徐娜 劉志敏 欒竹青

摘要：建立肌肉組織中氯霉素、氟苯尼考、甲砜霉素、甲硝唑、地美硝唑、洛硝噠唑藥物殘留的液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用的檢測(cè)方法。樣品經(jīng)乙酸乙酯提取后，水和乙腈為流動(dòng)相梯度洗脫，質(zhì)譜正負(fù)源切換進(jìn)行定性定量分析，氯霉素、氟苯尼考、甲砜霉素的定量限為0.1ug/kg，甲硝唑、地美硝唑和洛硝噠唑的定量限為1.0ug/kg。

關(guān)鍵詞：組織；氯霉素；甲硝唑；液相色譜質(zhì)譜

1. 引言

隨著生活水平的提高，人們?cè)絹?lái)越重視食品安全，希望吃的食物能夠健康放心。人們開(kāi)始關(guān)注藥物殘留的問(wèn)題，特別是人畜共患藥的殘留對(duì)人體的傷害很大，GB31650-2019標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定氯霉素、甲硝唑、地美硝唑、洛硝噠唑在動(dòng)物性食品中不得檢出，氟苯尼考、甲砜霉素在動(dòng)物性食品中規(guī)定了最大高殘留限量。這次我們主要研究了肌肉組織樣品通過(guò)乙酸乙酯提取，能夠同時(shí)檢測(cè)氯霉素、氟苯尼考、甲砜霉素、甲硝唑、地美硝唑、洛硝噠唑藥物的殘留。

2. 實(shí)驗(yàn)部分

2.1 試劑與儀器

乙酸乙酯；德國(guó)默克，色譜純；甲醇；德國(guó)默克，色譜純；標(biāo)準(zhǔn)品 DR公司，純度99%

液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀 AB5500，配有電噴霧離子源；分析天平；美國(guó)奧豪斯；冷凍離心機(jī)；美國(guó)貝克曼；

2.2 標(biāo)準(zhǔn)品溶液的配置

分別稱取1 0 m g（精確至0.001mg）的標(biāo)準(zhǔn)品于100ml容量瓶中，用甲醇溶解并定容，配成100mg/l的標(biāo)準(zhǔn)溶液。

2.3樣品的處理

稱取均勻的樣品5.00g于50ml離心管中，加入50ul 40ug/l氯霉素D5內(nèi)標(biāo)溶液、50ul 100ug/l的替硝唑溶液、20ml乙酸乙酯渦旋混勻，5000r/min離心，取上清液于100ml雞心瓶瓶中，殘?jiān)偌尤?0ml乙酸乙酯渦旋混勻，離心，合并上清液于40℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮，最后用氮?dú)獯蹈?，?ml的1+9乙腈水溶液溶解，加1ml正己烷渦旋靜置，取1ml下層液于1.5mlEP管中，于10000r/min離心機(jī)離心5min，取下層液過(guò)0.22um濾膜上機(jī)檢測(cè)。

2.4 色譜質(zhì)譜條件

液相條件：C18色譜柱，流速0.3ml/min，流動(dòng)相水和乙腈梯度洗脫。

質(zhì)譜條件：電噴霧離子源，正、負(fù)離子掃描，多反應(yīng)監(jiān)測(cè)，噴霧電壓、氣簾氣、霧化氣、碰撞能量調(diào)節(jié)使質(zhì)譜靈敏度達(dá)到最佳。

3. 結(jié)果

3.1 色譜質(zhì)譜條件的優(yōu)化

流動(dòng)相優(yōu)化如下：

色譜柱：C18，100mm*2.1mm*5um或相當(dāng)，柱溫30℃。流動(dòng)相：水，乙腈，流速0.3ml/min。

3.2 質(zhì)譜條件

A. 離子源：電噴霧離子源ESI

B.掃描模式：正、負(fù)離子掃描

C.檢測(cè)方式：多反應(yīng)檢測(cè)（MRM）

D.噴霧電壓：正5500V，負(fù) 4500V

C.氣簾氣35，霧化氣50

D.定量定性離子和碰撞能量條件如下表。

3.3 回收率實(shí)驗(yàn)

取一陰性樣品中分別添加定量限的1倍、2倍、3倍，3個(gè)濃度6個(gè)平行樣品的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，其回收率結(jié)果均大于80%，平行樣品間的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差均在10%以內(nèi)，滿足檢測(cè)的要求。

4. 討論

4.1 樣品提取及凈化的選擇

樣品用乙腈、乙酸乙酯、甲醇溶劑提取，乙腈和甲醇的提取效果、回收率不如乙酸乙酯，但是乙酸乙酯提取的雜質(zhì)較多，提取后用正己烷除脂，也可以考慮C18固相萃取小柱凈化，C18小柱的凈化效果較好，最后綜合考慮，選用乙酸乙酯提取，正己烷凈化，這樣既省事又省費(fèi)用。

4.2 基質(zhì)效應(yīng)

由于基質(zhì)效應(yīng)，可以用陰性的基質(zhì)配制基質(zhì)標(biāo)曲來(lái)消除基質(zhì)效應(yīng)；也可以用內(nèi)標(biāo)溶液，但是內(nèi)標(biāo)較貴，可以將性質(zhì)相近的藥品選用一個(gè)內(nèi)標(biāo)，我們將氯霉素、氟苯尼考、甲砜霉素用氯霉素-D5做內(nèi)標(biāo)，甲硝唑、地美硝唑、洛硝噠唑用替硝唑做內(nèi)標(biāo)，這樣可以消除部分誤差。

4.3 流動(dòng)相的選擇

我們用甲醇-水、甲醇-0.1%的甲酸水、乙腈-水、乙腈-0.1%的甲酸水做流動(dòng)相，做了實(shí)驗(yàn)，綜合考慮峰形、靈敏度、基線噪音等因素，選擇乙腈-水作為流動(dòng)相。

5. 總結(jié)

利用正負(fù)源切換的方式同時(shí)檢測(cè)氯霉素、氟苯尼考、甲砜霉素、甲硝唑、地美硝唑、洛硝噠唑，其中氯霉素、氟苯尼考、甲砜霉素定量限為 0.1ug/kg，甲硝唑、地美硝唑、洛硝噠唑定量限為1.0ug/kg，對(duì)于檢測(cè)人員來(lái)說(shuō)，既節(jié)省了時(shí)間又方便了操作，同時(shí)也節(jié)省了費(fèi)用。

作者簡(jiǎn)介：

通訊作者：徐娜（1980-），女，漢，山東省煙臺(tái)市人，本科，工程師；研究方向：食品檢測(cè)

劉志敏（1982-），男，漢族，山東省菏澤市人，研究生，副高級(jí)工程師；研究方向：食品檢測(cè)

欒竹青（1989-），女，漢族，山東省煙臺(tái)市人，研究生，工程師；研究方向：食品檢測(cè)