陸化梅 于國軍 郭永娟 耿智隆

(1.河南省洛陽正骨醫(yī)院(河南省骨科醫(yī)院)麻醉科 洛陽 471000；2.解放軍聯(lián)勤保障部隊第940醫(yī)院麻醉科(原蘭州軍區(qū)總醫(yī)院) 蘭州 730000)

研究表明[1～2]，穴位電針可以有效抑制腦、心等器官缺血再灌注后炎性細胞浸潤，調控炎性信號傳導通路，改善再灌注損傷，但尚無對失血性休克后肝損傷的影響。此項研究在重度HS大鼠模型的基礎上，探討電針刺激足三里療法應用于HS與液體復蘇后肝臟的效果及可能的機制。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

選用雄性成年健康SD大鼠，體重約280～310g，購于蘭州大學動物中心。所有動物適應性飼養(yǎng)5d，溫度22℃～26℃，濕度40%～70%，自由進食水。

1.2 實驗方法

1.2.1重度失血性休克模型制備及穴位電刺激

采用改良wigger's法[3]復制失血性休克模型, 3%戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉，經(jīng)右側股動脈放血，30min內使MAP降低至35mmHg，通過放血或自體血回輸維持MAP 35±5mmHg水平60min，復制重度失血性休克模型。實驗全程動物保持自主呼吸，肛溫控制在(37±0.5)℃。穴位定位參照《腧穴名稱與定位》[2]，采用0.3mm×25mm針灸針，刺入雙側足三里穴，進針深度5mm，接電針儀，疏密波2/15Hz，強度0.1mA，30min。

1.2.2實驗方案及分組

隨機數(shù)字表法將60只大鼠(n=10)分為6組：對照組(C組)只麻醉，置管，不放血；休克組分為單純休克組(S)和休克復合穴位電針組(SEN)。重度失血性休克模型制備成功后，休克60min時間點處死大鼠，取標本保存。復蘇組分為乳酸林格液復蘇組(LR)、乳酸林格液復合穴位電針1組(LREN1)和乳酸林格液復合穴位電針2組(LREN2)。復蘇方案：各復蘇組于休克60min后行3倍失血量LR液復蘇處理，30min內均速輸注。LREN1組液體復蘇同時以相同參數(shù)在相應位置電刺激30min。LREN2組復制重度失血性休克模型同時相應位置相同電針刺激維持30min。復蘇液輸注結束，生理鹽水6ml/kg·h持續(xù)輸注240min。

1.2.3指標檢測

1.2.3.1靜脈血AST、ALT檢測

于未休克時(基礎值)、休克60min、復蘇后240min 這3個節(jié)點分別抽取1ml的股動脈血，同時等量血經(jīng)股靜脈回輸，測定AST、ALT。

1.2.3.2肝組織TNF-α、MIP-2蛋白含量及MPO活性測定

休克組在休克60min，其余各組在復蘇后240min，采用穿刺心臟法處死大鼠，取部分肝組織比色法測定MPO活性； ELISA法測定TNF-α與MIP-2。

1.2.3.3肝組織病理學觀察

休克組在休克60min，其余各組在復蘇后240min，處死大鼠，采集左葉肝組織(大小為0.1cm見方)，制作電鏡標本，觀察肝組織超微結構改變。

1.3 統(tǒng)計學處理

2 結果

2.1 血內AST、ALT的變化

與C組相比，在休克后60min、復蘇后240min這2個節(jié)點其余各組的血漿ALT、AST升高(P<0.05)；3個復蘇組在復蘇后240min血漿ALT、AST含量升高(P<0.05)；對比LR組，另2個復蘇組顯著偏低(P<0.05)；與LREN1組比較，LREN2組復蘇后240minAST、ALT降低(P<0.05)，見表1。

2.2 肝組織中TNF-α、MIP-2表達及MPO活性的變化

與休克各組比較，液體復蘇各組以上各指標升高(P<0.05)；與LR組比較，LREN1及LREN2組TNF-α、NF-κB、MIP-2明顯降低，MPO活性降低(P<0.05)；與LREN1組比較，LREN2組以上各指標明顯降低(P<0.05)，見表2。

表1 各組大鼠血漿AST、ALT含量變化

表2 各組TNF-α、MIP-2表達及MPO活性

2.3 肝組織病理學改變(圖1)

C組肝細胞超微結構正常；S組細胞膜和核膜變形，線粒體腫脹透亮化，嵴明顯疏松，毛細膽管膽汁淤積；SEN組，肝細胞線粒體腫脹輕度異常，毛細膽管正常； LR組，細胞染色質邊集，局灶性肝細胞見溶解壞死現(xiàn)象，核膜消失，線粒體明顯腫脹； LREN1組，肝細胞核輕度變異，線粒體腫脹，粗面內質網(wǎng)擴張；LREN2組，肝血竇腔輕度增大，線粒體損傷較輕。

C組

S組

LR組

LREN1組

LREN2組

3 討論

本實驗中，各組大鼠失血量、MAP基礎值比較差異無統(tǒng)計學意義，失血性休克后MAP降低，液體復蘇后MAP上升，各組間比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。與休克各組比較，各復蘇組血漿AST、ALT含量明顯升高，肝組織TNF-α及MIP-2等細胞因子生成明顯增加，超微結構顯示肝細胞膜及核膜變形，線粒體腫脹，嵴明顯疏松，空泡形成。雖然失血性休克導致了肝損傷，但復蘇后肝臟損傷加重，出現(xiàn)了再灌注損傷。3個復蘇組中，以LR組肝臟損傷最重，炎癥反應最劇烈，超微結構顯示線粒體高度腫脹，粗面內質網(wǎng)脫顆粒，局灶性肝細胞溶解壞死等。與LREN1組比較，LREN2組肝損傷明顯減輕，表明在出血性休克同時電刺激雙側足三里肝臟保護效果最好。

已有研究表明[4]在促腎上腺皮質激素 (ACTH)和高張鹽水等措施逆轉失血性休克時,膽堿能抗炎通路也發(fā)揮著必不可少的重要作用，抑制TNF-α等炎癥因子的生成。電針刺激足三里可對迷走神經(jīng)膽堿能纖維施以有效刺激，使膽堿能抗炎途徑活化。MIP-2屬于一類趨化因子，其特定靶細胞為中性粒細胞，可評估炎癥活動情況[5]。本研究顯示，失血性休克的同時電針刺激雙側足三里，能夠抑制復蘇后TNF-α、中性粒細胞趨化因子MIP-2的生成，阻止其之間的相互作用，減少中性粒細胞在肝組織中聚集，進而抑制肝組織炎癥反應起到保護作用，其機制或許是通過激活膽堿能抗炎通路實現(xiàn)的。