趙海燕 陳永生

【摘要】 目的：研究各型肺癌患者外周血中CD4+ CD2 5+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（ regulatory Tcell，Tregs）的變化及意義。方法：采用流式細(xì)胞技術(shù)檢測116例肺癌患者外周血中CD4十CD25+ Tregs的變化，并選擇40倒健康體檢者作為對照組進(jìn)行結(jié)果分析。結(jié)果：肺癌患者外周血中CD4+ CD25+ Tregs占CD4+T淋巴細(xì)胞總數(shù)明顯高于健康對照者;化療前肺癌患者外周血中CD4+ CD25+ Tregs數(shù)明顯高于化療后肺癌患者。結(jié)論：肺癌患者外周循環(huán)血中CD4+ CD25+ Tregs水平表達(dá)明顯身高，可能與肺癌患者免疫功能調(diào)控紊亂有關(guān)，可作為肺癌患者診斷與治療的一項(xiàng)重要指標(biāo)。

【關(guān)鍵詞】 流武細(xì)胞術(shù);調(diào)節(jié)性T細(xì)胞;腫瘤

【中圖分類號】R969.4

【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】A

【文章編號】10050019《202 0）21-002-01

腫瘤的發(fā)生、發(fā)展不僅能抑制自身免疫性疾病的發(fā)生，還可能參與腫瘤免疫的調(diào)節(jié)。CD4+ CD25+ Tregs在人體內(nèi)的表達(dá)水平與腫瘤的關(guān)系報(bào)道較多，但有關(guān)CD4+ CD25+ Tregs的表達(dá)與肺癌關(guān)系的研究報(bào)道較少，我們探討了肺癌患者外周血CD4+ CD25+ Tregs水平與各型肺癌的關(guān)系及其臨床意義。

1 材料和方法

1.1 一般資料選擇2018年9月2019年9月我院住院的經(jīng)病理診斷的肺癌患者116例（男62，女54），年齡（25-83）歲，平均年齡58.5歲，其中鱗癌42例，小細(xì)胞未分化癌30例;大細(xì)胞未分化癌23例，腺癌21例。

1.2正常對照組選擇健康查體人員40例（男20，女20），年齡31-60歲，平均年齡55.5歲。其年齡、性別方面均與病例組具有可比性。排除腫瘤及免疫性等疾病。

1.3實(shí)驗(yàn)指標(biāo)與檢測方法

1.3.1患者人院后當(dāng)天取靜脈血;治療一個(gè)療程后，分別抽取空腹靜脈血3 ml，用流式細(xì)胞儀測定CD3+、CD4+、CD8+、CD25+含量，流式細(xì)胞儀為美國Beckman Coulter EpicsXL型。

1.3.2 小鼠抗人熒光標(biāo)記單克隆抗體anti- CD3、anti- CD4、anti- CD8、anti- CD25等均購自美國BDIS公司。

1.3.3淋巴細(xì)胞熒光抗體標(biāo)記新鮮的全血3011L與抗體10μL混合，室溫孵育30 min。加入anti- IgG異硫氰酸熒光素（FITC） 10μL，室溫孵育30 min，PBS冼滌，PBS洗滌后用1%多聚甲醛固定10 min后，用流式細(xì)胞儀分析。

1.3.4式細(xì)胞儀數(shù)據(jù)獲取和分析全部數(shù)據(jù)用流式細(xì)胞儀（美國BD公司）和軟件LYSYSⅡ進(jìn)行雙色熒光參數(shù)獲取和分析。

1.3.5 方法 以SPSS 10.0 for Windows統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，所有數(shù)據(jù)均用x±s表示，采用t檢驗(yàn)（獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)及配對樣本t檢驗(yàn)）及相關(guān)分析。

2 結(jié)果

2.1肺癌患者組和正常對照組CD3十等檢測結(jié)果見表1

2.2 肺癌患者組中化療組與未化療組結(jié)果比較見表2

2、3鱗癌、小細(xì)胞未分化癌、大細(xì)胞未分化癌、腺癌組都較正常對照組有顯 胞癌。著升高（P<0.01），這四組中又以腺癌組升高最多，其次為鱗癌、大細(xì)胞癌、小細(xì)

3 討論

CD4+CD25+Tregs是一具有免疫調(diào)節(jié)功能的T細(xì)胞亞群，大量的有研究表明，CD4+ CD25+ Tregs在許多腫瘤患者的外周血和腫瘤組織中均有增高[2]示腫瘤患者可能存在天然的免疫反應(yīng)，腫瘤患者體內(nèi)CD4+CD25+ Tregs數(shù)量的增高即是抑制腫瘤免疫的機(jī)制之一[3]，D4+ CD25十Tregs通過抑制效應(yīng)T細(xì)胞功能，在維持自身免疫耐受中發(fā)揮重要作用[4]，在以后的腫瘤治療中不容忽視。

通過對本組各型肺癌腫瘤患者外周血CCD4十CD25+ Tregs數(shù)量的檢測，并與正常對照組進(jìn)行了對比研究，發(fā)現(xiàn)正常人、肺癌患者外周血中CD4+ CD25+ Tregs分別占CD4+T淋巴細(xì)胞總數(shù)的（8.3±2.5）%和（12.7±1.65）%，引起這種變化的原因可能是腫瘤細(xì)胞通過某種機(jī)制使體內(nèi)CD4+ CD25+ Tregs的數(shù)量增高來抑制腫瘤免疫。本組結(jié)果顯示，肺癌患者外周血中CD4+ CD25+ Tregs的數(shù)量與病理類型無明顯相關(guān)關(guān)系（P>0.05），但與肺癌分化程度和臨床分期關(guān)系密切，這說明隨著腫瘤的進(jìn)展，腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生的CD4+ CD25+ Tregs數(shù)量增多，使免疫細(xì)胞的活性被抑制，有利于腫瘤的生長與轉(zhuǎn)移化療后患者體內(nèi)癌負(fù)荷減少，與化療前相比，抑制腫瘤免疫的CD4+ CD25+ Tregs數(shù)量也相應(yīng)減少，患者免疫抑制得以改善。

本研究認(rèn)為肺癌患者體內(nèi)CD4+ CD25+ Tregs比例上升可能是導(dǎo)致免疫抑制的原因之一，肺癌患者治療前后的CD4+ CD25+ Tregs數(shù)量的變化可作為肺癌患者診斷與治療及預(yù)后評估檢查的指標(biāo)之一。

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