蔡妙婷 劉雯 袁源見 曾慧婷 何小群 王小青 李晶

（江西省中醫(yī)藥研究院 南昌330046）

覆盆子始載于《名醫(yī)別錄》，用藥歷史悠久，具有益腎固精縮尿、養(yǎng)肝明目的功效[1]。近年來有大量研究發(fā)現(xiàn)覆盆子中含有黃酮、萜類、揮發(fā)油等多種化合物，具有抗氧化、抗腫瘤、降血糖及降血壓等生物活性。《中國藥典》2015 版采用鞣花酸及山奈酚-3-O-蕓香糖苷（KOR）含量作為質(zhì)量控制指標(biāo)，但目前對覆盆子藥理作用研究還停留在提取部位的活性上，其藥效物質(zhì)基礎(chǔ)及活性機(jī)制還不明確。本研究對其中幾種黃酮類有效成分藥理研究進(jìn)行綜述，為開發(fā)覆盆子潛在的藥理活性及相關(guān)作用機(jī)制研究提供依據(jù)。現(xiàn)報道如下：

1 KOR 藥理活性研究進(jìn)展

1.1 保肝、抗肝毒性作用 肝臟是人體內(nèi)代謝所有外來化合物的器官，受損后易導(dǎo)致各種疾病，如肝炎、肝硬化或肝癌等。多項研究表明KOR 具有保肝作用，且與其抗氧化活性有關(guān)。Wang Y 等[2]在研究紅花中KOR 的保肝作用時發(fā)現(xiàn)，KOR 能提高血清總蛋白（TP）水平，抑制四氯化碳（CCl4）誘導(dǎo)的血清天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶（AST）、血清堿性磷酸酶（ALP）和肝丙二醛（MDA）水平的升高，此外，KOR 能顯著恢復(fù)小鼠谷胱甘肽（GSH）水平，使小鼠體內(nèi)過氧化氫酶（CAT）和超氧化物歧化酶（SOD）維持正?；钚?，從而有效降低CCl4誘導(dǎo)的小鼠氧化性肝損傷。山奈酚-3-O-蕓香糖苷同時也是維藥雪白睡蓮（Nymphaea Candida C.Presl）中的活性成分，Zhao J等[3]運(yùn)用刀豆蛋白A（Con A）和D-半乳糖胺誘導(dǎo)的小鼠急性肝損傷模型研究其抗肝炎活性時發(fā)現(xiàn)，KOR 能顯著降低Con A 誘導(dǎo)產(chǎn)生的肝損傷，抑制肝損傷引起的血清標(biāo)志物AST 和丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶（ALT）變化，抑制白細(xì)胞介素-1β（IL-1β）、白細(xì)胞介素-6（IL-6）及腫瘤壞死因子-α（TNF-α）的升高。KOR 對D-半乳糖胺誘導(dǎo)的化學(xué)性肝損傷也有保護(hù)作用，能顯著降低血清酶和細(xì)胞因子水平，促進(jìn)肝勻漿抗氧化指標(biāo)恢復(fù)到正常水平。

1.2 神經(jīng)保護(hù)作用 KOR 對治療和預(yù)防中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病具有較強(qiáng)的生物活性。Mira A 等[4]研究發(fā)現(xiàn)KOR 能顯著降低Aβ25-35 誘導(dǎo)的神經(jīng)毒性，其對神經(jīng)細(xì)胞的保護(hù)機(jī)制與DJ-1 的特異性結(jié)合有關(guān)。深入研究后發(fā)現(xiàn)，KOR 的神經(jīng)保護(hù)作用還與線粒體膜的穩(wěn)定和活性氧的減少有關(guān)，且KOR 可以在胃腸道中以相對適中的比例被吸收并輸送到大腦，因此，其可能是預(yù)防和治療帕金森病等神經(jīng)退行性疾病的有效藥物[5～6]。Hu GQ 等[7]為探明KOR 的神經(jīng)保護(hù)作用機(jī)制，采用腦中動脈缺血/再灌注建立腦缺血/再灌注損傷模型研究了KOR 是否通過JAK2/STAT3 通路保護(hù)腦缺血/再灌注損傷誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡。結(jié)果表明，KOR 能夠改變受損神經(jīng)元的形態(tài)和結(jié)構(gòu)，減少凋亡細(xì)胞數(shù)量，下調(diào)p-JAK2、p-STAT3、Caspase-3、Bax 的表達(dá)，降低Bax 的免疫反應(yīng)活性，增加Bcl-2 蛋白的表達(dá)和免疫反應(yīng)活性，提示KOR 可通過JAK2/STAT3 通路保護(hù)腦缺血/再灌注損傷誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。

1.3 抗氧化、抗衰老作用 衰老是人類生活中的必經(jīng)過程，是由自由基（ROS）的存在引發(fā)的。Liana 等[8]對火龍果果皮提取物（DFPE）和KOR 對清除過氧化氫（H2O2）和抑制透明質(zhì)酸酶的抗氧化活性進(jìn)行了測定和比較。分別以15.63 μg/ml、31.25 μg/ml、62.50 μg/ml、125.00 μg/ml、250.00 μg/ml、500.00 μg/ml 和 5.21 μg/ml、10.42 μg/ml、20.83 μg/ml、41.70 μg/ml、83.33 μg/ml、166.67 μg/ml 系列濃度進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，結(jié)果顯示，DFPE 和KOR 均具有抗氧化活性和抗衰老能力。因此認(rèn)為DFPE 和KOR 能夠清除H2O2和抑制透明質(zhì)酸酶活性，有抗氧化和抗衰老作用。

2 金絲桃苷（HS）藥理活性研究進(jìn)展

2.1 保肝作用 對乙酰氨基酚（APAP）具有一定的肝毒性，Xie W 等[9]用APAP 誘導(dǎo)的肝損傷模型研究HS 對小鼠肝毒性的影響。在APAP（300 mg/kg）注射前3 d，分別用HS（10 mg/kg、50 mg/kg 及100 mg/kg）灌胃處理小鼠。APAP 誘導(dǎo)的肝損傷特征表現(xiàn)為血清轉(zhuǎn)氨酶升高，MDA 和3-硝基酪氨酸（3-NT）的形成，及肝SOD、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）和GSH 的降低。最終結(jié)果顯示，HS 以劑量依賴性顯著減輕APAP 誘導(dǎo)的肝損傷，100 mg/kg為最佳有效劑量。其可能的作用機(jī)制為通過增加尿苷二磷酸葡萄糖醛酸轉(zhuǎn)移酶（UGTs）和硫酸基轉(zhuǎn)移酶（SULTs）的活性及信使核糖核酸（mRNA）表達(dá)，抑制CYP2E1 基因的活性，從而抑制毒性中間產(chǎn)物的形成，促進(jìn)APAP 肝臟解毒。這一研究證明HS 可以作為一種潛在的天然的肝臟保護(hù)劑。

2.2 抗氧化作用 氧化應(yīng)激可導(dǎo)致多種疾病的發(fā)生，包括糖尿病、心血管疾病、神經(jīng)退行性疾病，甚至癌癥。HS 可通過防止氧化損傷進(jìn)而發(fā)揮治療及預(yù)防疾病的作用。為了進(jìn)一步了解其抗氧化防御機(jī)制，Gao Y 等[10]系統(tǒng)研究了HS 對酵母中H2O2、CCl4和鎘氧化損傷的調(diào)節(jié)作用。在野生型菌株（WT）和突變體gtt1 和gtt2 中，HS 可顯著提高細(xì)胞活力，降低脂質(zhì)過氧化，降低細(xì)胞內(nèi)ROS 水平。同時，在H2O2和CCl4的刺激下，經(jīng)HS 處理后的ctt1 菌株表現(xiàn)出不同的細(xì)胞活力和清除細(xì)胞內(nèi)ROS 的能力。結(jié)果表明，啤酒酵母中HS 的抗氧化反應(yīng)依賴于細(xì)胞間ROS 解毒系統(tǒng)。廣義的酶抗氧化防御系統(tǒng)包括NADH：醌氧化還原酶1、超氧化物歧化酶和血紅素氧合酶-1（HO-1）。Park JY 等[11]研究從HO-1 誘導(dǎo)的角度研究HS 對人晶狀體上皮細(xì)胞系HLE-B3 H2O2誘導(dǎo)氧化應(yīng)激的保護(hù)作用。結(jié)果顯示，HS 可劑量依賴性增加HO-1 的mRNA 和蛋白表達(dá)。同時，HS 還可提高由細(xì)胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶（ERK）上游調(diào)控的核轉(zhuǎn)錄因子Nrf2 水平及其抗氧化反應(yīng)元件的結(jié)合活性。此外，HS 還可激活ERK，恢復(fù)H2O2導(dǎo)致的細(xì)胞活力降低。表明HS 是一種可有效通過HO-1 誘導(dǎo)保護(hù)細(xì)胞免受氧化應(yīng)激的化合物。

2.3 抗腫瘤作用 肺癌是世界上最常見的惡性腫瘤之一。非小細(xì)胞肺癌（NSCLC）約占所有肺癌的85%。Fu T 等[12]在體外研究了自噬是否參與了人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞中HS 的抗癌機(jī)制。通過比較人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞株A549 和支氣管上皮細(xì)胞BEAS-2B 發(fā)現(xiàn)HS 劑量依賴性地增加了A549 細(xì)胞LC3-Ⅱ和自噬體數(shù)量的表達(dá)，但在BEAS-2B 細(xì)胞中沒有這種作用。此外，HS 可劑量依賴性地抑制Akt、mTOR、p70S6K 和4E-BP1 的 磷酸 化，增 加A549 細(xì)胞ERK1/2 的磷酸化。HS 預(yù)處理可逆轉(zhuǎn)胰島素（200 nmol/L）導(dǎo)致的Akt 的磷酸化水平升高，A549 細(xì)胞LC3-Ⅱ表達(dá)的降低，而MEK1/2 抑制劑U0126（20 μmol/L）對HS 誘導(dǎo)的LC3-Ⅱ表達(dá)無作用。HS 劑量依賴性地抑制A549 細(xì)胞的存活，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，自噬抑制劑甲基腺嘌呤（2.5 mmol/L）預(yù)處理后，自噬活性明顯減弱。說明HS 在體外可誘導(dǎo)人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞的自噬和凋亡。自噬是通過抑制 Akt/mTOR/p70S6K 信號通路誘導(dǎo)的，Akt/mTOR/p70S6K 信號通路參與了HS 的抗癌作用。蔣參等[13]探究HS 對人肝癌HepG2 細(xì)胞增殖和凋亡的作用及作用機(jī)制時發(fā)現(xiàn)，HS（20 nmol/L）處理細(xì)胞4 d 能明顯抑制HepG2 細(xì)胞增殖（P＜0.05），HS（50 nmol/L）處理細(xì)胞3、4 d 能顯著降低細(xì)胞增殖倍數(shù)（P＜0.05），與HepG2 組比較，HS（10、20、50 nmol/L）組細(xì)胞凋亡率明顯升高（P＜0.05），凋亡細(xì)胞數(shù)明顯增多（P＜0.05），HS（20、50 nmol/L）處理細(xì)胞 后，HepG2 細(xì) 胞 通 路 蛋 白P53、Caspase-9 和Caspase-3 表達(dá)水平明顯升高（P＜0.05）。表明HS 能抑制肝癌HepG2 細(xì)胞增殖、促進(jìn)細(xì)胞凋亡，其機(jī)制可能與誘導(dǎo)P53/Caspase 信號通路激活有關(guān)。

3 異槲皮苷藥理活性研究進(jìn)展

3.1 抗氧化、抗炎作用 黃酮苷的6'-OH（ω-OH）具有明顯的抗氧化活性。Li X 等[14]選擇槲皮素和異槲皮素苷作為模型化合物，研究6'-OH 基團(tuán)在幾種抗氧化途徑中的作用，包括Fe2+結(jié)合、供氫和電子轉(zhuǎn)移（ET）。結(jié)果表明，槲皮苷和異槲皮苷均具有劑量依賴性的抗氧化活性。然而，在鐵離子結(jié)合、基于ET的鐵離子還原抗氧化能力和基于多通道的超氧陰離子清除實(shí)驗(yàn)中，異槲皮苷比槲皮苷表現(xiàn)出更高的活性。在基于氧化損傷間充質(zhì)干細(xì)胞（MSC）模型的指標(biāo)物質(zhì)檢測中，異槲皮苷作為細(xì)胞保護(hù)劑的作用比槲皮苷更有效。表明異槲皮苷可以間接并直接參與ROS 的清除，且異槲皮苷對ROS 的清除活性高于槲皮苷，能增強(qiáng)對MSCs 的保護(hù)作用，保護(hù)MSCs 不受ROS 誘導(dǎo)的氧化損傷，與槲皮苷相比，異槲皮苷中的6'-OH 基團(tuán)通過空間位阻或氫鍵作用增強(qiáng)了ET 和Fe2+的螯合能力，降低了施氫能力。肥大細(xì)胞和嗜堿性細(xì)胞是細(xì)胞質(zhì)中含有豐富分泌顆粒的多功能效應(yīng)細(xì)胞。這兩種類型的細(xì)胞都參與各種炎癥和免疫事件，產(chǎn)生一系列炎癥介質(zhì)，如細(xì)胞因子。Li L等[15]通過研究異槲皮苷是否能調(diào)節(jié)人類嗜堿細(xì)胞KU812 的過敏和炎癥反應(yīng)，以闡明其對蛋白激酶（MAPK）磷酸化和核轉(zhuǎn)錄因子（NF）-κB 激活的影響。結(jié)果顯示，異槲皮苷可顯著降低組胺和促炎細(xì)胞因子的產(chǎn)生，降低ERK 磷酸化水平，證明異槲皮苷具有潛在治療炎癥和過敏反應(yīng)的作用。

3.2 抗腫瘤作用 異槲皮苷對結(jié)腸癌、肝癌、胰腺癌、膀胱癌等多種癌細(xì)胞均有抑制作用[16～19]，Kangawa Y 等[20]在小鼠偶氮甲烷/右旋糖酐硫酸鈉誘導(dǎo)的結(jié)直腸癌模型中，比較了酶改性異槲皮苷及雷公藤紅素的化學(xué)預(yù)防作用，并與著名的抗癌天然植物色素花青素進(jìn)行了比較。同時以急性右旋糖酐鈉誘導(dǎo)結(jié)腸炎為模型，研究其對結(jié)腸癌細(xì)胞系和黏膜上皮細(xì)胞增殖活性的影響。研究發(fā)現(xiàn)，酶改性異槲皮苷通過抑制炎癥和細(xì)胞增殖，改善了偶氮甲烷/右旋糖酐硫酸鈉誘導(dǎo)的結(jié)直腸癌，表明酶改性異槲皮苷及雷公藤紅素首先在結(jié)腸炎初期表現(xiàn)出抗右旋糖酐硫酸鈉作用，在隨后的炎癥相關(guān)癌癥發(fā)展階段表現(xiàn)出了抗腫瘤作用。揭示了酶改性異槲皮苷的抗炎活性及其對腫瘤的影響。異槲皮苷還對卵巢癌細(xì)胞具有抑制作用。Michalcova K 等[21]運(yùn)用OVCAR-3 細(xì)胞系統(tǒng)研究了其在人卵巢癌細(xì)胞中的作用機(jī)制，觀察了不同濃度異槲皮苷（5、10、25、50、100 μg/ml）對OVCAR-3 細(xì)胞的活力、存活量、細(xì)胞凋亡，人轉(zhuǎn)化生長因子-β1（TGF-β1）和TGF-β1受體的釋放，細(xì)胞內(nèi)ROS 生成的影響，結(jié)果表明異槲皮苷對卵巢癌細(xì)胞的作用可能是通過抑制細(xì)胞內(nèi)ROS 生成的抗氧化途徑介導(dǎo)，從而限制氧化應(yīng)激產(chǎn)生。

3.3 神經(jīng)保護(hù)作用 自由基引起的神經(jīng)退行性病變可導(dǎo)致帕金森?。≒D）及阿爾茲海默癥（AD）等疾病，異槲皮苷能通過降低6-羥基多巴胺（6-OHDA）誘導(dǎo)的細(xì)胞膜脂質(zhì)過氧化來保護(hù)神經(jīng)細(xì)胞。異槲皮苷通過其較好的抗氧化能力對6-OHDA 誘導(dǎo)的神經(jīng)毒性有保護(hù)作用。此外，神經(jīng)突的形成和突觸模式是功能性神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育的基礎(chǔ)。黃酮類化合物通過多種分子途徑對大腦產(chǎn)生有益影響。在神經(jīng)發(fā)生和突觸形成過程中發(fā)生的細(xì)胞骨架改變通常涉及Rho GTP 酶家族。因此，異槲皮苷具有潛在的治療PD 作用[22]。某些天然產(chǎn)物可以降低患AD 的風(fēng)險。Carmona V 等[23]利用淀粉樣毒性模型（MC65 細(xì)胞）檢測異槲皮苷單體化合物對AD 的作用，研究了異槲皮苷抑制β-分泌酶、γ-分泌酶活性和乙酰膽堿酯酶的活性，以改善β-淀粉樣沉淀。此外，它們作為ROS 的清 除 劑、Caspase-3、Caspase-8 和Caspase-9激活的抑制劑及泛素-蛋白酶系的胰凝乳蛋白酶樣活性的調(diào)節(jié)劑，常被用來抑制谷氨酸誘導(dǎo)的氧化，表明異槲皮苷有一定的抗AD 活性。

4 討論

覆盆子作為臨床常用藥，其藥理活性研究一直受到廣大學(xué)者的關(guān)注，本研究通過綜述覆盆子中研究較多的幾種有藥理活性的黃酮類單體化合物的研究進(jìn)展及相關(guān)藥理作用機(jī)制，發(fā)現(xiàn)覆盆子含有的3種黃酮類化合物均具有較強(qiáng)的抗氧化能力，且具有保護(hù)神經(jīng)系統(tǒng)的活性，故而對自由基引起的神經(jīng)退行性疾病或有一定作用，如AD 及PD 等，尤其是AD，隨著世界人口老齡化加速以及缺少有效的治療藥物，AD 已成為嚴(yán)重威脅老年健康的疾病之一，覆盆子中黃酮類成分的抗氧化及神經(jīng)保護(hù)作用的研究為今后研究覆盆子抗AD 藥理活性及作用機(jī)制提供了理論參考。但隨著中藥提取分離技術(shù)的進(jìn)步，更多活性化合物將從覆盆子中分離得到，覆盆子化學(xué)成分復(fù)雜，其他成分如萜類、揮發(fā)油及鞣花酸等的藥理作用同樣需要進(jìn)一步研究，因此，更深層次地挖掘覆盆子的化學(xué)成分與其藥理活性的聯(lián)系，對于覆盆子的臨床用藥與制劑開發(fā)具有重要意義。