王夢(mèng)桐,孫瑩瑩,榮樹良,朱鍵勛,李 勇,林 喆*

(1.長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院,吉林 長(zhǎng)春 130117;2.梅河口市澤泉中草藥種植專業(yè)合作社,吉林 梅河口 135014)

苦參為豆科植物苦參Sophora flavescens Ait.的干燥根。春、秋二季采挖,除去根頭和小支根,洗凈,干燥,或趁鮮切片,干燥[1]。近年來,國(guó)內(nèi)外對(duì)苦參的研究十分廣泛,涵蓋化學(xué)、活性、質(zhì)量、藥理作用、臨床應(yīng)用等,通過近幾年來的研究表明,苦參的化學(xué)成分主要有生物堿類和黃酮類[2-4]。生物堿中苦參型生物堿為主要活性成分,有多方面的藥理作用,如抗心律失常、抗菌、抗炎、抗風(fēng)濕、抗腫瘤、抗過敏、抗病毒及生物反應(yīng)調(diào)節(jié)作用等[5-10]。因此,本研究以擴(kuò)大苦參藥用資源為目標(biāo),對(duì)吉林產(chǎn)區(qū)栽培苦參進(jìn)行含有量測(cè)定,并依據(jù)2020 年版《中國(guó)藥典》 苦參項(xiàng)下相關(guān)內(nèi)容與方法,同河北、河南、甘肅、內(nèi)蒙古、山西等常用5 個(gè)產(chǎn)區(qū)的苦參藥材中苦參堿和氧化苦參堿進(jìn)行含有量對(duì)比,以期為6 個(gè)產(chǎn)地苦參的質(zhì)量評(píng)價(jià)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù),進(jìn)而實(shí)現(xiàn)對(duì)苦參藥用資源的進(jìn)一步擴(kuò)大和科學(xué)合理應(yīng)用。

1 材料

1.1 儀器 高效液相色譜儀(日本島津公司)；XS205 型電子分析天平(瑞士梅特勒-托利多儀器有限公司)；ST-2000 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海亞榮生化儀器廠)；KQ200B 型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)。

1.2 試劑與藥物 苦參堿對(duì)照品(批號(hào)110805-201709)、氧化苦參堿對(duì)照品(批號(hào)110780-201508) 均購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院。乙腈、無水乙醇為色譜純；其他試劑均為分析純；水為超純水。

1.3 樣品 苦參樣品于2017 年10 月采收于內(nèi)蒙古、河南、甘肅、河北、山西、吉林梅河口6 個(gè)地區(qū),經(jīng)長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院林喆教授鑒定為豆科植物苦參Sophora fla-vescens Ait.的干燥根。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 Platisil NH2色譜柱(150 mm×4.6 mm,5 μm)；流動(dòng)相乙腈-無水乙醇-3% 磷酸溶液(8∶1∶1)；檢測(cè)波長(zhǎng)220 nm；體積流量1.0 mL/min；進(jìn)樣量對(duì)照品溶液5 μL,供試品溶液10 μL；理論板數(shù)按氧化苦參堿峰計(jì)算不低于2 000。

2.2 溶液制備

2.2.1 對(duì)照品溶液 采用2020 年版《中國(guó)藥典》 一部苦參項(xiàng)下含有量測(cè)定方法制備對(duì)照品溶液。

2.2.2 供試品溶液 采用2020 年版《中國(guó)藥典》 一部苦參項(xiàng)下含有量測(cè)定方法制備供試品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

2.3.1 系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 取“2.2” 項(xiàng)下對(duì)照品溶液和供試品溶液適量,在“2.1” 項(xiàng)色譜條件下進(jìn)樣測(cè)定,記錄色譜圖,見圖1。苦參堿標(biāo)準(zhǔn)品液相色譜圖中苦參堿保留時(shí)間為17 min,氧化苦參堿保留時(shí)間29 min,理論板數(shù)均大于2 000。

2.3.2 線性關(guān)系考察 精密吸取“2.2.1” 項(xiàng)下對(duì)照品溶液100、200、300、400、500、600 μL 至10 mL 量瓶中,乙腈-無水乙醇(80∶20) 定容至刻線,在“2.1” 項(xiàng)色譜條件下進(jìn)樣,以色譜峰面積積分值為縱坐標(biāo)(Y),對(duì)照品濃度為橫坐標(biāo)(X),分別進(jìn)行線性回歸,得回歸方程分別為苦參堿Y=298 782X+607.14 (r=0.999 8)、氧化苦參堿Y=400 655X -5 890.3 (r=0.999 0),分別在0.04～0.37、0.12～1.83 μg 范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

圖1 苦參中苦參堿、氧化苦參堿HPLC 色譜圖

2.3.3 精密度試驗(yàn) 取質(zhì)量濃度為50 μg/mL 苦參堿和0.15 mg/mL 氧化苦參堿對(duì)照品溶液,在“2.1” 項(xiàng)色譜條件下分別連續(xù)進(jìn)樣6 次,測(cè)定峰面積。測(cè)得RSD 為1.95%,表明儀器精密度良好。

2.3.4 重復(fù)性試驗(yàn) 取山西苦參樣品約0.5 g,按“2.2.2” 下方法制備供試品溶液5 份,在“2.1” 項(xiàng)色譜條件下進(jìn)行含有量測(cè)定,測(cè)得RSD 為1.56%,表明該方法重復(fù)性良好。

2.3.5 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取山西苦參樣品,按“2.2.2” 下方法制備供試品溶液,在“2.1” 項(xiàng)色譜條件下,分別于0、2、4、6、8、10、12 h 進(jìn)樣測(cè)定峰面積,測(cè)得氧化苦參堿和苦參堿RSD 分別為1.68%、1.27%,表明供試品溶液在12 h 內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.3.6 加樣回收率試驗(yàn) 取山西苦參樣品0.3 g 共18 份,分兩大組,兩大組分3 小組分別精密加入苦參堿、氧化苦參堿對(duì)照品相當(dāng)于樣品濃度的80%、100%、120%。按“2.2.2” 項(xiàng)下方法制備供試品溶液,另取“2.2.1” 項(xiàng)下苦參堿、氧化苦參堿對(duì)照品溶液進(jìn)樣測(cè)定照,并計(jì)算苦參堿、氧化苦參堿低、中、高3 個(gè)濃度的加樣回收率。結(jié)果表明,苦參堿加樣回收率為97.9%～101.0%,平均回收率99.9%,RSD 為1.05%；氧化苦參堿加樣回收率為97.8%～101.9%,平均回收率100.1%,RSD 為1.19%。

2.4 樣品含有量測(cè)定 取6 個(gè)產(chǎn)區(qū)的苦參樣品,粉碎成粉末,過3 號(hào)篩。精密稱取0.3 g,河北、河南、甘肅、內(nèi)蒙古、山西5 個(gè)產(chǎn)地各3 份；吉林梅河口產(chǎn)地取3 批樣品,每批3 份,共9 份。按“2.2.2” 項(xiàng)下方法制備供試品溶液。另取“2.2.1” 項(xiàng)下苦參堿、氧化苦參堿對(duì)照品溶液進(jìn)樣測(cè)定,在“2.1” 項(xiàng)色譜條件下進(jìn)樣,測(cè)得6 個(gè)不同產(chǎn)區(qū)供試品的中苦參堿、氧化苦參堿總含有量均大于1.2%,結(jié)果符合2020 年版《中國(guó)藥典》 規(guī)定,見表1。

表1 不同產(chǎn)區(qū)樣品中苦參堿、氧化苦參堿含有量測(cè)定結(jié)果（%，n=3）

3 討論

2020 年版《中國(guó)藥典》 一部項(xiàng)下規(guī)定苦參中苦參堿、氧化苦參堿總量不得低于1.2%[1]。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,6 個(gè)產(chǎn)地苦參藥材飲片均符合《中國(guó)藥典》 標(biāo)準(zhǔn),其中河南含有量最高。

各產(chǎn)地間含有量及兩者相對(duì)含有量存在較大差異,除產(chǎn)地影響外,也可能與采收季節(jié)和生長(zhǎng)年限有關(guān)[11],苦參堿與氧化苦參堿之間是否會(huì)隨著時(shí)間推移而相互轉(zhuǎn)化,或轉(zhuǎn)化成其他物質(zhì)還有待進(jìn)一步研究。2 種生物堿的藥理作用存在差別[12-15],雖然飲片符合《中國(guó)藥典》 含有量要求,但在臨床應(yīng)用過程中藥效不穩(wěn)定及能否真正達(dá)到某種特定藥效仍有待商榷。同時(shí)兩者均有一定毒性[16],其毒性與劑量的關(guān)系尚不明確。

苦參為常用傳統(tǒng)中藥,主要藥效物質(zhì)基礎(chǔ)為生物堿與黃酮類,具有多種生物活性,而且苦參堿和氧化苦參堿并非專屬性有效成分,在質(zhì)量評(píng)價(jià)方法中增加苦參指紋圖譜鑒定,建立真正的質(zhì)量評(píng)價(jià)標(biāo)志物,以期進(jìn)一步提高苦參飲片質(zhì)量的評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)。