王杜平，陳艷紅，祖蓓蓓，楊德良，金海峰，劉蘇賢，牛國平(徐州市中心醫(yī)院 .檢驗(yàn)科，.風(fēng)濕免疫科，江蘇徐州 221009)

抗磷脂綜合征(antiphospholipid syndrome, APS)是一組異質(zhì)性自身免疫性疾病，其特征是反復(fù)出現(xiàn)動(dòng)脈血栓、靜脈血栓以及妊娠并發(fā)癥，血清中抗磷脂抗體(antiphospholipid antibodies，aPLs)持續(xù)陽性等[1]。aPLs是一組以磷脂和/或磷脂結(jié)合蛋白(如β2-糖蛋白Ⅰ、凝血酶原、蛋白C、蛋白S、錨定蛋白等)為靶抗原的自身抗體總稱。根據(jù)2006年修訂的APS分類標(biāo)準(zhǔn)，分類為APS的患者至少持續(xù)存在以下aPLs之一，包括狼瘡抗凝物(lupus anticoagulant, LA)、抗心磷脂抗體(anti cardiolipin antibody, aCL)IgG和IgM、抗β2糖蛋白Ⅰ抗體(anti-β2glycoprotein 1 antibodies, aβ2GPⅠ)IgG和IgM[2]。aCL IgA和aβ2GPⅠ IgA抗體目前尚未包括在APS的實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)中，但建議作為臨床懷疑APS的血清陰性患者的“非標(biāo)準(zhǔn)”抗體[3]。

目前，大部分實(shí)驗(yàn)室采用ELISA法來測定aPLs，雖然此法簡便易操作，但是存在標(biāo)準(zhǔn)化的缺乏、實(shí)驗(yàn)操作的影響因素較多、實(shí)驗(yàn)室間檢測結(jié)果的變異系數(shù)大等缺點(diǎn)。2019年《抗磷脂抗體檢測的臨床應(yīng)用專家共識(shí)》指出，化學(xué)發(fā)光法(CLIA)檢測aCL抗體和aβ2GPⅠ抗體與ELISA法檢測相比，有較高的敏感性和特異性，實(shí)驗(yàn)操作簡單、快速、自動(dòng)化，能實(shí)現(xiàn)急診模式進(jìn)樣、定量檢測且變異系數(shù)小[4]。本研究用ELISA法和CLIA法aCL抗體和aβ2GPⅠ抗體檢測試劑，同時(shí)檢測136例血清樣本，并對(duì)比分析2種檢測方法學(xué)之間的相關(guān)性，以期為APS的臨床診療提供更好的實(shí)驗(yàn)室數(shù)據(jù)參考。

1 材料與方法

1.1研究對(duì)象 收集2019年10月至2020年4月于徐州市中心醫(yī)院風(fēng)濕免疫科和婦產(chǎn)生殖中心就診的136例患者的血液檢測標(biāo)本，其中，女性90例、男性46例；年齡58.5(35，68)歲；分為APS組86例，健康人對(duì)照組50例。APS的診斷參照2006年修訂的APS分類標(biāo)準(zhǔn)[2]，需滿足以下條件：(1)血管栓塞或病態(tài)妊娠；(2)LA或aCL抗體(IgG或IgM亞型)或aβ2GPⅠ抗體(IgG或IgM亞型)中高滴度陽性，并持續(xù)存在12周以上。排除心、肝、腎功能不全患者。

1.2主要儀器及試劑 aCL IgM/IgG/IgA檢測試劑(ELISA法)、aβ2GPⅠ IgM/IgG/IgA檢測試劑(ELISA法)購自德國歐蒙公司，全自動(dòng)酶聯(lián)免疫工作站(瑞士Tecan公司)；aCL IgM/IgG/IgA檢測試劑(CLIA法)、aβ2GPⅠ IgM/IgG/IgA檢測試劑(CLIA法)、iFlash3000-C全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光儀器(深圳亞輝龍公司)。

1.3方法 136例血清標(biāo)本分別在全自動(dòng)酶聯(lián)免疫工作站和iFlash-3000C化學(xué)發(fā)光免疫分析儀上用ELISA法和CLIA法檢測aCL IgM/IgG/IgA、aβ2GPⅠ IgM/IgG/IgA，實(shí)驗(yàn)操作及結(jié)果判讀按照試劑盒說明書進(jìn)行。ELISA法判讀標(biāo)準(zhǔn):aCL IgM/IgG/IgA檢測結(jié)果≥12 PL-IgA-U/mL(或PL-IgG-U/mL或PL-IgM-U/mL)判斷為陽性，aβ2GPⅠ IgM/IgG/IgA檢測結(jié)果≥20 RU/mL判斷為陽性。CLIA判斷標(biāo)準(zhǔn):aCL IgM/IgG/IgA檢測結(jié)果>10 MPL U/mL判斷為陽性，aβ2GPⅠ IgM/IgG/IgA檢測結(jié)果≥20 AU/mL判斷為陽性。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 用SPSS 20.0軟件進(jìn)行。用Kappa系數(shù)一致性檢驗(yàn)分析兩法檢測結(jié)果的一致性。不同方法間陽性率比較用卡方檢驗(yàn)。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1ELISA法和CLIA法結(jié)果符合率 ELISA法與CLIA法檢測aCL IgM/IgG和aβ2GPⅠ IgM/IgG/IgA的符合率均超過85%，僅aCL IgA符合率稍差，為77.9%；所有項(xiàng)目陽性結(jié)果符合率為14.3%～97.9%，陰性結(jié)果符合率為91.2%～100%。除aCL IgA項(xiàng)目Kappa值為0.198外，其他項(xiàng)目符合率Kappa值范圍為0.434～0.787。見表1。

表1 ELISA和CLIA檢測抗磷脂抗體的一致率

2.2疾病組aCL(IgG、IgM、IgA)和aβ2GPⅠ(IgG、IgM、IgA)檢測結(jié)果 在APS組中，CLIA法檢測aCL(IgG/IgM/IgA)和aβ2GPⅠ抗體(IgG/IgM/IgA)的總檢出率均高于ELISA法(86.0%vs62.8%，91.9%vs81.4%)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

表2 APS組患者aCL和aβ2GPⅠ不同方法學(xué)檢測結(jié)果的比較(n=86)

3 討論

Ota等[5]研究報(bào)道，在部分血栓患者或復(fù)發(fā)性流產(chǎn)患者中僅存在aPLs IgM抗體，而IgA型的aPLs抗體檢測價(jià)值對(duì)臨床診斷目前還存在爭議。但有文獻(xiàn)報(bào)道aβ2GPⅠ IgA陽性的患者也會(huì)存在APS臨床癥狀的表現(xiàn)，并且少部分的惡性APS患者中僅aβ2GPⅠ IgA陽性[6]。在第13屆抗磷脂抗體國際大會(huì)的建議中，對(duì)臨床癥狀高度疑似APS患者且aPLs IgG和IgM抗體檢測均陰性，建議應(yīng)該進(jìn)行aPLs IgA抗體的檢測[6]。

本研究對(duì)比發(fā)現(xiàn)，aCL和aβ2GPⅠ采用CLIA法和ELISA法檢測，總一致率較好，但是陽性符合率一致率不高，這說明不同方法學(xué)之間的差異性較大。且對(duì)于APS組患者aCL IgG/IgM/IgA和aβ2GPⅠ IgG/IgM/IgA的檢測，CLIA法的檢測優(yōu)勢比較明顯，整體的檢出率均高于ELISA法，可以彌補(bǔ)ELISA法對(duì)APS患者的漏檢。CLIA是一種完全自動(dòng)化的技術(shù)，大約需要30 min即可完成一項(xiàng)測試，節(jié)省了時(shí)間，并減少操作員的手工處理，自動(dòng)化的操作還可以降低實(shí)驗(yàn)室內(nèi)和實(shí)驗(yàn)室間的變異性，提高結(jié)果的重復(fù)性[4]。