□ 周 剛 劉榮琴 邢臺市食品藥品檢驗所 王彥斐 果 旗 北京中檢維康生物技術(shù)有限公司

慶大霉素（GEN）是一種氨基糖苷類抗生素[1]，對多種革蘭氏陽性菌和陰性菌都具有顯著的抗菌效果，廣泛應(yīng)用于畜牧業(yè)。但其對于人類具有明顯的毒性，能導(dǎo)致聽神經(jīng)和前庭功能損害[2—3]。慶大霉素有較強的腎毒性，能抑制腎臟細胞蛋白質(zhì)的合成，導(dǎo)致腎衰竭。為嚴格控制該類抗生素在動物源食品中的殘留，歐盟、美國和日本均對該類藥物的最高殘留限量（MRLs）進行了規(guī)定[4]，我國相關(guān)公告中規(guī)定牛奶中慶大霉素含量不得超過200 μg/L—1，本實驗方法可以對慶大霉素進行快速篩選，快速檢測牛奶中慶大霉素的含量。

本研究的目的為建立檢測乳品中慶大霉素殘留的免疫層析篩選方法。該方法的建立對確保動物性食品的安全，提高我國動物食品的質(zhì)量，增強我國動物性食品在國內(nèi)、國際市場上的競爭力，促進我國畜牧業(yè)的穩(wěn)定和健康發(fā)展，保障人類的健康，具有非常顯著的意義。

目前，慶大霉素的檢測方法主要有微生物法、免疫分析法（包括放射免疫法、酶聯(lián)免疫法、熒光免疫法、免疫傳感器和蛋白芯片）、儀器分析法（氣相色譜法、薄層色譜法、高效液相色譜法、毛細管電泳色譜法、液相色譜—質(zhì)譜法和氣相色譜—質(zhì)譜法）等。

免疫層析法分為酶免疫層析法和膠體金免疫層析法。日本的Watanabe 2002 年 報 道 了DHS（鹽 酸甘氨酰胺）的酶免疫層析法，兩者在牛奶中的檢測限為100 ng/mL。膠體金免疫層析法具有靈敏、快速、檢測成本低與結(jié)果判斷直觀等優(yōu)點。不需要儀器設(shè)備，適用于基層抽檢、乳品企業(yè)自檢、原料奶站現(xiàn)場大量篩查使用。

1 材料與方法

1.1 儀器和試劑

1.1.1 主要儀器

微量加樣器、iCheck—Ⅲ型定量快檢儀（北京中檢維康生物技術(shù)有限公司）等。

1.1.2 試劑

慶大霉素固體標準品（GEN，63.8%）中國生物制品檢定所。

乳品樣品：采購的不同品牌乳品樣品，分別為伊利、蒙牛、三元與君樂寶4 個品牌的乳品。

1.2 試驗方法

1.2.1 樣品的提取

吸取1 mL 牛奶樣品于1.5 mL 離心管中（如果不立即檢測，可將牛奶冷藏保存，避免腐敗，造成失效或污染），7 000 r/min、離心10 min。

1.2.2 樣品的檢測步驟

吸取120 μL 稀釋后的緩沖溶液加入金標抗體微孔中，再加入30 μL 濾液樣品，用移液器吸打數(shù)次混勻，吸取100 μL 混勻后的樣品加入到快檢卡樣品孔中。（37±1）℃反應(yīng)10 min 后，立即將快檢卡放入定量快檢儀中讀數(shù)，結(jié)果即為樣品的實際濃度。檢測范圍為30 ～300 μg/L。如讀值為300 μg/L或大于300 μg/L 時，需要將樣品用純水進行一定比例的稀釋，實際結(jié)果需要乘稀釋倍數(shù)。

2 討論與結(jié)果

2.1 樣品檢測結(jié)果

不同品牌的牛奶樣品中均未檢出慶大霉素殘留。

2.2 試驗結(jié)果的準確性和重復(fù)性

以不同品牌的牛奶做空白，分別添加50、100、200 μg/L 濃度水平的慶大霉素，然后用上述方法進行檢測，其檢測結(jié)果見表1 ～4。

表1 伊利純牛奶試驗結(jié)果

表2 蒙牛純牛奶試驗結(jié)果

表3 三元純牛奶驗結(jié)果

表4 君樂寶純牛奶試驗結(jié)果

根據(jù)表1 ～4 中回收率和精密度的數(shù)據(jù)，本文所建立的檢測慶大霉素的方法的回收率均在80.6%～97.8%，3 個水平加標和5 個平行性實驗變異系數(shù)在10%以內(nèi)。

3 結(jié)論

本方法檢測乳品中慶大霉素回收率為80%～110%，變異系數(shù)小于10%，檢測一個樣品的時間在20 min以內(nèi)，操作步驟及結(jié)果判定簡單明了，適用于大量樣品的同時篩選檢測。