曹蘭　謝和芳　劉佳霖　高麗嬌　楊金龍　王小平　王瑞生　羅文華

摘要 ? ?為更好地防治中蜂主要敵害大蠟螟（Galleria mellonella），本試驗(yàn)研究不同引誘劑對(duì)大蠟螟幼蟲(chóng)的引誘效果，以達(dá)到引誘大蠟螟幼蟲(chóng)、減少對(duì)蜂群危害為目的。根據(jù)大蠟螟幼蟲(chóng)在蜂箱內(nèi)的食物嗜性，以酯類(lèi)、能量、蛋白質(zhì)及其他等四類(lèi)食物設(shè)計(jì)9種引誘劑，篩選大蠟螟幼蟲(chóng)的最優(yōu)引誘劑。結(jié)果表明，以巢脾、花粉、蜂蜜和蠟渣為原料制作的引誘劑誘導(dǎo)大蠟螟幼蟲(chóng)的效果最好。此外，引誘劑中的水分含量也能顯著影響其對(duì)大蠟螟幼蟲(chóng)的誘導(dǎo)效果。引誘劑水分含量低于11.31%的引誘率均為0%，水分含量為15.57%～18.32%的引誘劑41 h后引誘率達(dá)（2.9±1.1）%～（62.9±13.0）%。

關(guān)鍵詞 ? ?大蠟螟幼蟲(chóng);引誘劑;食物誘導(dǎo);篩選;引誘效果

中圖分類(lèi)號(hào) ? ?S433 ? ? ? ?文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 ? ?A

文章編號(hào) ? 1007-5739（2020）19-0198-04

中華蜜蜂（簡(jiǎn)稱(chēng)“中蜂”）是我國(guó)特有的畜禽遺傳資源保護(hù)品種[1]，中蜂產(chǎn)業(yè)已成為我國(guó)山區(qū)脫貧攻堅(jiān)的特色效益畜牧產(chǎn)業(yè)。蜂群內(nèi)巢脾上儲(chǔ)存的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)如蜂蜜、花粉以及蜂蠟，易吸引蜜蜂敵害的青睞[2]，特別是規(guī)?；鋱?chǎng)。在西南地區(qū)，大蠟螟是本地中蜂的主要敵害，其幼蟲(chóng)在巢脾上取食，造成大量蜜蜂蛹死亡[3-4]。對(duì)于大蠟螟幼蟲(chóng)的防治，國(guó)外主要采用生物防治方法[5-9]，通過(guò)繭蜂、線(xiàn)蟲(chóng)和蘇云金芽孢桿菌等寄生性天敵防治大蠟螟，這些生物防制劑對(duì)大蠟螟有較強(qiáng)的毒性。國(guó)內(nèi)主要靠特殊管理技術(shù)防治大蠟螟幼蟲(chóng)[10]，如經(jīng)常更換新脾、對(duì)蜂箱蜂具消毒、打掃群內(nèi)衛(wèi)生等，或者用硫磺、醋酸和甲酸熏蒸。楊 ?柳等[11]將王臺(tái)繭衣、蜂蛹、酒精、蜜蓋蠟、王臺(tái)蠟等材料制蠟后，放在蜂箱底部作引誘劑，觀察蜂群的病害變化情況，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，該引誘劑最早30 d見(jiàn)效，一般需要60 d蜂群能被治愈。本研究主要針對(duì)大蠟螟幼蟲(chóng)在蜂箱內(nèi)的食物嗜性，利用均勻設(shè)計(jì)法設(shè)計(jì)引誘劑，在室內(nèi)對(duì)大蠟螟剛孵化幼蟲(chóng)進(jìn)行食物引誘試驗(yàn)，篩選對(duì)大蠟螟幼蟲(chóng)誘導(dǎo)效果好的引誘劑。

1 ? ?材料與方法

1.1 ? ?試驗(yàn)地點(diǎn)

試驗(yàn)于2017年8—10月在重慶市畜牧科學(xué)院蜜蜂保護(hù)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行，試驗(yàn)期間室內(nèi)平均溫度（28±2）℃，相對(duì)濕度為（80±5）%。人工氣候箱設(shè)置溫度為（32±2）℃，濕度為（65±5）%。

1.2 ? ?試驗(yàn)材料

1.2.1 ? ?試驗(yàn)蟲(chóng)源。大蠟螟成蟲(chóng)在面積為3 cm2的薄木塊上產(chǎn)卵形成的卵片，每塊木塊有卵100粒左右。卵片由重慶市畜牧科學(xué)院實(shí)驗(yàn)室提供。

1.2.2 ? ?試驗(yàn)器材。RXZ-500B型人工氣候箱、多功能粉碎機(jī)、電子天平和飼養(yǎng)杯等。

1.2.3 ? ?引誘劑原料。大蠟螟幼蟲(chóng)引誘劑組方由鮮巢脾和老巢脾2種酯類(lèi)原料，蜂蜜、葡萄糖和蔗糖等3種糖類(lèi)原料，花粉、大豆粉和奶粉等3種蛋白質(zhì)原料，以及蠟渣、塑料和糠麩等其他類(lèi)原料組成。鮮巢脾（使用1年內(nèi)巢脾）、老巢脾（使用的2年或2年以上的巢脾）、中蜂蜂蜜、蠟渣，均由重慶市畜牧科學(xué)院中蜂試驗(yàn)蜂場(chǎng)提供。葡萄糖、蔗糖、西蜂油菜花粉、膨化大豆粉及成人奶粉，市場(chǎng)購(gòu)買(mǎi)。原料中的老巢脾、花粉、糠麩、塑料[12]、王臺(tái)繭衣、蜂蛹和蜜蓋蠟等，由重慶市畜牧科學(xué)院中蜂試驗(yàn)蜂場(chǎng)提供;食品級(jí)酵母粉、面粉、玉米粉、酒精、飼料級(jí)麥麩、甘油，市場(chǎng)購(gòu)買(mǎi)。

1.3 ? ?引誘劑組方設(shè)計(jì)

試驗(yàn)共設(shè)置9種引誘劑處理，A～F為各引誘劑組方，分別為新鮮巢脾50 g、蜂蜜50 g、花粉100 g、蠟渣40 g（A），新鮮巢脾70 g、蔗糖50 g、大豆粉100 g、塑料0.02 g（B），新鮮巢脾90 g、葡萄糖50 g、奶粉50 g、糠麩40 g（C）、老巢脾30 g、葡萄糖80 g、花粉50 g、塑料0.01 g（D），老巢脾50 g、蔗糖80 g、奶粉100 g、糠麩20 g（E），老巢脾70 g、蜂蜜30 g、大豆粉50 g、蠟渣20 g（F），以奶粉25 g、酵母粉10 g、面粉50 g、麥麩50 g、玉米粉500 g、蜂蠟25 g、蜂蜜25 g及甘油30 g（CK1），王臺(tái)繭衣10 g、蜂蛹40 g、食用酒精200 g、王臺(tái)蠟10 g和蜜蓋蠟10 g（CK2），老巢脾30 g和花粉30 g（CK3）為對(duì)照。

1.4 ? ?制料方法

引誘劑A和引誘劑F的制料：將粉碎的巢脾、蠟渣、花粉混勻后，將溶化的蜂蜜倒入混合料中，邊倒邊攪勻，裝入密閉容器內(nèi)備用。

引誘劑B～E和CK3的制料：將各種粉碎的原料按一定方法配制[13-14]，并混勻裝入密閉容器內(nèi)備用。

CK1的制料：將奶粉、面粉、酵母粉、麥麩和玉米粉混勻，將蜂蠟放于蜂蜜中，加熱蜂蠟使之融化成液體，再迅速倒入事先混勻的干飼料中，快速攪拌，直至顆粒均勻細(xì)小，最后加入甘油并攪勻，裝入密閉容器內(nèi)備用[15]。

CK2的制料：取蜂王王臺(tái)繭衣l份、蜂蛹4份浸入20份食用酒精中，加溫到60 ℃，保溫5 h后，常溫下放置3～6 d，過(guò)濾40目，得到提取液裝瓶密封備用。用蜜蓋蠟和王臺(tái)蠟制取純蜂蠟。將純蜂蠟初步敲碎，放入冰柜中冷凍24 h，取出放入粉碎機(jī)中粉碎至40目，或不經(jīng)冷凍直接將純蜂蠟制成薄片。將提取液均勻地噴灑到粉碎蜂蠟中，裝入密閉容器內(nèi)備用[16]。

1.5 ? ?試驗(yàn)方法

引誘劑的篩選試驗(yàn)分初選和終選。初選時(shí)，每3種引誘劑為1組，置于一個(gè)自制昆蟲(chóng)飼養(yǎng)杯中，9種引誘劑分 3杯，選出有較多存活幼蟲(chóng)的引誘劑，重復(fù)3次。然后將初選得到的引誘劑重新組合進(jìn)行終選試驗(yàn)，重復(fù)3次，從中選出引誘大蠟螟幼蟲(chóng)數(shù)量最多的引誘劑為最佳引誘劑。

1.5.1 ? ?初選引誘劑試驗(yàn)。取3個(gè)大蠟螟幼蟲(chóng)飼養(yǎng)杯，每個(gè)杯內(nèi)底部靠邊隔開(kāi)放置3種不同的引誘劑，取出面積為3 cm2的木塊卵片，置于杯底中部，然后將大蠟螟幼蟲(chóng)飼養(yǎng)杯置于溫度為32 ℃、相對(duì)濕度為65%的恒溫培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)至卵完全孵化成幼蟲(chóng)。幼蟲(chóng)尋找食物時(shí)會(huì)向杯內(nèi)的引誘劑食物堆里取食并扎營(yíng)，最后用10倍放大鏡檢查每種引誘劑內(nèi)是否有大蠟螟幼蟲(chóng)，將引誘劑內(nèi)扎營(yíng)的大蠟螟幼蟲(chóng)判定為引誘成功的幼蟲(chóng)，而引誘劑內(nèi)沒(méi)有扎營(yíng)的大蠟螟幼蟲(chóng)則判定為引誘失敗，觀察3 d左右。試驗(yàn)重復(fù)3次。

1.5.2 ? ?終選引誘劑試驗(yàn)。將初選試驗(yàn)中每個(gè)自制昆蟲(chóng)飼養(yǎng)杯內(nèi)吸引幼蟲(chóng)數(shù)較多的引誘劑重組進(jìn)行終選試驗(yàn)。取1個(gè)自制昆蟲(chóng)飼養(yǎng)杯，將初選到的3種較優(yōu)秀的引誘劑隔開(kāi)靠邊置于杯底部，將欲孵化的卵片置于杯中央，按照初選大蠟螟幼蟲(chóng)的培養(yǎng)方法進(jìn)行培養(yǎng)，置于32 ℃、相對(duì)濕度為65%的恒溫培養(yǎng)箱中，從大蠟螟卵全部孵出幼蟲(chóng)靜置5 h后開(kāi)始觀察，每隔12 h計(jì)數(shù)1次，約至132 h，在10倍放大鏡下對(duì)每種引誘劑下面的幼蟲(chóng)數(shù)進(jìn)行計(jì)數(shù)，重復(fù)3次。以引誘劑內(nèi)扎營(yíng)的大蠟螟幼蟲(chóng)數(shù)量占飼養(yǎng)杯中大蠟螟總幼蟲(chóng)數(shù)的百分比大小來(lái)判斷引誘劑優(yōu)劣。

1.6 ? ?指標(biāo)測(cè)定

1.6.1 ? ?大蠟螟幼蟲(chóng)引誘率。首先，用放大鏡對(duì)準(zhǔn)透明的自制昆蟲(chóng)飼養(yǎng)杯杯底，計(jì)數(shù)每種引誘劑下的幼蟲(chóng)數(shù)，然后計(jì)算出每個(gè)飼養(yǎng)杯內(nèi)引誘的大蠟螟幼蟲(chóng)總數(shù)。大蠟螟幼蟲(chóng)引誘率為每種引誘劑內(nèi)吸引大蠟螟幼蟲(chóng)數(shù)占該飼養(yǎng)杯內(nèi)存活大蠟螟幼蟲(chóng)總數(shù)的百分率。

1.6.2 ? ?引誘劑的營(yíng)養(yǎng)成分。將配置的大蠟螟幼蟲(chóng)引誘劑送至重慶市畜牧科學(xué)院飼料檢測(cè)中心進(jìn)行水分、粗脂肪、粗蛋白和pH值測(cè)定。水分依據(jù)GB/T 6435—2014測(cè)定，粗脂肪依據(jù)GB/T 6433—2006測(cè)定，粗蛋白依據(jù) GB/T 6432—1994測(cè)定，以及pH參考PH-3C儀器說(shuō)明書(shū)測(cè)定。

1.7 ? ?數(shù)據(jù)處理

試驗(yàn)結(jié)果用3次重復(fù)試驗(yàn)的大蠟螟幼蟲(chóng)引誘率的平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)誤表示，采用單因素方差分析進(jìn)行差異顯著性檢驗(yàn)，取顯著性水平為0.05。利用SPSS 21統(tǒng)計(jì)軟件分析。

2 ? ?結(jié)果與分析

2.1 ? ?不同引誘劑對(duì)大蠟螟幼蟲(chóng)的引誘效果

對(duì)9種引誘劑對(duì)大蠟螟幼蟲(chóng)的吸引程度進(jìn)行了引誘評(píng)價(jià)，對(duì)引誘劑進(jìn)行初選。由表1可知，9種引誘劑對(duì)大蠟螟幼蟲(chóng)的引誘表現(xiàn)不同，其中引誘劑A、CK2和CK3均能成功引誘大蠟螟幼蟲(chóng)，其對(duì)大蠟螟幼蟲(chóng)引誘率分別為（100.00±0.00）%、（22.30±21.30）%和（77.70±21.30）%，其他處理引誘劑沒(méi)有引誘效果。

將初選試驗(yàn)中篩選到的較優(yōu)秀的引誘劑A、CK2和 CK3進(jìn)行終選試驗(yàn)。由表2可知，在卵片孵化成幼蟲(chóng)后5 h時(shí)，引誘劑A、CK2和CK3引誘劑均能吸引大蠟螟幼蟲(chóng)，引誘劑CK3吸引率最高，為（43.9±3.9）%;引誘劑A次之，為（32.7±6.2）%;引誘劑CK2最少，為（23.5±9.4）%。統(tǒng)計(jì)分析表明，引誘劑CK3顯著優(yōu)于CK2（P<0.05），與引誘劑A差異不顯著（P>0.05）;17 h時(shí)，引誘劑CK3對(duì)幼蟲(chóng)的引誘率最高，達(dá)（56.7±17.3）%，顯著優(yōu)于CK2的（7.0±2.0）%（P<0.05），但與引誘劑A的（36.3±18.8）%差異不顯著（P>0.05）;29 h時(shí)，引誘劑A的引誘率最高，達(dá)（54.1±23.3）%，顯著優(yōu)于CK2的（3.1±5.3）%（P<0.05），優(yōu)于CK3的（42.9±1.1）%，但差異不顯著（P>0.05）;41 h時(shí)，引誘劑A的引誘率為（62.9±13.0）%，顯著優(yōu)于CK3的29.1±8.3%和CK2的（2.9±1.1）%（P<0.05），CK3的引誘率顯著優(yōu)于CK2（P<0.05）。由此可知，引誘劑A為本試驗(yàn)篩選的最佳引誘劑。

2.2 ? ?不同引誘劑部分常規(guī)營(yíng)養(yǎng)指標(biāo)

引誘劑常規(guī)營(yíng)養(yǎng)指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表3，大蠟螟幼蟲(chóng)喜歡的引誘劑A、CK2和CK3的水分含量為15.57%～18.32%，水分含量均較大蠟螟幼蟲(chóng)不喜歡的引誘劑 B、C、D、E、F及CK1多。引誘劑B、C、D、E、F的水分含量分別為5.53%、5.56%、9.08%、3.65%、10.95%。由此推測(cè)，引誘劑的水分對(duì)大蠟螟幼蟲(chóng)的引誘效果有影響。

3 ? ?結(jié)論與討論

3.1 ? ?水分是構(gòu)成大蠟螟引誘劑的關(guān)鍵成分

本試驗(yàn)中，能誘導(dǎo)大蠟螟幼蟲(chóng)的引誘劑的水分含量為15.57%～18.32%，水分含量均較沒(méi)有效果的引誘劑多。由此推測(cè)，引誘劑的水分含量對(duì)大蠟螟幼蟲(chóng)引誘效果有影響。引誘劑水分含量高低與大蠟螟幼蟲(chóng)的存活有很大關(guān)系，水分含量太低可能不適合幼蟲(chóng)生存生長(zhǎng)。此外，引誘劑成分對(duì)大蠟螟幼蟲(chóng)的引誘率也有影響，帶有大量花粉、巢脾、蜂蜜和蠟渣的食料更能吸引大蠟螟幼蟲(chóng)。

3.2 ? ?大蠟螟對(duì)蛋白飼料有偏嗜性

本試驗(yàn)中，大蠟螟小幼蟲(chóng)能存活的誘導(dǎo)劑，其蛋白含量分別為15.13%、1.52%和14.90%;在大蠟螟幼蟲(chóng)出殼41 h后，大蠟螟幼蟲(chóng)最終選擇帶有新鮮巢脾、蜂蜜、花粉和蠟渣的誘導(dǎo)劑。41 h后帶有巢脾、花粉、蜂蜜和蠟渣的引誘劑較僅由老巢脾和花粉制成的引誘劑更能引誘大蠟螟幼蟲(chóng)，其吸引率為（62.9±13.0）%。孵化2 d后大蠟螟幼蟲(chóng)喜歡蛋白含量較高的誘導(dǎo)劑。推測(cè)大蠟螟幼蟲(chóng)在生長(zhǎng)過(guò)程中對(duì)蛋白質(zhì)引誘劑具有偏嗜性。

3.3 ? ?大蠟螟卵幼蟲(chóng)存活率可能與引誘劑的水分含量有關(guān)

在初選引誘試驗(yàn)過(guò)程中，水分含量高的引誘劑能成功吸引大蠟螟幼蟲(chóng)讓幼蟲(chóng)扎營(yíng)，而6種水分含量低于15%的引誘劑不能成功引誘大蠟螟幼蟲(chóng)，也不能讓大蠟螟卵成功孵化。由此推測(cè)，大蠟螟幼蟲(chóng)，特別是剛孵化出的小幼蟲(chóng)，需要在一定水分含量的引誘劑中才能存活。低水分引誘劑不易讓大蠟螟幼蟲(chóng)存活，這表明大蠟螟幼蟲(chóng)的存活對(duì)食物水分較依賴(lài)。使大蠟螟幼蟲(chóng)存活的食物水分含量界限還需進(jìn)一步試驗(yàn)研究。

蜜蜂卵孵化的最適相對(duì)濕度范圍為90%～95%，低于50%時(shí)不孵化[17，3]。因此，仔脾空間上的濕度較其他巢脾高，這可能與大蠟螟幼蟲(chóng)喜歡上仔脾有一定關(guān)系。防治蜂群大蠟螟幼蟲(chóng)可以從箱底濕度和食物水分方面進(jìn)行考慮，但調(diào)控濕度和食物水分來(lái)防治大蠟螟幼蟲(chóng)還需進(jìn)一步思考和試驗(yàn)。

3.4 ? ?引誘劑脂肪含量和pH值對(duì)大蠟螟幼蟲(chóng)喜好的影響

大蠟螟幼蟲(chóng)喜歡的引誘劑中粗脂肪含量為27%～39%。在引誘劑中粗脂肪含量為12%～44%范圍內(nèi)，其食物的粗脂肪與大蠟螟幼蟲(chóng)的喜好的關(guān)系有待進(jìn)一步研究。大蠟螟幼蟲(chóng)成活可能與引誘劑水溶液pH值有關(guān)，劉位芬等[18]、楊 ?爽等[19]報(bào)道，大蠟螟幼蟲(chóng)喜歡中蜂巢脾，不喜歡西蜂巢脾。周 ?萍等[20]檢測(cè)中、西蜂巢脾理化指標(biāo)發(fā)現(xiàn)，二者酸值差異較大，中蜂蜂蠟的酸值較低，只有4.60～7.23;西蜂蜂蠟的酸值較高，達(dá)17.30～20.60。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，能成功引誘大蠟螟幼蟲(chóng)的引誘劑 pH值為3.39～4.78，這時(shí)孵化出的幼蟲(chóng)易存活;不能成功引誘大蠟螟幼蟲(chóng)的引誘劑pH值在4.78以上，這時(shí)孵化出的幼蟲(chóng)不易存活。由于蜂蠟酸值與引誘劑水溶液pH值尚無(wú)明確的直接關(guān)系，大蠟螟幼蟲(chóng)存活是否與pH值有關(guān)，這與文獻(xiàn)報(bào)道的大蠟螟幼蟲(chóng)喜歡酸值更低的中蜂巢脾而不喜歡酸值更高的西蜂巢脾結(jié)果是否有關(guān)則有待進(jìn)一步研究。

4 ? ?參考文獻(xiàn)

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基金項(xiàng)目 ? 重慶市技術(shù)創(chuàng)新與應(yīng)用示范（cstc2018jscx-msyb0

279，cstc2019jscx-lyjsAX0006）;國(guó)家現(xiàn)代農(nóng)業(yè)（蜜蜂）產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系建設(shè)專(zhuān)項(xiàng)（CARS-44-SYZ14）。

通信作者

收稿日期 ? 2020-05-19