王茂元，胡振禧，田田

（福建省淡水水產(chǎn)研究所，福建 福州 350002）

羅非魚(yú)原產(chǎn)于非洲，屬于鱸形目（Perciformes）、麗魚(yú)科（Cichlidae）、羅非魚(yú)屬，常見(jiàn)品種有尼羅羅非魚(yú)（Oreochromis niloticus）、奧利亞羅非魚(yú)（O.aureas）、莫桑比克羅非魚(yú)（O.mossambica）等。因其具有食性雜、生長(zhǎng)快、抗病力強(qiáng)、繁殖力強(qiáng)、肉質(zhì)好、群體產(chǎn)量高等優(yōu)點(diǎn)，已經(jīng)成為全世界廣泛養(yǎng)殖的淡水魚(yú)類之一，也是我國(guó)南方地區(qū)重要的出口創(chuàng)匯品種。羅非魚(yú)具有性成熟早、產(chǎn)卵周期短、一年多次營(yíng)巢產(chǎn)卵、口腔孵育等特點(diǎn)，同時(shí)對(duì)繁殖條件要求不高，生產(chǎn)中羅非魚(yú)苗的獲得主要還是依靠其自然繁殖，很少有人對(duì)其進(jìn)行人工催產(chǎn)繁育研究。隨著羅非魚(yú)產(chǎn)業(yè)的不斷發(fā)展壯大，為改善和提高其生產(chǎn)性能，一些學(xué)者利用家系選育、遠(yuǎn)緣雜交、雌核發(fā)育、多倍體選育等方法對(duì)羅非魚(yú)進(jìn)行品種選育時(shí)，就需要獲得大量的成熟卵子或受精卵。但羅非魚(yú)屬一年多次產(chǎn)卵型魚(yú)類，其個(gè)體間性腺發(fā)育不同步，卵子成熟過(guò)程短，進(jìn)行人工繁殖比較困難，難以獲得大量成熟卵子進(jìn)行人工授精，已經(jīng)成為制約羅非魚(yú)遺傳育種的瓶頸問(wèn)題，也影響羅非魚(yú)相關(guān)研究的深入開(kāi)展。

目前，國(guó)內(nèi)外關(guān)于使用催產(chǎn)激素誘導(dǎo)羅非魚(yú)性腺發(fā)育或進(jìn)行人工催產(chǎn)繁育的研究報(bào)道較少，所使用的受試魚(yú)和激素的種類與劑量也不盡相同。該研究通過(guò)注射不同催產(chǎn)藥物組合與劑量，評(píng)估混合催產(chǎn)激素對(duì)新吉富羅非魚(yú)繁育的影響，為今后開(kāi)展羅非魚(yú)全人工催產(chǎn)與繁殖奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

試驗(yàn)用新吉富羅非魚(yú)親魚(yú)由福建省淡水水產(chǎn)研究所科研中試基地提供，該魚(yú)原引于上海海洋大學(xué)水產(chǎn)動(dòng)物種質(zhì)試驗(yàn)站，均為1 齡魚(yú)，體重350-500 g/尾。催產(chǎn)藥物地歐酮（DOM）、絨毛膜促性腺激素（HCG）、促黃體素釋放激素A2（LRH-A2）、促黃體素釋放激素A3（LRH-A3）均購(gòu)自寧波第二激素廠。

1.2 雌、雄親魚(yú)的判別與培育

雌性羅非魚(yú)腹部有3 個(gè)孔，即肛門、生殖孔和泌尿孔，泌尿孔在生殖突起的頂端，生殖孔位于肛門和泌尿孔之間，外形為“一”字形的狹長(zhǎng)開(kāi)口，且與生殖突垂直。雄性羅非魚(yú)只有2 個(gè)開(kāi)孔，即肛門和尿殖孔。2019 年4 月選擇外部生物學(xué)特征明顯、無(wú)病無(wú)傷和體型健壯的親魚(yú)各100 尾，分別放養(yǎng)在水深1.0 m 和面積100 m2的水泥池中培育。培育期間水溫為20～28 ℃，pH 值6.7～7.9，微孔增氧，投喂粗蛋白含量為32%的羅非魚(yú)專用配合飼料，日投餌量為魚(yú)體質(zhì)量的5%左右。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 性成熟親魚(yú)的選擇 催產(chǎn)前1 d 通過(guò)活體檢視法，分別從親魚(yú)培育池選擇性腺發(fā)育良好雌、雄魚(yú)各60 尾，分別暫養(yǎng)在2.0 m×1.0 m×1.2 m 的網(wǎng)箱中?；铙w檢視方法為：性成熟較好的雌魚(yú)，腹部隆起且柔軟，性腺輪廓明顯，生殖孔顏色為粉紅色，輕輕擠壓腹部有卵子流出，且卵粒游離有彈性；雄性成熟的雄魚(yú)輕擠腹部有透明、稍黏稠的精液從尿殖孔射出。

1.3.2 催產(chǎn)藥物組合與注射 雌、雄羅非魚(yú)親魚(yú)采用一次性腹鰭基部注射法催產(chǎn)，雄魚(yú)注射劑量為雌魚(yú)的一半，注射劑量控制在1 mL/尾以內(nèi)。試驗(yàn)設(shè)試驗(yàn)組和空白對(duì)照組，試驗(yàn)組催產(chǎn)藥物分為3 個(gè)組合為：

①DOM6 mg/kg+LRH-A26 μg/kg+HCG 2000IU/kg；

②DOM9 mg/kg+LRH-A29 μg/kg+HCG 3000IU/kg；

③DOM 12 mg/kg+LRH-A212 μg/kg+HCG 4000 IU/kg。

空白對(duì)照組注射相同劑量的生理鹽水。催產(chǎn)后的親魚(yú)按照雌雄比例1∶1 放入1.0 m×1.0 m×1.0 m的網(wǎng)箱中，每個(gè)網(wǎng)箱2～3 對(duì)親魚(yú)，每個(gè)網(wǎng)箱放置一個(gè)微孔增氧進(jìn)行24 h 不間斷增氧，催產(chǎn)時(shí)水溫為（28.6±0.5）℃。

1.3.3 人工授精 催產(chǎn)后24 h 檢查雌魚(yú)含卵數(shù)量，若已經(jīng)含卵，則不用進(jìn)行人工授精，若未含卵則進(jìn)行人工授精，此時(shí)發(fā)情的雌魚(yú)生殖突會(huì)突出。人工授精采用干法受精法，將雌雄親魚(yú)撈起，用毛巾擦干，先將雌魚(yú)卵子擠入不銹鋼盆中，然后用同樣的方法擠入精液，用羽毛輕輕攪動(dòng)，使得精卵充分混合。然后加入清水輕輕攪拌后靜置1 min，倒掉污水，再用清水清洗2～3 次，放入孵化器內(nèi)進(jìn)行孵化，孵化期間發(fā)現(xiàn)有壞死卵時(shí)進(jìn)行剔除，定期換水，水溫27.3 ℃。

1.4 受精卵孵化

將受精卵轉(zhuǎn)移至45 cm×30 cm×35 cm 的魚(yú)缸內(nèi)孵化，缸內(nèi)設(shè)有40 目的15 cm×10 cm×12 cm 孵化網(wǎng)，微充氣，使受精卵翻滾懸浮。孵化期間若發(fā)現(xiàn)有死卵立即剔除，避免破壞水質(zhì)，防止受精卵感染水霉。

2 結(jié)果

2.1 催產(chǎn)后親魚(yú)行為觀察

人工催產(chǎn)后，經(jīng)過(guò)一段時(shí)間親魚(yú)開(kāi)始發(fā)情，產(chǎn)卵前，親魚(yú)在網(wǎng)箱內(nèi)開(kāi)始相互追逐打斗，雄魚(yú)由于個(gè)體上的優(yōu)勢(shì)，占據(jù)網(wǎng)箱下層水體，雌魚(yú)則在上層水體。即將產(chǎn)卵時(shí)，雌魚(yú)生殖突突起，在水層底部游動(dòng)，并由有做窩行為，不停用嘴啃食網(wǎng)箱底部，在此期間，雄魚(yú)會(huì)主動(dòng)與之嬉咬、追逐、打轉(zhuǎn)，直到雌魚(yú)產(chǎn)卵，雄魚(yú)排精，然后雌魚(yú)會(huì)隨即將卵吸入口中進(jìn)行孵化，雌魚(yú)每隔數(shù)分鐘產(chǎn)卵一批。

2.2 催產(chǎn)結(jié)果

此次共催產(chǎn)親魚(yú)48 對(duì)，其中藥物組合①共催產(chǎn)16 對(duì)，產(chǎn)卵6 對(duì)，平均產(chǎn)卵率為37.5%，平均受精率為70.6%；藥物組合②共催產(chǎn)20 對(duì)，產(chǎn)卵13 對(duì)，平均產(chǎn)卵率為65.0%，平均受精率為93.4%；藥物組合③共催產(chǎn)12 對(duì)，死亡2 對(duì)，產(chǎn)卵6 對(duì)，平均產(chǎn)卵率為60.0%平均受精率為86.3%。在水溫為28.6±0.5 ℃時(shí)，催產(chǎn)效應(yīng)時(shí)間20～26 h。

2.3 受精卵觀察與孵化

新吉富羅非魚(yú)卵為沉性卵、無(wú)黏性，形如鴨梨，充滿卵黃，尖的一端為動(dòng)物極，鈍的一端為植物極。卵粒的大小隨著親魚(yú)的大小而略有差異，當(dāng)受精卵吸水后，卵粒膨脹，卵膜透明，整粒卵飽滿而富有彈性。在水溫為（28.6±0.5）℃時(shí)，受精卵孵化時(shí)間為60～72 h，其在人工條件下孵化培育成活率較高，除個(gè)別畸形魚(yú)苗出膜2～3 d 后死亡外，正常魚(yú)苗基本都能存活。

3 討論

羅非魚(yú)為一年多次產(chǎn)卵魚(yú)類，且性腺發(fā)育不同步，在進(jìn)行人工催產(chǎn)繁殖的時(shí)候不易選出成熟度合適的親魚(yú)，會(huì)直接影響人工繁殖的效果。因此，羅非魚(yú)親魚(yú)性腺的成熟度對(duì)催產(chǎn)試驗(yàn)起重要作用。在繁殖季節(jié)，性腺成熟好的雌魚(yú)，順著卵巢方向稍用力擠壓，能擠出卵，且卵粒游離，飽滿有彈性。性成熟的雄魚(yú)輕擠腹部，會(huì)有透明、稍黏稠的液體從尿殖孔射出。經(jīng)實(shí)踐證實(shí)，建議羅非魚(yú)人工催產(chǎn)繁育的時(shí)節(jié)選擇在年初越冬后第一次產(chǎn)卵期進(jìn)行效果較好。

在生產(chǎn)中，為促使親魚(yú)能集中產(chǎn)卵，滿足生產(chǎn)性育苗的需求，可適當(dāng)采取生理、生態(tài)學(xué)調(diào)控措施，其中用性激素及類似物進(jìn)行促熟催產(chǎn)較普遍。不同劑量催產(chǎn)激素的催產(chǎn)效果也不同，劑量過(guò)低其催產(chǎn)效果不明顯，劑量過(guò)高則可能抑制催產(chǎn)效果甚至導(dǎo)致親魚(yú)死亡，該試驗(yàn)中，催產(chǎn)藥物組合②的效果較好，產(chǎn)卵率和受精率較高，說(shuō)明應(yīng)當(dāng)使用適量比例的多種催產(chǎn)激素組合人工催產(chǎn)羅非魚(yú)。