□ 趙 芳 晉中市綜合檢驗(yàn)檢測中心

脫氧雪腐鐮刀菌烯醇（DON）是小麥、玉米等谷物糧食中較為常見的真菌毒素之一，其污染范圍也較廣。人類與動物過量攝入DON 會引起嘔吐、腹瀉等急性中毒反應(yīng)，故DON 也稱為嘔吐毒素；長期食用DON 污染的食品也會誘發(fā)食管癌、貧血、免疫能力下降等疾病，故科學(xué)準(zhǔn)確地檢測被其污染的糧食及其制品對保護(hù)人畜健康至關(guān)重 要[1]。GB 5009.111—2016[2]中 規(guī)定 了ID—LC/MS/MS、IAC—HPLC、TLC及ELISA 4 種檢測方法，前者對于基層實(shí)驗(yàn)室而言，設(shè)備使用維護(hù)成本較高，后兩者則僅適用于定性和半定量檢測。因此，根據(jù)檢測需求和設(shè)備條件建立和驗(yàn)證IAC—UPLC 法測定小麥粉中DON 的方法非常必要。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

小麥粉為市售。脫氧雪腐鐮刀菌烯醇標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（壇墨質(zhì)檢，編號72663，批號0871904）。乙腈、甲醇為色譜純；聚乙二醇（分析純）；磷酸鹽緩沖溶液（PBS）：稱取8.0 g 氯化鈉、1.2 g磷酸氫二鈉、0.2 g 磷酸二氫鉀、0.2 g氯化鉀溶解于900 mL 水中，用鹽酸調(diào)節(jié)pH 至7.0，用水稀釋至1 L；實(shí)驗(yàn)用水為一級水。

1.2 儀器與設(shè)備

Waters UPLC 超高效液相色譜儀（配PDA 檢測器）；電子天平（精度0.000 01 g）；超聲波清洗機(jī)；離心機(jī)；氮吹儀；固相萃取儀；脫氧雪腐鐮刀菌烯醇免疫親和柱等。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 試樣前處理

①準(zhǔn)確稱取25 g 粉碎、過篩的試樣于具塞三角瓶中，加入5 g 聚乙二醇，加入100 mL 純水，搖勻，超聲20 min，經(jīng)玻璃纖維濾紙過濾后10 000 r/min下離心5 min，濾液待凈化。②將冷藏的DON 免疫親和柱恢復(fù)至室溫，待其中原有液體流盡后，準(zhǔn)確吸取2.0 mL試樣濾液至免疫親和柱中，控制樣液以1 滴/秒的流速過柱，然后依次用5 mL PBS 和5 mL 純水以1 滴/秒的流速淋洗小柱，棄去淋洗液并抽干小柱。③準(zhǔn)確吸取2.0 mL甲醇至上述小柱中，控制1 滴/秒的流速洗脫親和柱，收集洗脫液，于50 ℃下氮吹至近干，加入1.0 mL 甲 醇+ 水（20+80，V/V）渦旋溶解殘留物，過0.2 μm 濾膜后待測。

1.3.2 標(biāo)準(zhǔn)系列配制

稱取0.84 mg DON 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，用乙腈溶解并定容至10.0 mL，配制得84 μg/mL 的標(biāo)準(zhǔn)儲備液。再用甲醇+水（20+80，V/V）逐級稀釋配制成84、168、420、840、1 680 ng/mL 與4 200 ng/mL 的標(biāo)準(zhǔn)系列。

1.3.3 液相色譜條件

液 相 色 譜 柱：C18柱（1.7 μm，100 mm×2.1 mm），柱溫35 ℃；流動相：甲醇+ 水（20+80，V/V），等度洗脫，流速0.4 mL/min；檢測器：PDA 檢測器，波長218 nm；進(jìn)樣體積：10 μL；定性方法：保留時間；定量方法：峰面積外標(biāo)法。

2 結(jié)果與分析

2.1 線性關(guān)系及檢出限

將配制的DON 標(biāo)準(zhǔn)系列按照上述色譜條件測定，以標(biāo)曲系列點(diǎn)濃度（x）為橫坐標(biāo)，色譜峰面積（y）為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程為y=18x—642，相關(guān)系數(shù)為0.999 8，表明線性關(guān)系良好。以3 倍信噪比對應(yīng)的目標(biāo)物最低響應(yīng)濃度為儀器最低檢出限，根據(jù)試樣處理過程中稱樣量25 g，稀釋倍數(shù)50 倍，定容體積1 mL，計(jì)算得本方法檢出限為51 μg/kg，低于國標(biāo)方法中的檢出限。

2.2 加標(biāo)回收率與精密度

準(zhǔn)確稱取12 份不含DON 的陰性小麥粉試樣，分為兩組加入不同濃度水平的標(biāo)準(zhǔn)溶液，其中1 ～6 號試樣中加入107 μg/mL 的DON 標(biāo)準(zhǔn)溶液100 μL，7～12號試樣中加入107 μg/mL的DON 標(biāo)準(zhǔn)溶液370 μL，按照上述前處理過程操作、色譜條件測定，考察其加標(biāo)回收率與精密度，計(jì)算得該方法的加標(biāo)回收率為81.4%～100.9%，RSD為0.05%～0.07%，滿足GB/T 27404—2008 的要求。

2.3 實(shí)際樣品的測定

采用該方法測得某小麥粉中DON含量為613 μg/kg，為驗(yàn)證本方法的有效性，在期間精密度條件下由另一位檢驗(yàn)員再次測定，測得其中DON 含量為590 μg/kg，兩次測定絕對差值/算術(shù)平均值為3.8%，符合GB 5009.111—2016 的規(guī)定。

3 結(jié)論

本方法參照國標(biāo)方法建立的IAC—UPLC 法測定小麥粉中DON 的檢測方法，色譜分離效果較好，線性關(guān)系良好，檢出限低于國家標(biāo)準(zhǔn)方法，加標(biāo)回收率與精密度均符合相關(guān)規(guī)定，可以滿足小麥粉及其制品中脫氧雪腐鐮刀菌烯醇的檢測需求。