段長度多態(tài)性對SNP進(jìn)行基因型分析，采用高分辨率HRM進(jìn)行基因型分析。為了保證基因分型的質(zhì)量，我們隨機(jī)選取了三種基因型樣本進(jìn)行直接測序，結(jié)果沒有區(qū)別。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS22.0軟件處理。Hardy-Weinberg平衡檢驗(yàn)驗(yàn)證樣本的群體代表性，P>0.05為符合HWE。研究樣本均值的組間比較使用成組t檢驗(yàn)。分類變量用頻數(shù)表示，不同基因型間比較采用χ2檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 H組、HT組臨床基本資料的比較

H組、HT組研究對象的臨床基本資料比較，見表1，H組、HT組在年齡組成、性別比例方面無差異，具有可比性(P>0.05)。與HT組比較，H組中Hcy高于HT組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，其他臨床指標(biāo)無明顯差異(P>0.05)。

表1 H組、HT組一般臨床資料的比較

2.2 MTHFR C677T變異位點(diǎn)在兩組間的基因型和等位基因頻率的分布比較

兩組間MTHFR C677T基因多態(tài)性的基因型和等位基因頻率分布，見表2。與HT組相比，H組中CC、CT基因型頻率均低于HT組(15.11% vs. 34.28%，43.16% vs.47.86%)；TT基因型頻率明顯高于HT組(41.73% vs. 17.86%)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.00001)。等位基因C頻率低于HT組(36.70% vs. 58.21%)，等位基因T頻率高于HT組(63.30% vs. 41.79%)，無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.85)。

表2 H組、HT組MTHFR C677T基因多態(tài)性的基因型及等位基因頻率分布

2.3 不同基因型(CC、CT、TT基因型)的患者Hcy的分布比較

根據(jù)MTHFR C677T基因多態(tài)性在高血壓患者中的分布，將其分為3組(CC、CT、TT組)來觀察患者Hcy的水平。攜帶TT基因型的患者與CC、CT基因型患者Hcy水平的比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；攜帶CC基因型與CT基因型患者Hcy水平的比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見圖1。

圖1 不同基因型(CC、CT、TT基因型)患者中Hcy的水平

3 討論

臨床研究表明，75%的中國高血壓患者伴有高同型半胱氨酸血癥(HHcy)，即為H型高血壓[7]。Hcy在人體內(nèi)是含硫氨基酸的中間代謝產(chǎn)物，其中亞甲基四氫葉酸還原酶和半胱氨酸β合成酶的變化可以影響Hcy水平[8]。MTHFR是Hcy代謝途徑中的關(guān)鍵酶，MTHFR C>T的錯(cuò)義突變導(dǎo)致了TT和CC基因型載體的正常酶活性分別降低了70%和35%左右，使得體內(nèi)同型半胱氨酸水平升高[9]，Hcy濃度的升高會增加對血管內(nèi)皮的損傷和促進(jìn)氧化，這將導(dǎo)致血管內(nèi)皮的損傷和抗氧化劑的不均衡性，促進(jìn)平滑肌細(xì)胞增殖、分化和鈣離子的沉積，減少彈性膠原蛋白，使動(dòng)脈壁彈性和順應(yīng)性降低，誘導(dǎo)血管收縮，繼而導(dǎo)致高血壓的發(fā)生。本研究顯示H型高血壓患者群體中TT基因型、T等位基因頻率明顯高于原發(fā)性高血壓患者，表明攜帶TT基因型人群罹患H型高血壓的風(fēng)險(xiǎn)顯著增高。然而，影響血壓變化的因素較多，MTHFR C677T基因多態(tài)性對高血壓患病影響的比重易被其他因素稀釋，因此可能在不同的人群、種族、環(huán)境變化中難得出一致的結(jié)論。

綜上，本研究證實(shí)MTHFR C>T基因與H型高血壓密切相關(guān)，同時(shí)明確了攜帶TT基因型高血壓患者的Hcy水平比CC和CT基因型顯著增高，為H型高血壓的早期發(fā)現(xiàn)提供了臨床基礎(chǔ)。