時(shí)文博　陳永平　韓現(xiàn)芹　王愿寧　李春青　高麗娜

摘要：使用液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法（LC-MS/MS）對(duì)156個(gè)天津市售貝類產(chǎn)品中的13種麻痹性貝類毒素進(jìn)行測(cè)定。根據(jù)測(cè)定結(jié)果，采用點(diǎn)評(píng)估方法對(duì)麻痹性貝類毒素進(jìn)行急性膳食暴露風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估。結(jié)果顯示在成年人群中，天津市售貝類產(chǎn)品中13種麻痹性貝類毒素的急性風(fēng)險(xiǎn)指數(shù)%ARFD為 0～0.313，均小于1，說(shuō)明急性膳食暴露水平均為安全狀態(tài)，可放心食用。

關(guān)鍵詞：市售貝類;麻痹性貝類毒素;膳食暴露;風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估

中圖分類號(hào)：R114? ? ? ?文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：B

近年來(lái)，海洋環(huán)境污染日益嚴(yán)重，有毒藻類導(dǎo)致的赤潮頻發(fā)。而貝類由于自身濾食性的特征，濾食到有毒藻類后會(huì)在體內(nèi)積累產(chǎn)生貝類毒素。貝類毒素有多種類型，目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)的主要有麻痹性貝類毒素（PSP）、腹瀉性貝類毒素（DSP）、記憶缺失性貝類毒素（ASP）等。其中麻痹性貝類毒素是其中分布范圍最廣，發(fā)生頻率最高，人體危害最大的一類[1-2]。近年來(lái)，因食用貝類導(dǎo)致麻痹性貝類毒素中毒的事件時(shí)有發(fā)生，天津作為貝類消費(fèi)量較大的城市，風(fēng)險(xiǎn)隱患較高。本文使用液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜（LC-MS/MS）法對(duì)天津市售的9個(gè)品種貝類中13種麻痹性貝類毒素進(jìn)行了檢測(cè)，并對(duì)其膳食暴露風(fēng)險(xiǎn)進(jìn)行了評(píng)估，對(duì)保障消費(fèi)者舌尖上的安全具有積極的促進(jìn)作用。

1? 材料和方法

1.1? 樣品采集

采樣時(shí)間為2017年9月至2019年7月，每2個(gè)月采樣1次，采集天津市沿海碼頭及批發(fā)市場(chǎng)上銷售的9個(gè)品種共計(jì)156個(gè)貝類樣品，具體采樣品種及數(shù)量見(jiàn)表1。樣品采集后清水清洗，取出全部組織，使用高速組織攪拌機(jī)攪碎后，-18℃冷凍保存。

1.2? 試劑與儀器

13種麻痹性貝類毒素（STX、dcSTX、NEO、dcNEO、GTX1、GTX2、GTX3、GTX4、GTX5、dcGTX2、dcGTX3、C1、C2）標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，購(gòu)于加拿大海洋生物研究所。乙腈、甲酸、乙酸均為色譜純，甲酸銨、氨水均為優(yōu)級(jí)純。

島津LC-20A高效液相色譜儀;AB SCIEX 4000QTRAP三重四級(jí)桿質(zhì)譜儀;Milli-Q Advantage A10超純水系統(tǒng);Supelco ENVI-Carb固相萃取柱（3 mL，500 mg）;均質(zhì)機(jī);漩渦震蕩器;Sigma 3-30K高速冷凍離心機(jī);恒溫水浴鍋。

1.3? 樣品檢測(cè)

樣品前處理方法改進(jìn)自吳海燕等[3]，前處理后采用液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜（LC-MS/MS）法進(jìn)行測(cè)定。為統(tǒng)一評(píng)估標(biāo)準(zhǔn)，計(jì)算檢測(cè)樣品中麻痹性貝類毒素的總毒力STXeq[4]。

其中Xi為各麻痹性貝類毒素的含量，ri為麻痹性貝類毒素的毒性因子，見(jiàn)表2。

13種麻痹性貝類毒素的檢測(cè)結(jié)果如表3所示，在所采集的156個(gè)貝類樣品中，共有44個(gè)樣品檢出麻痹性貝類毒素，檢出率為28.2%。按貝類品種看，共6個(gè)品種檢出，檢出率由高到低排序分別為扇貝 66.7%、紫貽貝58.3%、毛蚶58.3%、脈紅螺20.8%、牡蠣16.7%、菲律賓蛤仔16.7%。檢出的濃度（μg STXeq/kg）范圍分別為紫貽貝15.3～288.5、扇貝8.2～220.8、毛蚶31.3～180.9、脈紅螺3.9～55.1、牡蠣1.8～66.8、菲律賓蛤仔15.2～15.6。

2? 膳食暴露評(píng)估方法

膳食暴露評(píng)估是一種評(píng)價(jià)某種食物食用安全性的方法，是根據(jù)人體對(duì)某種污染物通過(guò)食物的攝入量進(jìn)行的定量評(píng)估。膳食暴露評(píng)估目前有多種模型，其中最常用的是點(diǎn)評(píng)估模型[5]。目前國(guó)內(nèi)外常用的點(diǎn)評(píng)估方法為分慢性膳食暴露評(píng)估模型和急性膳食暴露評(píng)估模型。本文評(píng)估的13種麻痹性貝類毒素被人體攝入后主要表現(xiàn)為急性中毒癥狀，因此本文使用急性膳食暴露的點(diǎn)評(píng)估模型進(jìn)行評(píng)估。

使用國(guó)際通用的每日攝入量估算方法建立13種麻痹性貝類毒素急性膳食暴露的點(diǎn)評(píng)估模型，每個(gè)月取所有檢出品種中的最高殘留量作為評(píng)估數(shù)據(jù)，分別計(jì)算天津居民食用貝類產(chǎn)品產(chǎn)生的麻痹性貝類毒素的膳食暴露量EXPa。

EXPa為急性膳食暴露量（μg·kg-1·d-1）;LP為人群日消費(fèi)量（g·d-1）;HR為貝類產(chǎn)品可食部分麻痹性貝類毒素最高濃度;f為加工因子;bw為人群平均體重（kg）。本文中各月貝類毒素殘留量數(shù)據(jù)取各品種中的最高值，天津成年居民平均體重及每日貝類產(chǎn)品平均攝入量數(shù)據(jù)來(lái)源于《中國(guó)居民營(yíng)養(yǎng)與健康狀況調(diào)查報(bào)告-營(yíng)養(yǎng)與健康狀況數(shù)據(jù)集（2002）》，具體評(píng)估數(shù)據(jù)見(jiàn)表4、表5。

根據(jù)評(píng)估對(duì)象的膳食暴露量EXPa計(jì)算急性膳食暴露風(fēng)險(xiǎn)指數(shù)%ARfD，用來(lái)對(duì)急性膳食暴露評(píng)估進(jìn)行評(píng)價(jià)。

式中ARfD為急性參考劑量[6]，指每人每天攝入13種麻痹性貝類毒素后不會(huì)產(chǎn)生任何健康損害的安全劑量。參考?xì)W洲食品安全局（EFSA）的規(guī)定[7]，麻痹性貝類毒素中STX的ARfD為0.5。

當(dāng)%ARfD≤1時(shí)，說(shuō)明人群急性膳食暴露水平處在安全狀態(tài)，不會(huì)對(duì)健康造成風(fēng)險(xiǎn)。當(dāng)%ARfD>1時(shí)說(shuō)明人群急性膳食暴露水平處在不安全狀態(tài)，需采取相應(yīng)措施。

3? 膳食暴露評(píng)估結(jié)果

按照上述膳食暴露評(píng)估方法與數(shù)據(jù)，通過(guò)計(jì)算得出9種檢出的貝類產(chǎn)品中13種麻痹性貝類毒素的急性膳食暴露量EXPa和急性暴露風(fēng)險(xiǎn)指數(shù)%ARfD，加工因子f為1，結(jié)果如表6、表7所示。

由表7數(shù)據(jù)可見(jiàn)，各貝類產(chǎn)品13種麻痹性貝類毒素的急性暴露風(fēng)險(xiǎn)指數(shù)%ARfD范圍為0～0.313，均小于1。若將%ARfD=1時(shí)麻痹性貝類毒素?cái)z入量設(shè)為暴露風(fēng)險(xiǎn)耐受值，則不同年齡段天津成年居民13種麻痹性貝類毒素暴露量占最高耐受值22.4%～31.3%，當(dāng)單日貝類產(chǎn)品攝入量至少達(dá)到平均日攝入量的3.19～4.46倍時(shí)，可能會(huì)導(dǎo)致個(gè)體產(chǎn)生膳食暴露風(fēng)險(xiǎn)。

點(diǎn)評(píng)估法進(jìn)行膳食暴露評(píng)估使用了各月貝類產(chǎn)品中13種麻痹性貝類毒素最大殘留濃度作為評(píng)估數(shù)據(jù)，并沒(méi)有考慮到個(gè)體差異，消費(fèi)習(xí)慣，時(shí)空差異導(dǎo)致貝類毒素濃度變化等因素。因此在個(gè)別極端條件下，如特定時(shí)間內(nèi)大量攝入有毒貝類，仍有可能導(dǎo)致急性暴露風(fēng)險(xiǎn)指數(shù)%ARfD>1。因?yàn)椴捎盟胁杉贩N中最高殘留量進(jìn)行評(píng)估，因此評(píng)估可能被高估，評(píng)估出的暴露風(fēng)險(xiǎn)高于實(shí)際暴露風(fēng)險(xiǎn)，評(píng)估結(jié)果較為保守，但可以涵蓋并保護(hù)絕大多數(shù)人群。因此為了降低風(fēng)險(xiǎn)，應(yīng)減少極端條件的產(chǎn)生，在貝類毒素水平較高的時(shí)間控制貝類產(chǎn)品食用，避免一次性超量食用有毒貝類產(chǎn)生高膳食暴露風(fēng)險(xiǎn)。

4? 總結(jié)

所采集的156個(gè)貝類產(chǎn)品中13種麻痹性貝類毒素的急性暴露風(fēng)險(xiǎn)指數(shù)%ARfD范圍為0～0.313，均小于1，為安全狀態(tài)。說(shuō)明天津市售9種貝類產(chǎn)品中13種麻痹性貝類毒素對(duì)一般成年人群食用造成的的急性膳食暴露風(fēng)險(xiǎn)均在安全范圍中，居民僅通過(guò)食用貝類產(chǎn)品導(dǎo)致麻痹性貝類毒素對(duì)人體造成風(fēng)險(xiǎn)的可能性不大。從年齡變化來(lái)看，60歲以下年齡段，男性的暴露風(fēng)險(xiǎn)略高于女性，60歲以上年齡段女性的暴露風(fēng)險(xiǎn)略高于男性。從品種風(fēng)險(xiǎn)來(lái)看，紫貽貝、扇貝、毛蚶三個(gè)品種的膳食暴露風(fēng)險(xiǎn)相對(duì)較高，其余品種暴露風(fēng)險(xiǎn)較低。通過(guò)從季節(jié)變化來(lái)看，夏季、秋季的暴露風(fēng)險(xiǎn)高于春季和冬季，其中7月的暴露風(fēng)險(xiǎn)值最高，最高風(fēng)險(xiǎn)指數(shù)為0.313。在特定極端條件下，大量食用有毒貝類可能會(huì)導(dǎo)致風(fēng)險(xiǎn)指數(shù)提高產(chǎn)生暴露風(fēng)險(xiǎn)危害健康，因此建議消費(fèi)者在高風(fēng)險(xiǎn)季節(jié)食用高風(fēng)險(xiǎn)品種貝類時(shí)注意控制攝入量，切勿一次性超量食用貝類增大膳食暴露風(fēng)險(xiǎn)。同時(shí)建議有關(guān)部門在高風(fēng)險(xiǎn)季節(jié)加強(qiáng)麻痹性貝類毒素監(jiān)測(cè)與預(yù)警，更好的保障貝類產(chǎn)品的質(zhì)量安全和消費(fèi)者的健康。

參考文獻(xiàn)

[1]Faber S. Saxitoxin and the induction of paralytic shellfish poisoning[J].Journal of Young Investigators，2012，23（1）：1-7.

[2]李芳，李雪梅，李獻(xiàn)剛，等. 貝類毒素檢測(cè)方法研究概況[J]. 食品研究與開(kāi)發(fā)，2015，36（23）：184-186.

[3]吳海燕，郭萌萌，邴曉菲，等. 液相色譜-四極桿/線性離子阱復(fù)合質(zhì)譜測(cè)定雙殼貝類中麻痹性貝類毒素[J]. 海洋與湖沼，2017（3）：508-515.

[4]中華人民共和國(guó)國(guó)家衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會(huì)，國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局. GB 5009.213-2016貝類中麻痹性貝類毒素的測(cè)定[S]. 北京：中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社，2016.

[5]王向未，仇厚援，張志恒，等. 食品中膳食暴露評(píng)估模型研究進(jìn)展[J]. 浙江農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2012， 24（004）：733-738.

[6]劉志偉. 一個(gè)新的毒理學(xué)閾值-急性參考劑量[J]. 衛(wèi)生研究，2003（01）.

[7]EFSA.? Marine biotoxins in shellfish–Saxitoxin group Scientific Opinion of? the Panel on Contaminants in the Food chain[J]. The EFSA Journal，2009（1019）：1-76.