程明剛，肖若蕾，袁侶明，程夢(mèng)玲，余海峰

(湖北科技學(xué)院藥學(xué)院，湖北 咸寧 437100)

苦參堿是清熱燥濕藥——苦參的主要成分，有廣譜抗菌作用[1]。含苦參制劑可治療濕疹[2]、銀屑病[3]等皮膚病。目前臨床上治療皮膚病常用的劑型有洗劑、乳劑、軟膏劑、酊劑[4]等。這些傳統(tǒng)型的劑型在使用時(shí)存在一定不足：洗劑、酊劑為液體制劑，容易流失，作用時(shí)間短；軟膏劑為半固體制劑，使用不恰當(dāng)會(huì)污染衣服，有的還會(huì)妨礙皮膚的正常功能等。這些會(huì)極大程度上影響其使用。

脂質(zhì)體是一種定向藥物載體，具有類細(xì)胞結(jié)構(gòu)[5]，有較強(qiáng)的組織相容性和細(xì)胞親和性，并且可以降低藥物的毒副性和提高藥物的穩(wěn)定性。凝膠劑可根據(jù)需求涂展在用藥部位。將脂質(zhì)體和凝膠結(jié)合，能延長(zhǎng)藥物作用時(shí)間，提高療效[6]。參考相關(guān)文獻(xiàn)[7]制備出苦參堿脂質(zhì)體凝膠，本文對(duì)其含量進(jìn)行了測(cè)定，為下一步的研究提供參考。

1 資料與方法

1.1 儀器與試劑

1.1.1 試劑

苦參堿(上海源葉生物科技有限公司，含量≥98%)，苦參堿對(duì)照品(含量99.5%，中檢所，批號(hào)：110805-200508)，卡波姆940(上海源葉生物科技有限公司，分析純)，無(wú)水乙醇(國(guó)藥集團(tuán)，分析純)，卵磷脂、膽固醇(國(guó)藥集團(tuán)，生化試劑)，乙腈、甲醇(國(guó)藥集團(tuán)，色譜純)

1.1．2 儀器

FA2104型電子分析天平(上海天平儀器廠)，KQ100型超聲波清洗器(江蘇省昆山市超聲儀器有限公司)，高效液相色譜儀(清華科技)，L6型紫外分光光度計(jì)(上海賢德實(shí)驗(yàn)儀器有限公司)，XD-3000型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海賢德實(shí)驗(yàn)儀器有限公司)。

1.2 方法

1.2.1 苦參堿脂質(zhì)體凝膠的制備

取處方量的卵磷脂與膽固醇于燒杯中，加入15mL無(wú)水乙醇，超聲溶解；在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上45℃，轉(zhuǎn)速5級(jí)除去無(wú)水乙醇，卵磷脂與膽固醇在瓶壁上形成透明均勻薄膜；另取適量的苦參堿，加pH4.5磷酸緩沖溶液30mL，超聲溶解后轉(zhuǎn)入旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中，40℃充分水化，然后超聲溶解，得到乳白色偏黃的苦參堿脂質(zhì)體混懸液。取一定量苦參堿脂質(zhì)體混懸溶液，加入適量卡波姆940，在室溫下放置24h，使其充分膨脹，得到淡黃色的苦參堿脂質(zhì)體凝膠。

1.2.2 空白脂質(zhì)體凝膠的制備

按“苦參堿脂質(zhì)體凝膠”的制備方法，制備不含苦參堿的脂質(zhì)體凝膠。

1.2.3 溶液的制備

(1)對(duì)照品溶液的制備。精密稱取10.0mg苦參堿對(duì)照品于100mL容量瓶中，加入適量甲醇超聲溶解，繼續(xù)加入甲醇稀釋至刻度，得到0.10mg/mL的苦參堿對(duì)照品溶液。

(2)樣品溶液的制備。精密稱取苦參堿脂質(zhì)體凝膠1.0g，加甲醇至50mL，超聲25min，過(guò)0.45m微孔濾膜，測(cè)定苦參堿的含量。

(3)空白溶液的制備。精密稱取不含苦參堿的脂質(zhì)體凝膠1.0g，按“樣品溶液的制備”方法制備空白溶液。

2 結(jié) 果

2.1 波長(zhǎng)的選擇

使用紫外分光光度計(jì)對(duì)其波長(zhǎng)在200～400nm之間進(jìn)行掃描。如圖1所示，在212nm處有最大波長(zhǎng)。

圖1 苦參堿對(duì)照品波長(zhǎng)圖

2.2 高效液相色譜條件

C18柱色譜柱(250mm×4．6mm，5μmol/L)，流動(dòng)相(乙腈-水(9∶1))，檢測(cè)波長(zhǎng)：212nm，流速0.8mL/min，柱溫：室溫。

2.3 苦參堿標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立

精密量取苦參堿對(duì)照品溶液0.1、1、2、4、6、8mL溶液各置于10mL容量瓶中，分別使用甲醇稀釋至刻度，搖勻。分別用0.22m微孔濾膜過(guò)濾，用進(jìn)樣針精密吸取20L注入液相色譜中，按上述色譜條件分析，測(cè)定的峰面積如下。見表1。

表1 不同濃度的苦參堿溶液在212nm下的峰面積

根據(jù)表格數(shù)據(jù)，以濃度C為橫坐標(biāo)，峰面積A為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，得到回歸方程為y=32860x+15438，R=0.9996，表明苦參堿在濃度為1.0～80.0 g/mL的范圍內(nèi)，濃度與峰面積呈線性關(guān)系。

2.4 專屬性試驗(yàn)

精密吸取對(duì)照品溶液、空白溶液、樣品溶液，按上述色譜條件分別進(jìn)樣20L，得到以下色譜圖。見圖2。

苦參堿對(duì)照品HPLC圖 空白脂質(zhì)體HPLC圖 脂質(zhì)體HPLC圖

如圖2所示，在該色譜條件下，苦參堿對(duì)照品溶液與苦參堿的脂質(zhì)體凝膠提取溶液大約在4min左右出峰，且脂質(zhì)體的其他輔料不會(huì)干擾苦參堿的含量測(cè)定。

2.5 精密度試驗(yàn)

按上述條件，精密吸取濃度為20g/mL苦參堿對(duì)照品溶液3次，每次20 L，注入高效液相色譜儀，得到峰面積，計(jì)算RSD為0.12%。見表2。

表2 精密度試驗(yàn)結(jié)果

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)

精密吸取濃度為20g/mL苦參堿對(duì)照品溶液20L，分別在它們配制完后的1、2、4、6、8、12h注入HPLC中，然后測(cè)定各自峰面積，計(jì)算RSD為0.4%，結(jié)果表明苦參堿在12h內(nèi)穩(wěn)定。見表3。

表3 穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果

2.7 回收率試驗(yàn)

精密吸取空白脂質(zhì)體溶液3份，各10mL，依次加入苦參堿1.0、1.5、2.5mg，超聲儀使苦參堿得到充分溶解。分別精密吸取溶液20L，注入HPLC中，測(cè)得峰面積，然后計(jì)算苦參堿含量和加樣回收率，測(cè)定結(jié)果符合液相色譜測(cè)定要求。見表4。

表4 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.8 樣品含量測(cè)定

取3個(gè)批號(hào)(20190305、20190312、20190319)的苦參堿脂質(zhì)體凝膠各3份，每份1.0g，置于50mL容量瓶中，按樣品溶液制備方法處理，按色譜測(cè)定條件，測(cè)其含量，結(jié)果三批樣品的平均含量分別為2.48、2.61、2.57mg/g。

3 討 論

3.1 卵磷脂和膽固醇配比的選擇

在制備脂質(zhì)體時(shí)，卵磷脂和膽固醇的配比對(duì)脂質(zhì)體的包封率影響較大，預(yù)試驗(yàn)結(jié)果表明當(dāng)卵磷脂與膽固醇配比為2∶1時(shí)，苦參堿包封率最高，因此，本實(shí)驗(yàn)所選擇的的卵磷脂與膽固醇的質(zhì)量比為2∶1。

3.2 樣品純度的影響

在預(yù)實(shí)驗(yàn)溶解樣品時(shí)，苦參堿粉末總會(huì)有部分無(wú)法溶解，最開始考慮到可能是苦參堿加多了，從而使得溶液過(guò)飽和導(dǎo)致苦參堿無(wú)法完全溶解，當(dāng)減少了苦參堿的量之后發(fā)現(xiàn)還是無(wú)法溶解，最終選擇將原有的藥品換成了現(xiàn)用純度更高的藥品才解決了苦參堿的溶解問(wèn)題。

3.3 測(cè)定方法的選擇

在苦參堿的含量測(cè)定方法中，流動(dòng)性有多種[8-9]。本文主要目的是建立苦參堿脂質(zhì)體凝膠劑中苦參堿的含量方法，為下一步研究提供方法學(xué)參考和依據(jù)。本文采用乙腈-水為流動(dòng)相，通過(guò)線性考察、專屬性實(shí)驗(yàn)、精密度實(shí)驗(yàn)、穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)等方面的內(nèi)容實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)用該方法穩(wěn)定性良好、精密度高、回收率高，可作為該制劑的含量測(cè)定方法。