安麗，閆娟，張杰，拓明祥，田青，楊紅麗

延安市人民醫(yī)院耳鼻咽喉頭頸外科，陜西 延安 716000

慢性鼻竇炎伴有鼻息肉是臨床鼻科常見慢性炎癥性疾病，患病率逐年遞增且趨于低齡化，已成為影響人類生活質(zhì)量的全球性健康問題[1]。藥物或手術(shù)治療是臨床治療慢性鼻竇炎伴有鼻息肉的常用方法，但有20%的患者治療后效果不佳且在短時(shí)間內(nèi)復(fù)發(fā)，導(dǎo)致病情遷延不愈[2]。盡管臨床對(duì)慢性鼻竇炎伴有鼻息肉進(jìn)行了大量研究，但至今對(duì)其發(fā)病機(jī)制仍尚未明確。有學(xué)者認(rèn)為環(huán)境、微生物、遺傳或免疫應(yīng)答缺陷等因素與慢性鼻竇炎伴有鼻息肉的發(fā)生有關(guān)[3]。研究指出，免疫反應(yīng)參與了慢性鼻竇炎伴鼻息肉的發(fā)生及發(fā)展，但關(guān)于其炎性反應(yīng)對(duì)慢性鼻竇炎伴有鼻息肉的發(fā)病作用及對(duì)病情進(jìn)展的影響仍有諸多不明[4]。調(diào)節(jié)性T 細(xì)胞(Tregs)為自身免疫反應(yīng)的T 細(xì)胞亞群，被認(rèn)為是慢性鼻竇炎伴有鼻息肉的危險(xiǎn)因素[5]。維生素D屬于固醇類脂溶性維生素，屬人體免疫調(diào)節(jié)因子，血清25(OH)D 是其主要表現(xiàn)形式，并間接對(duì)Tregs 生產(chǎn)影響，調(diào)節(jié)慢性鼻竇炎伴有鼻息肉的發(fā)生及發(fā)展[6]。對(duì)此，本研究主要分析了慢性鼻竇炎伴有鼻息肉患者的血清25(OH)D、Tregs及相關(guān)細(xì)胞因子表達(dá)水平與病情變化的關(guān)系，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2018 年11 月至2019 年12月延安市人民醫(yī)院耳鼻咽喉頭頸外科收治的80 例慢性鼻頭炎伴鼻息肉患者作為觀察組，同期選擇不伴有鼻息肉慢性鼻竇炎患者80 例作為觀察組1。納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合《耳鼻咽喉·頭頸外科疾病診療指南》[7]中相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)；②病程＞12 周，且未合并其他免疫性疾病。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并糖尿病、高血壓等慢性疾??；②肝、腎、心功能嚴(yán)重障礙或合并惡性腫瘤者；③合并哮喘、變異性鼻炎等變態(tài)反應(yīng)性疾病；④近1個(gè)月內(nèi)有接受激素、抗生素治療；⑤合并嚴(yán)重心腦血管疾病者；⑥既往有代謝紊亂疾病史；⑦阿司匹林耐受不良者。觀察組中男性 48 例，女性 32 例；年齡 18～65 歲，平均(41.65±7.52)歲；體質(zhì)量42～70 kg，平均(55.13±3.68)kg。觀察組1中男性47例，女性33例；年齡18～65歲，平均(41.50±7.43)歲；體質(zhì)量42～70 kg，平均(54.98±3.70)kg。另選取健康體檢者80 例作為對(duì)照組，其中男性41例，女性 39 例；年齡 18～64 歲，平均(41.99±7.31)歲；體質(zhì)量42～69 kg，平均(54.88±3.69)kg。三組受檢者性別、年齡和體質(zhì)量比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，具有可比性。本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，所有入組者均知曉本研究并簽署知情同意書。

1.2 方法 (1)采集三組受檢者空腹外周靜脈血10 mL，常溫靜置10 min 后，給予患者離心處理(3 000 r/min，離心半徑5 cm)15 min，分離上清液保存于-45℃的冰箱中待測。采用酶聯(lián)免疫吸附法(生產(chǎn)廠家：武漢興華生物科技有限公司)檢測血清中25(OH)D、白細(xì)胞介素-10(IL-10)、白細(xì)胞介素-35(IL-35)、轉(zhuǎn)化生長因子β (TGF-β)、腫瘤壞死因子-α (TNF-α)、白細(xì)胞介素-1β(IL-1β)水平；取出殘留液體加入稀釋緩沖并充分搖勻，離心棄上層清液，采用Foxp3流式細(xì)胞儀(生產(chǎn)廠家：美國eBioscience公司)檢測Tregs水平。25(OH)D評(píng)價(jià)方法：依據(jù)《臨床內(nèi)分泌學(xué)與新陳代謝》[8]進(jìn)行評(píng)定，以25(OH)D＜20 ng/mL 定義為維生素 D 缺乏。(2)鼻竇CT檢查：參考點(diǎn)與硬腭垂直，前者為鼻骨，后者至蝶竇后壁，層厚2 mm，間距5 mm，窗技術(shù)2 000/200 Hu。(3)鼻竇CT評(píng)分：依據(jù)左側(cè)、右側(cè)，分析每側(cè)分上頜竇、額竇、蝶竇、前、后組篩竇，每側(cè)12分，總分0～24分。

1.3 觀察指標(biāo) 比較三組受檢者的血清25(OH)D、Tregs、TGF-β、IL-35、IL-10、TNF-α、IL-1β水平，并分析上述指標(biāo)與疾病的相關(guān)性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS20.0 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差()表示，多組均數(shù)比較采用方差分析，兩兩比較采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，相關(guān)性采用Pearson 相關(guān)分析，均以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 三組受檢者的25(OH)D、Tregs 及相關(guān)因子比較 觀察組患者的25(OH)D、Tregs、TGF-β、IL-35、IL-10明顯低于觀察組1和對(duì)照組，而TNF-α、IL-1β水平則明顯高于觀察組1 和對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，見表1。

表1 三組受檢者25(OH)D及Tregs及相關(guān)因子比較()

表1 三組受檢者25(OH)D及Tregs及相關(guān)因子比較()

注：與對(duì)照組比較，aP＜0.05；與觀察組1比較，bP＜0.05。

組別觀察組觀察組1對(duì)照組F值P值例數(shù)80 80 80 25(OH)D(ng/mL)14.23±3.12ab 17.15±2.14a 21.56±3.24 131.721 0.001 IL-1β(ng/mL)6.13±1.12ab 4.23±0.65a 3.12±0.37 306.591 0.001 TGF-β(ng/mL)78.12±5.13ab 84.12±6.11a 89.13±6.11 72.220 0.001 IL-35(ng/mL)55.12±3.12ab 59.18±4.52a 62.10±6.23 42.761 0.001 IL-10(ng/mL)15.32±3.18ab 18.12±4.18a 20.13±4.25 30.682 0.001 TNF-α(ng/mL)21.46±5.12ab 18.31±3.66a 14.12±2.99 67.031 0.001 Tregs(%)5.31±1.12ab 6.58±1.74a 7.85±1.51 58.992 0.000 1

2.2 觀察組不同血清25(OH)D 水平患者的外周血Tregs、細(xì)胞因子比較 血清25(OH)D＜20 ng/mL 患者的Tregs、TGF-β、IL-35、IL-10 水平明顯低于血清25(OH)D≥20 ng/mL 患者，而IL-1β、TNF-α則明顯高于血清25(OH)D≥20 ng/mL 患者，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，見表2。

表2 觀察組不同血清25(OH)D水平患者的外周血Tregs、細(xì)胞因子比較()

表2 觀察組不同血清25(OH)D水平患者的外周血Tregs、細(xì)胞因子比較()

血清25(OH)D＜20 ng/mL≥20 ng/mL t值P值例數(shù)60 20 Tregs(%)4.52±0.78 5.62±0.98 7.855＜0.05 IL-1β(ng/mL)6.12±1.52 4.13±1.12 9.569＜0.05 TGF-β(ng/mL)65.13±5.11 78.13±6.23 14.430＜0.05 IL-35(ng/mL)52.13±7.02 57.51±6.55 5.011＜0.05 IL-10(ng/mL)12.52±2.16 16.79±2.52 11.264＜0.05 TNF-α(ng/mL)23.12±3.18 15.56±2.11 17.718＜0.05

2.3 三組受檢者的鼻竇CT評(píng)分和鼻內(nèi)鏡評(píng)分比較 觀察組患者的鼻竇CT 評(píng)分、鼻內(nèi)鏡評(píng)分明顯高于觀察組1 和對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，見表3。

表3 三組受檢者鼻竇CT評(píng)分和鼻內(nèi)鏡評(píng)分比較(，分)

表3 三組受檢者鼻竇CT評(píng)分和鼻內(nèi)鏡評(píng)分比較(，分)

注：與對(duì)照組比較，aP＜0.05；與觀察組1比較，bP＜0.05。

組別鼻內(nèi)鏡評(píng)分例數(shù) 鼻竇CT評(píng)分觀察組觀察組l對(duì)照組F值P值6.18±1.21ab 4.28±0.78a 2.01±0.35 480.971 0.001 80 80 80 7.85±1.25ab 5.10±0.87a 2.57±0.52 646.261 0.001

2.4 相關(guān)性分析 Pearson 相關(guān)性分析顯示，血清25(OH)D與鼻內(nèi)鏡評(píng)分、CT評(píng)分呈負(fù)相關(guān)(r值分別為0.457、0.408，P值＜0.05)，Tregs與鼻內(nèi)鏡評(píng)分、CT評(píng)分呈負(fù)相關(guān)(r值分別為0.371、0.529，P值＜0.05)。

3 討論

慢性鼻竇炎伴有鼻息肉具有較高的發(fā)病率、復(fù)發(fā)率，嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量，且直到目前為止臨床尚未闡明其具體發(fā)病原因[9]。相關(guān)資料表明，炎性反應(yīng)相關(guān)的細(xì)胞因子貫穿慢性鼻竇炎伴鼻息肉疾病的發(fā)生的整個(gè)過程，但是對(duì)于各個(gè)因子之間相相互作用的具體情況及關(guān)系尚不明確[10]。因此，相關(guān)細(xì)胞因子在慢性鼻竇炎伴有鼻息肉的病理生理學(xué)機(jī)制中日益獲得臨床重視。

Tregs是一種具有免疫調(diào)節(jié)作用的細(xì)胞因子，其免疫調(diào)節(jié)主要是通過表達(dá)的特異性轉(zhuǎn)錄因子、細(xì)胞接觸及分泌IL-10、TGF-β細(xì)胞來體現(xiàn)[11]。資料表明，自然Tregs分泌具有抗炎作用，如IL-35、TGF-β等，TGF-β主要是通過趨化并募集單核細(xì)胞發(fā)揮抗炎及抑制免疫功能的作用[12]。IL-10具有降低炎性因子合成的作用，其主要是通過抑制細(xì)胞增殖而發(fā)揮作用，如TNF-α、IL-1β等，進(jìn)而延緩病情進(jìn)展[13]。研究發(fā)現(xiàn)，在慢性鼻竇炎伴有鼻息肉患者中，其鼻息肉組織可能存在局部免疫激活現(xiàn)象，當(dāng)鼻黏膜受到刺激時(shí)(如微生物病原菌或炎性因子)，Tregs 表達(dá)水平會(huì)快速減少，從而導(dǎo)致IL-35、TGF-β及IL-10 的表達(dá)水平在短時(shí)間內(nèi)快速下降，從而刺激T 細(xì)胞增殖、活化，增加局部免疫炎癥反應(yīng)[14-15]。一旦機(jī)體組織內(nèi)的抗炎反應(yīng)處于弱炎癥反應(yīng)狀態(tài)時(shí)，可誘導(dǎo)免疫炎癥反應(yīng)處于惡性循環(huán)狀態(tài)，從而誘導(dǎo)慢性鼻竇炎伴有鼻息肉發(fā)生。因此認(rèn)為Tregs表達(dá)水平下降可導(dǎo)致炎癥反應(yīng)持續(xù)，是誘導(dǎo)慢性鼻竇炎伴有鼻息肉發(fā)生的危險(xiǎn)因素之一。

維生素屬于人體組織中主要且重要的營養(yǎng)元素之一，不僅對(duì)免疫系統(tǒng)及Tregs 具有調(diào)節(jié)作用，同時(shí)對(duì)天然免疫、獲得性免疫均具有調(diào)節(jié)作用[16]。資料表明，維生素D 在人體中的存在方式以維生素D2、維生素D3體現(xiàn)，而維生素D3經(jīng)肝臟被羥化，從而形成25(OH)D，即維生素D的主要表現(xiàn)形式，被認(rèn)為是評(píng)估人體維生素營養(yǎng)狀態(tài)的敏感性指標(biāo)[17]。研究顯示，大多數(shù)慢性鼻竇炎伴有鼻息肉患者均存在25(OH)D 缺乏現(xiàn)象，因此認(rèn)為25(OH)D與慢性鼻竇炎伴有鼻息肉的發(fā)生具有密切關(guān)系[18]。研究表明，慢性鼻竇炎伴有鼻息肉患者的血清25(OH)D 表達(dá)水平明顯低于健康對(duì)照組，且隨著病情加重，患者的血清25(OH)D 表達(dá)水平則隨之降低[19]。本研究表明，慢性鼻竇炎伴有鼻息肉患者的血清 25(OH)D、Tregs、TGF-β、IL-35、IL-10表達(dá)水平明顯低于慢性鼻竇炎不伴有鼻息肉患者及健康體檢者，而TNF-α、IL-1β水平高于慢性鼻竇炎不伴有鼻息肉患者及健康體檢者。由此可見，血清25(OH)D、Tregs、TGF-β、IL-35、IL-10、TNF-α、IL-1β均參與了慢性鼻竇炎伴鼻息肉的發(fā)生及發(fā)展，臨床應(yīng)密切監(jiān)測其表達(dá)水平。

CT評(píng)分、鼻內(nèi)鏡評(píng)分是目前國內(nèi)用于評(píng)估慢性鼻竇炎伴有鼻息肉嗅覺功能的有效方法，且二者具有較好的操作性及可重復(fù)性。本結(jié)果表明慢性鼻竇炎伴有鼻息肉患者鼻竇CT評(píng)分、鼻內(nèi)鏡評(píng)分均高于慢性鼻竇炎不伴有鼻息肉和健康對(duì)照者；慢性鼻竇炎伴有鼻息肉患者的血清25(OH)D水平、Tregs與CT評(píng)分、鼻內(nèi)鏡評(píng)分相關(guān)，可反映鼻息肉病變嚴(yán)重程度；血清25(OH)D、Tregs、與鼻內(nèi)鏡評(píng)分、CT評(píng)分呈負(fù)相關(guān)。但本研究所選取的樣本量較少，且為對(duì)照試驗(yàn)，并未對(duì)研究因素施加人為干預(yù)，對(duì)于結(jié)果的論證強(qiáng)度較薄弱。

綜上所述，慢性鼻竇炎伴有鼻息肉患者的血清25(OH)D、Tregs、TGF-β、IL-35、IL-10 水平明顯升高，而IL-1β、TNF-α顯著降低，其含量變化與患者是否合并鼻息肉相關(guān)，可為診斷慢性鼻竇炎伴有鼻息肉提供指導(dǎo)。