董昱廷 王喬平

（曲靖市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，云南曲靖 655000）

1 材料與方法

1.1 材料

樣品采集自陸良縣5個(gè)規(guī)?；i場(chǎng)，用棉拭子取腹瀉仔豬稀糞樣本147份，組織病料5份.

1.2 方法

1.2.1 大腸桿菌、沙門(mén)氏菌的分離鑒定

將棉拭子取得的稀糞樣本分別涂布于麥康凱瓊脂培養(yǎng)基上，37℃培養(yǎng)24 h，選取疑似大腸桿菌和沙門(mén)氏菌單個(gè)菌落，接種到新麥康凱瓊脂培養(yǎng)基上37℃純化培養(yǎng)24h。將分離菌株涂片，進(jìn)行革蘭氏染色，在顯微鏡油鏡下觀察細(xì)菌形態(tài)。

取純培養(yǎng)菌落接種肉湯培養(yǎng)基，于37℃培養(yǎng)24h，用接種針蘸取菌液接種于自制生化管，接種項(xiàng)目為三糖鐵（TSI）、葡萄糖、乳糖、蔗糖、麥芽糖、MR試驗(yàn)、V-P試驗(yàn)，確定菌屬。

伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)，將分離菌株按常規(guī)細(xì)菌接種方法接種到伊紅美蘭培養(yǎng)基上，37℃恒溫培養(yǎng)24-48h，在折射光下觀察菌落，長(zhǎng)出菌落呈紫黑色，帶有金屬光澤的為致病性大腸桿菌，菌落呈紫黑色，無(wú)金屬光澤的為非致病性大腸桿菌。

1.2.2 PCV、PRV的鑒定

取1000μl DEPC水到1.5ml離心管，把采集的糞便樣本（棉拭子）放入浸泡20min，4℃10000r離心10min，收集上清液4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

病毒DNA按照百泰克生物技術(shù)有限公司的全血基因DNA快速提取試劑盒的說(shuō)明書(shū)操作步驟提取。

1.2.3 PEDV、TEGV的鑒定

取700μl上述病料上清液放入1.5ml離心管，加入800μl RNAiso Plus，充分混勻，靜置10min，4℃10000r離心10min；吸取上清液600μl到新的離心管，加入氯仿300μl，混勻后靜置10min，4℃10000r離心10min；吸取上清液400μl，加入400μl異丙醇，混勻，靜置10min，4℃10000r離心10min；棄上清液后加入1ml乙醇（DEPC水配制），4℃10000r離心5min；棄液干燥，加入冷藏的DEPC水20μl，混勻后瞬時(shí)離心，立即進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄。

2 結(jié)果與分析

來(lái)源于陸良縣的5個(gè)豬場(chǎng)均分離到大腸桿菌，152份樣品中陽(yáng)性病料數(shù)147份，陽(yáng)性豬場(chǎng)率100%。大腸桿菌陽(yáng)性率為100%（152/152）。

A、B、C、D四個(gè)豬場(chǎng)分離到沙門(mén)氏菌，152份樣品中陽(yáng)性樣品數(shù)26份，陽(yáng)性豬場(chǎng)率80%，沙門(mén)氏菌陽(yáng)性率為17.11%（26/152），其中19份來(lái)源于A豬場(chǎng)，3份來(lái)源于B豬場(chǎng)，3份來(lái)源于C場(chǎng)，1份來(lái)源于D場(chǎng)。A、B、C、D豬場(chǎng)的陽(yáng)性率分別為為57.58%（19/33）、15%（3/20）、11.11（3/27）、14.29%（1/7）。

A豬場(chǎng)和E豬場(chǎng)檢測(cè)到199bp的PEDV特異條帶?？?52份樣本，陽(yáng)性樣品數(shù)共8份，陽(yáng)性豬場(chǎng)2個(gè)。PEDV的陽(yáng)性率為5.26%（8/152），其中，有6份來(lái)源于A豬場(chǎng)，有2份來(lái)源于E豬場(chǎng)，A豬場(chǎng)、E豬場(chǎng)的PEDV陽(yáng)性檢出率分別為18.18%（6/33）、3.08%（2/65）。B、C、D三個(gè)豬場(chǎng)PEDV的陽(yáng)性檢出率為零。5個(gè)豬場(chǎng)均未檢測(cè)到TGEV。

A豬場(chǎng)、C豬場(chǎng)、E豬場(chǎng)檢測(cè)到705bp的PCV特有條帶，總152份樣本中陽(yáng)性病料數(shù)69份，陽(yáng)性豬場(chǎng)3個(gè)。PCV的陽(yáng)性率為45.39%（69/152），其中，有20個(gè)樣品來(lái)源于A豬場(chǎng)的，有2個(gè)樣品來(lái)源于C豬場(chǎng)，有47個(gè)樣品來(lái)源于E豬場(chǎng)的。A豬場(chǎng)、C豬場(chǎng)、E豬場(chǎng)PCV的陽(yáng)性檢出率分別為60.61%（20/33）、7.41%（2/27）、72.31%（47/65）。B和D兩個(gè)豬場(chǎng)的PCV陽(yáng)性檢出率為零。5個(gè)豬場(chǎng)均未檢測(cè)到PRV。

3 討論

PEDV于1971年在英國(guó)發(fā)現(xiàn)，會(huì)引起豬的豬流行性腹瀉（PED），我國(guó)自20世紀(jì)80年代以來(lái)陸續(xù)有該病的報(bào)道。PCV可分為PCV-1和PCV-2兩個(gè)血清型。PCV-2對(duì)豬具有致病性，可引起豬斷奶后系統(tǒng)衰弱綜合征、皮炎和腎炎綜合征、增生性壞死性間質(zhì)性腎炎。沙門(mén)氏菌會(huì)引起豬的沙門(mén)氏菌病又稱豬副傷寒，是一種世界性疾病，在美國(guó)依阿華沙門(mén)氏菌病所造成的損失僅次于豬痢疾。本次試驗(yàn)中，被檢的5個(gè)豬場(chǎng)中，有2個(gè)豬場(chǎng)混合感染大腸桿菌和沙門(mén)氏菌，1個(gè)豬場(chǎng)混合感染大腸桿菌、PCV和PEDV，1個(gè)混合感染大腸桿菌、沙門(mén)氏菌和PCV；1個(gè)混合感染大腸桿菌、沙門(mén)氏菌、PCV和PEDV?？梢?jiàn)云南省陸良縣仔豬腹瀉病的病原混合感染現(xiàn)象十分嚴(yán)重，應(yīng)做好加強(qiáng)生物安全措施；免疫接種，疫苗選擇需慎重，接種時(shí)間需嚴(yán)格遵守；加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，注意畜舍的濕度、溫度、衛(wèi)生情況；提高母豬飼料中維生素的營(yíng)養(yǎng)水平，適當(dāng)使用免疫增強(qiáng)劑；對(duì)疑似發(fā)病豬群做好隔離工作，對(duì)豬群緊急接種。