吳雍 何菊/貴州省六盤水市水城區(qū)動物疫病預(yù)防控制中心 553600

脂肪肝出血綜合征（FLHS）是一種因脂類代謝紊亂而導(dǎo)致的疾病。該病作為產(chǎn)蛋雞常見的一種營養(yǎng)代謝病，多發(fā)生于籠養(yǎng)蛋雞，尤其是膘情較好的高產(chǎn)蛋雞，可引起病雞肝臟脂肪的異常沉積，產(chǎn)蛋率明顯下降。近年來，在現(xiàn)代化養(yǎng)殖快速發(fā)展的生產(chǎn)的條件下，該病的發(fā)生呈日趨升高的趨勢，該病已成為較多國家和地區(qū)蛋雞養(yǎng)殖常見易發(fā)疾病。目前研究表明，飼料配方不合理是發(fā)病原因之一，其中，高能低蛋白的日糧可誘發(fā)此病，當(dāng)?shù)半u采食能量高，低蛋白含量低的飼糧后，由于飼糧能量比值高，促使肝臟大量合成甘油三酯，而飼糧蛋白比值低，造成機(jī)體營養(yǎng)不均衡，導(dǎo)致肝臟載脂蛋白合成減少，從而造成肝內(nèi)脂肪轉(zhuǎn)運受阻，破壞了肝細(xì)胞、脂肪細(xì)胞、血液之間脂肪代謝的動態(tài)平衡，導(dǎo)致脂質(zhì)在肝細(xì)胞內(nèi)過度沉積，其中以中性脂肪為主。本試驗參照Thomas Lionel Barton 評分標(biāo)準(zhǔn)，分為FLHS 輕度和FLHS 重度。選用220 日齡健康海蘭褐蛋雞為試驗動物，隨機(jī)分成正常組、病理組，采用高能低蛋白日糧誘導(dǎo)蛋雞發(fā)病。于試驗開始第80d 對蛋雞進(jìn)行肝臟指數(shù)測定、血清生化指標(biāo)測定及肝臟組織形態(tài)學(xué)觀察，旨在探討FLHS 對蛋雞生長性能及血清生化指標(biāo)的影響。

1 材料與方法

1.1 試驗動物選取精神狀態(tài)良好且體重相近的220 日齡蛋雞60 羽，隨機(jī)分成正常組、病理組兩組，按蛋雞飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行常規(guī)免疫。預(yù)飼期7d，預(yù)飼期結(jié)束后，正常組飼喂標(biāo)準(zhǔn)蛋雞日糧，病理組飼喂高能低蛋白日糧，于試驗開始第80d采取組織樣品以備試驗研究。

1.2 主要試劑無水乙醇、二甲苯、伊紅、蘇木紫、鹽酸、多聚甲醛、氯化鈉、氫氧化鈉、冰醋酸、依地酸二鈉、二水合磷酸氫二鈉、十二水合磷酸氫二鈉。

1.3 試驗耗材10ml 離心管、一次性手套、一次性口罩、樣品袋、標(biāo)記筆、10ml 帶針注射器等。

1.4 采取雞肝臟

（1）緣肋軟骨剪開，使腹腔充分暴露，去除肝臟連接的結(jié)締組織，去除與肝門靜脈等與腹部鏈接的部位，使肝臟與機(jī)體脫離。（2）取出后清洗肝臟表面（用0.75%的生理鹽水），用吸水紙吸干后進(jìn)行稱重。（3）選取肝臟右葉部分組織，放入含有4%多聚甲醛溶液的容器中固定，后期進(jìn)行石蠟切片制作。

1.5 血清生化指標(biāo)TG、TC、ALT、AST 的測定，嚴(yán)格按照相應(yīng)試劑盒說明操作。

2 FLHS 對蛋雞肝臟組織形態(tài)學(xué)的影響

通過研究，正常組蛋雞肝臟顏色鮮艷，明亮有光澤，質(zhì)地柔軟。而病理組蛋雞肝周腫大，邊緣鈍圓，肝臟表面有大小不一的浸潤性出血點，肝表面色澤泛黃，油脂滲出，有明顯的油膩感，觸摸質(zhì)地變脆。肝臟H&E 染色結(jié)果顯示，正常蛋雞細(xì)胞界限清晰可見，肝細(xì)胞排列整齊。病理蛋雞肝細(xì)胞中脂滴在切片制作過程中被有機(jī)溶劑溶解后成大小不等的空泡狀。隨著FLHS 的發(fā)病程度的增加，空泡面積不斷增大，按照Thomas Lionel Barton 評分標(biāo)準(zhǔn)及空泡面積，將病理組分為FLHS 輕度組和FLHS 重度組，F(xiàn)LHS 輕度組中的肝細(xì)胞排列相對基本規(guī)則，肝細(xì)胞形態(tài)有略微腫脹，胞漿顯示疏松，肝細(xì)胞發(fā)生輕度的脂肪變性，肝細(xì)胞中可見含有少量脂滴；FLHS 重度組中有大面積肝細(xì)胞發(fā)生脂肪變性，變性后肝細(xì)胞發(fā)生腫脹，體積明顯增大，肝細(xì)胞中含有較多脂滴，細(xì)胞核被推向周邊，由于受擠壓肝竇變窄，甚至消失。

3 FLHS 對蛋雞肝臟指數(shù)的影響

3.1 甘油三酯（TG）測定結(jié)果通過研究，F(xiàn)LHS 輕度組甘油三酯含量約是正常組的1.8 倍，F(xiàn)LHS 重度組甘油三酯含量約是正常組的3.1 倍。

3.2 膽固醇（TC）測定結(jié)果通過研究，F(xiàn)LHS 輕度組、FLHS 重度組膽固醇含量分別高出正常組約1.3 倍、2.2 倍；FLHS 重度組約是FLHS 輕度組的1.69 倍。

3.3 谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）測定結(jié)果通過研究，輕度FLHS組ALT 含量約是正常組的1.39 倍，重度FLHS 組ALT 含量約是正常組的1.55 倍。

3.4 谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）測定結(jié)果通過研究，重度FLHS組AST 含量比正常組和輕度FLHS 組分別多14.73%、13.96%。

4 結(jié)果與討論

根據(jù)現(xiàn)有的FLHS 研究報道和臨床診斷資料顯示，本試驗采用能量高蛋白低的飼糧飼喂蛋雞，成功誘導(dǎo)出FLHS，并按照Thomas Lionel Barton 評分標(biāo)準(zhǔn)及肝細(xì)胞脂滴面積將病理組分為FLHS 輕度組和FLHS 重度組。禽類脂肪合成的主要場所為肝臟，且與脂類代謝息息相關(guān)。有研究表明，肝內(nèi)脂肪堆積對肝細(xì)胞的毒性強(qiáng)度與TG 含量呈正相關(guān)，其作用機(jī)理可能是脂肪損害細(xì)胞線粒體和溶酶體酶從而導(dǎo)致肝細(xì)胞功能障礙，自由基未能及時清除，致使肝實質(zhì)細(xì)胞發(fā)生變性、壞死及炎性細(xì)胞浸潤。此外，由于飼料蛋白比值低，導(dǎo)致病理組蛋雞肝臟載脂蛋白合成減少，從而造成肝臟中合成的甘油三酯轉(zhuǎn)運受阻，使得肝細(xì)胞內(nèi)脂肪過度沉積進(jìn)而發(fā)生肝臟脂肪變性。

膽固醇是細(xì)胞膜成分，家禽血液中的膽固醇部分在組織中構(gòu)成細(xì)胞結(jié)構(gòu)成分，而其中的部分轉(zhuǎn)變?yōu)橹匾墓檀佳苌颲D3，促進(jìn)機(jī)體鈣的吸收或類固醇激素的代謝。機(jī)體大部分組織都具備能力，可有效合成膽固醇，而合成速度及總合成量不盡一致。由于FLHS 對肝臟的損傷，導(dǎo)致TC 含量顯著升高，肝臟脂類代謝受到嚴(yán)重影響。

目前肝臟內(nèi)發(fā)現(xiàn)的活性最高的兩種轉(zhuǎn)氨酶分別是谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶，這兩種酶與脂肪變性、肝細(xì)胞炎癥和壞死等病變的發(fā)生密切相關(guān)，是體現(xiàn)肝臟細(xì)胞損傷的主要指標(biāo)。這可能是由于受FLHS 的影響，使得肝細(xì)胞的代謝發(fā)生異常，肝細(xì)胞器及細(xì)胞膜等亞顯微結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，進(jìn)而肝細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)氨酶產(chǎn)生過剩而大量外溢，血清轉(zhuǎn)氨酶活性急劇升高，肝臟內(nèi)脂質(zhì)代謝異常，肝細(xì)胞功能受到損傷。