劉浩，黃風(fēng)琴，郭智俊，黃嘉穎，周海瑩，董文文，梁景星，朱智遜，梁棟偉

(廣東省人民醫(yī)院南海醫(yī)院(佛山市南海區(qū)第二人民醫(yī)院)，廣東 佛山)

0 引言

宮頸癌作為女性常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，主要?dú)w因于子宮頸上皮瘤變。據(jù)流行病學(xué)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)，全球每年宮頸癌新發(fā)病例數(shù)大約為50萬(wàn)例[1]，而對(duì)于宮頸癌患者進(jìn)行早期診斷，是預(yù)防和控制病情惡化的重要環(huán)節(jié)。既往，臨床常采用LCT以及TCT檢查方法對(duì)宮頸疾病進(jìn)行診斷，但是上述兩法容易因操作等主觀因素造成假陽(yáng)性以及漏檢情況的出現(xiàn)[2]。近年來(lái)，受益于基因檢測(cè)技術(shù)的迅猛發(fā)展，HPV E6/E7 mRNA以及HPV DNA檢測(cè)法應(yīng)運(yùn)而生[3]，但鑒于各臨床檢測(cè)機(jī)構(gòu)標(biāo)準(zhǔn)不一，對(duì)于HPV E6/E7 mRNA以及HPV DNA的選擇尚未形成一致結(jié)論。故基于此，筆者通過(guò)系統(tǒng)探究HPV E6/E7 mRNA和HPV DNA在宮頸病變?cè)\治中應(yīng)用價(jià)值，以期為臨床宮頸病變的診斷提供理論指導(dǎo)以及參考借鑒。

1 資料與方法

1.1 一般資料

本研究選取2016年7月至2017年7月于我院行宮頸病變篩查的受試者300例作為研究對(duì)象，300例患者年齡22-58歲，平均年齡(36.4±8.8)歲。所有患者均明確研究意義，并自愿簽署知情同意書(shū)。

1.2 納入標(biāo)準(zhǔn)與排除標(biāo)準(zhǔn)

納入標(biāo)準(zhǔn)：1)行LCT、HPV E6/E7 mRNA和HPV DNA檢測(cè)的患者；2)明確研究意義，并且自愿簽署知情同意書(shū)的患者；3)年齡在22-58歲之間的患者。

排除標(biāo)準(zhǔn)：1)行子宮切除術(shù)、宮頸手術(shù)或曾行盆腔放射治療史的患者；2)合并患有嚴(yán)重器質(zhì)性疾病的患者；3)妊娠期患者；4)不自愿簽署知情同意書(shū)的患者。

表1 不同細(xì)胞病理學(xué)分級(jí)檢出率比較

表2 不同細(xì)胞病理學(xué)分級(jí)診斷情況比較

1.3 方法

1.3.1 HPV E6/E7 mRNA檢測(cè)

所有宮頸細(xì)胞標(biāo)本3000r/min離心5min棄去上清，加入滅菌水重懸后加入細(xì)胞裂液(lysis mixture與proteinase K按1:800混合)，65℃孵育60min裂解細(xì)胞，加入終止液終止反應(yīng)。然后經(jīng)過(guò)雜交捕獲mRNA、信號(hào)放大、底物發(fā)光反應(yīng)用Quanti-Virus TM冷光儀檢測(cè)，經(jīng)Diacarta公司軟件轉(zhuǎn)換后自動(dòng)判斷HPV E6/E7 mRNA 拷貝數(shù)值。

1.3.2 HPV DNA檢測(cè)

HPV DNA采用導(dǎo)流雜交基因芯片分型檢測(cè)。宮頸標(biāo)本通過(guò)PCR技術(shù)擴(kuò)增獲得DNA，使用凱普Hybri Max 醫(yī)用核酸分子快速雜交儀進(jìn)行HPV DNA 雜交分析。

1.3.3 LCT檢測(cè)

超薄液基細(xì)胞學(xué)檢測(cè)(LCT)宮頸脫落細(xì)胞經(jīng)LCT離心制片機(jī)處理制片，固定、染色后經(jīng)細(xì)胞學(xué)診斷醫(yī)師依據(jù)2001年國(guó)際癌癥協(xié)會(huì)推薦的泊賽斯達(dá)系統(tǒng)(TBS)分類(lèi)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行閱片判讀。

1.4 觀察指標(biāo)

通過(guò)比較各組細(xì)胞標(biāo)本HPV E6/E7 mRNA和HPV DNA的敏感度、特異性、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值以及陰性預(yù)測(cè)值等指標(biāo)差異以期系統(tǒng)評(píng)估HPV E6/E7 mRNA和HPV DNA在宮頸病變?cè)\治中的臨床應(yīng)用潛力。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 不同細(xì)胞病理學(xué)分級(jí)檢出率比較

對(duì)于WNL組以及ASCUS組而言，HPV DNA的檢出率均高于HPV E6/E7 mRNA，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，而對(duì)于LSIL組以及HSIL而言，差異并無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)(表1)。

2.2 不同細(xì)胞病理學(xué)分級(jí)診斷情況比較

研究結(jié)果表明，對(duì)于LSIL組以及HSIL組而言，HPV E6/E7 mRNA的陽(yáng)性預(yù)測(cè)值、陰性預(yù)測(cè)值以及準(zhǔn)確度均顯著高于HPV DNA(P＜0.05)。研究結(jié)果表明，HPV E6/E7 mRNA對(duì)于診斷LSIL以及HSIL，具有更大的優(yōu)勢(shì)。

3 討論

宮頸癌作為女性常見(jiàn)惡性腫瘤之一，其發(fā)病率僅次于乳腺癌[4]。目前臨床普遍認(rèn)為高危型HPV的持續(xù)感染是發(fā)展成宮頸癌的重要原因，故對(duì)高危型HPV進(jìn)行早期診斷具有重要的臨床意義。既往，臨床對(duì)于宮頸癌的診斷常采用HPV E6/E7 mRNA以及HPV DNA 兩大方法，但是臨床對(duì)于上述兩法的選擇并不統(tǒng)一。因此，為進(jìn)一步提高HPV E6/E7 mRNA以及HPV DNA的診斷效果，筆者對(duì)上述兩法的臨床診斷價(jià)值進(jìn)行了系統(tǒng)評(píng)估。

研究結(jié)果表明，較之于HPV DNA而言，HPV E6/E7 mRNA具有更高的診斷價(jià)值(表1，表2)。HPV E6/E7 mRNA是一個(gè)新的HPV檢測(cè)指標(biāo)，是宮頸宿主細(xì)胞感染 HPV的最直接證據(jù)，相比LCT的細(xì)胞學(xué)檢測(cè)，能夠更早發(fā)現(xiàn)致病因素，早發(fā)現(xiàn)、早治療，減少發(fā)病率[5]。事實(shí)上，曾有研究明確表示，患者宮頸組織中HPV E6/E7表現(xiàn)出較強(qiáng)的癌基因活性，HPV E6/E7 mRNA表達(dá)異常往往與宮頸細(xì)胞癌變相關(guān)[6]。在本研究中，對(duì)于斷LSIL以及HSIL組而言，HPV E6/E7 mRNA具有較大的診斷優(yōu)勢(shì)，該現(xiàn)象與之前研究結(jié)果一致。

綜上，本研究系統(tǒng)證實(shí)了HPV E6/E7 mRNA對(duì)于宮頸癌變?cè)\斷具有較大的優(yōu)勢(shì)，值得在臨床大力推廣。