□ 溫善萍 蔣小英 趙玉芬 浙江醫(yī)藥股份有限公司昌海生物分公司

如今轉(zhuǎn)基因食品受到了多個國家的重視，轉(zhuǎn)基因食品包括對植物基因升級改造的農(nóng)作物，和對轉(zhuǎn)基因植物進一步加工得到的供消費者食用的食品。隨著人們對食品安全的關(guān)注，人們對轉(zhuǎn)基因食品抱有不同態(tài)度，在贊嘆科學(xué)技術(shù)發(fā)展的同時，也在擔(dān)憂轉(zhuǎn)基因食品的安全性，對轉(zhuǎn)基因食品存在一定偏見。

1 我國轉(zhuǎn)基因農(nóng)作物種植現(xiàn)狀

轉(zhuǎn)基因作物是通過基因工程改變農(nóng)作物的基因組，形成新的生物體。將轉(zhuǎn)基因生物體進一步加工即為轉(zhuǎn)基因食品。其中最常見如轉(zhuǎn)基因豆油、轉(zhuǎn)基因玉米等。目前我國轉(zhuǎn)基因食品種植面積約為280 萬公頃，在全世界排名第八，主要種植轉(zhuǎn)基因棉花、番茄、玉米等。

隨著轉(zhuǎn)基因農(nóng)作物進入市場，其安全性引起了社會公眾的關(guān)注。轉(zhuǎn)基因食品的安全爭議主要集中在：①種植農(nóng)作物是否會增加雜草和病蟲害問題，種植廢棄物是否會污染環(huán)境。②轉(zhuǎn)基因食品對人體健康的影響，是否存在副作用和毒害物質(zhì)，導(dǎo)致后代不育等?，F(xiàn)階段我國對轉(zhuǎn)基因生物的管理十分嚴格，為了保護公民的健康和合法利益，避免生態(tài)環(huán)境受到威脅，我國針對轉(zhuǎn)基因生物安全設(shè)定了多條管理辦法，嚴格要求各企業(yè)對轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品做出標(biāo)志，在市場監(jiān)管中嚴格管理。

2 轉(zhuǎn)基因食品檢測面臨的困難

檢測轉(zhuǎn)基因時面臨著諸多挑戰(zhàn)，首先是檢測復(fù)合轉(zhuǎn)基因品系，如今復(fù)合轉(zhuǎn)基因已經(jīng)出現(xiàn)由五個轉(zhuǎn)化體雜交得來的品系，以轉(zhuǎn)基因玉米為例，已經(jīng) 培 育 出Bt11 與MIR604、GA21、TC1507 以 及MIR162 雜 交 的 品 種，現(xiàn)階段檢測技術(shù)并不能對轉(zhuǎn)基因品系進行區(qū)分。檢測轉(zhuǎn)基因材料含量降低的食品時，尤其是深加工食品，由于DNA 經(jīng)過了嚴重降解，并不能保證完整檢出。此外部分正處于田間試驗階段或者研發(fā)階段的轉(zhuǎn)基因作物，在非法途徑下轉(zhuǎn)到市場或田地，對于其并不具備較完善的檢測方法進行檢測，容易發(fā)生漏檢的情況。

目前針對轉(zhuǎn)基因作物的檢測主要從定性檢測和定量檢測兩方面展開，其中PCR 檢測作為最常用的檢測技術(shù)，能夠提供較為準確的檢測結(jié)果。目前市場上轉(zhuǎn)基因植物主要是玉米和大豆，針對大豆、玉米及其深加工食品的檢測，主要使用PCR 檢測技術(shù)，通過擴增產(chǎn)物，完成測序分析，對其安全性進行判斷[1]。

3 轉(zhuǎn)基因食品檢測方法

3.1 常見檢測方法

3.1.1 光譜分析法

使用該檢測法，需要繪制光譜圖，在軟件幫助下模擬分子結(jié)構(gòu)，對比非轉(zhuǎn)基因食品，展開非期望效應(yīng)研究。將分析結(jié)果作為評價依據(jù)，得到最終檢測結(jié)果。目前該技術(shù)主要應(yīng)用于玉米和番茄的檢測，可實現(xiàn)無損快速檢測，檢測過程對環(huán)境無污染，已經(jīng)在多個食品分析中廣泛應(yīng)用[2]。

3.1.2 蛋白質(zhì)印跡檢測法

蛋白質(zhì)印跡檢測主要是利用電泳技術(shù)分離外源蛋白質(zhì)，然后實現(xiàn)分離檢測。檢測轉(zhuǎn)基因食品中的不可溶蛋白質(zhì)時，可使用該技術(shù)，測定蛋白質(zhì)含量，同時與蛋白質(zhì)標(biāo)準進行對比，判斷轉(zhuǎn)基因食品的安全性。

3.1.3 PCR 檢測法

PCR檢測法是通過擴增目標(biāo)序列，檢測擴增產(chǎn)物，可分為定性PCR 技術(shù)、PCR—ELISA 技術(shù)及復(fù)合定性PCR 等。定性PCR 是擴增特異DNA 片段，利用瓊脂糖凝膠分離產(chǎn)物，借助于凝膠成像系統(tǒng)觀察分離情況，該技術(shù)具有較高的靈敏度。

3.1.4 基因芯片檢測法

使用基因芯片技術(shù)檢測食品，將食品生物體作為樣本，測定其基因序列，將DNA 按照一定規(guī)律和順序排列，形成微矩陣。使用軟件對基因序列進行分析，了解基因特點和信息，對基因表達特征進行檢測，確認轉(zhuǎn)基因食品的安全性。

3.1.5 組學(xué)分析技術(shù)

結(jié)合蛋白組學(xué)、代謝組學(xué)以及轉(zhuǎn)錄組學(xué)技術(shù)，針對個體展開組學(xué)分析，對單個細胞內(nèi)蛋白質(zhì)的表達情況進行分析。組學(xué)分析法作為新型技術(shù)，可評價樣本非期望效應(yīng)，識別轉(zhuǎn)基因食品危害性。該技術(shù)具有適應(yīng)性強的優(yōu)勢，可在食品檢測中推廣應(yīng)用。

3.1.6 生物傳感器技術(shù)

將電子裝置和生物特性結(jié)合，充分發(fā)揮生物分子之間的互相作用，并將其轉(zhuǎn)換為顯示信號，如離子共振傳感器等，通過對折射率變化的檢測，對樣品轉(zhuǎn)基因成分進行檢測。

3.2 定性PCR 檢測方法

3.2.1 實驗材料

準備轉(zhuǎn)基因大豆，使用研缽磨成粉末，取粉末100 g，使用CTAB 法提取基因組。將提取后的DNA 溶液放置在—20 ℃環(huán)境中儲存?；罨瘍龃婢?，提取陽性質(zhì)粒分子，在—20 ℃環(huán)境中儲存。

3.2.2 設(shè)計PCR 檢測引物

一般情況下引物選擇18 ～27 bp長度，含量約為40%～60%，保持上下游引物接近。PCR 檢測過程中注意對DNA 模板量加強控制，若模板量過大，會造成PCR 擴增受抑制，過少會影響檢測準確性[3]。若樣品不足200 ng/μL，加樣量設(shè)定為0.25 μL。

3.2.3 電泳檢測

在PCR 儀器中經(jīng)過升溫和降溫過程循環(huán)后，會產(chǎn)生氣溶膠擴增產(chǎn)物。打開管蓋前將PCR 管放置在通風(fēng)櫥內(nèi)，通風(fēng)3 min后拿出產(chǎn)物進行電泳檢測。電泳檢測中要使用新移液器添加樣本，移液器要攜帶濾芯，避免對氣溶膠造成污染。由于擴增產(chǎn)物處于100～200 bp，為了提高擴增效果，使用瓊脂糖凝膠電泳檢測，并設(shè)置對照組，使用凝膠成像儀對電泳結(jié)果進行觀察。

3.2.4 實驗結(jié)果

通過對比空白對照組，可發(fā)現(xiàn)大豆基因組擴增后和預(yù)期產(chǎn)物相近，滿足質(zhì)量檢查結(jié)果。對轉(zhuǎn)基因大豆進行PCR 檢測，基因序列具有高度特異性，可滿足定性檢測需求，完成轉(zhuǎn)基因成分的定性檢測。

3.3 探針熒光PCR 檢測

使用探針熒光PCR 時，探針退火溫度相對高，會比PCR 引物先在模板上結(jié)合。進行PCR 時，當(dāng)PCR 循環(huán)數(shù)增加，熒光信號增強，通過檢測熒光信號完成對檢測模板的定量分析。這種方法具有較高的特異性和靈敏度，檢測時長短，可準確測量轉(zhuǎn)基因食品的質(zhì)量。樣本制作方法和前文一致，將DNA 溶液稀釋至200 ng/μL，在—20℃環(huán)境中保存。將轉(zhuǎn)基因大豆基因組稀釋后，對基因進行熒光擴增，每個梯度均需要設(shè)置兩組重復(fù)試驗，并繪制擴增曲線，建立大豆基因標(biāo)準曲線，測定轉(zhuǎn)基因品系含量，從而判斷轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品的質(zhì)量。

4 結(jié)論

綜上所述，隨著轉(zhuǎn)基因食品的發(fā)展，檢測技術(shù)也需要進一步升級優(yōu)化，利用先進的檢測技術(shù)能夠提高檢出效率，確保食品安全。