王賀 趙長(zhǎng)福

(北華大學(xué)附屬醫(yī)院，吉林 吉林 132001)

據(jù)推測(cè)，2030 年我國(guó)腦血管病事件發(fā)生率將比2010年升高約50%〔1〕。自發(fā)性腦出血(ICH)指非創(chuàng)傷性腦內(nèi)血管破裂，導(dǎo)致血液在腦實(shí)質(zhì)內(nèi)聚集，其在腦卒中各亞型中的發(fā)病率僅次于缺血性腦卒中位居第二。腦出血的發(fā)病率為(12～15)/10萬人年，在西方國(guó)家中，腦出血約占所有腦卒中的15%，占所有住院腦卒中患者的10%～30%，我國(guó)腦出血的比例更高，占腦卒中的18.8%～47.6%〔2〕。同時(shí)國(guó)內(nèi)ICH發(fā)病以老年人群相對(duì)較多，中青年發(fā)病率呈升高趨勢(shì)，且疾病致死率高，僅次于心血管疾病〔3〕。若在ICH發(fā)病后，得不到有效快速診療，往往預(yù)后較差。miRNA通過與靶基因的3′UTR結(jié)合來調(diào)節(jié)基因表達(dá)。miRNAs不僅參與宿主正常的生物學(xué)過程，包括細(xì)胞周期的調(diào)控、細(xì)胞分化、細(xì)胞凋亡、血管生成和代謝，還參與了氧化應(yīng)激、炎癥反應(yīng)、細(xì)胞增殖、遷移及表型轉(zhuǎn)換和基因表達(dá)的調(diào)控〔4〕。miRNA-124在腦組織中特異性高表達(dá)，是大腦中最豐富的miRNA〔5〕。miRNA-124在缺血性腦卒中診療上存在特異性表達(dá)〔6〕。目前有關(guān)ICH患者血漿miRNA-124的表達(dá)水平鮮有報(bào)道。本研究分析ICH患者血漿miRNA-124的表達(dá)水平。

1 資料與方法

1.1研究對(duì)象 選取2017年10月至2019年10月北華大學(xué)附屬醫(yī)院神經(jīng)外科收治的60例ICH患者為研究組。其中男35例，女25例；年齡56～76〔平均(61.27±12.35)〕歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：所有患者符合中國(guó)腦出血診治指南(2014)診斷標(biāo)準(zhǔn)，患者發(fā)病時(shí)間<6 h，經(jīng)頭顱CT或磁共振成像(MRI)等影像學(xué)檢查證實(shí)，均為首次發(fā)病。排除標(biāo)準(zhǔn)：由于創(chuàng)傷性顱腦損傷、顱內(nèi)腫瘤、血管畸形、淀粉樣變性、抗凝藥物等引起的繼發(fā)性腦出血者，6 h內(nèi)繼發(fā)腦疝需急診手術(shù)者，合并心、肺、肝、腎、血液系統(tǒng)和內(nèi)分泌系統(tǒng)等嚴(yán)重原發(fā)性疾病者，近期(6個(gè)月內(nèi))有缺血性腦卒中、重大外傷、腦出血和手術(shù)史者。另選60例本院體檢證實(shí)的健康成年人為對(duì)照組，其中男35例，女25例；年齡52～74〔平均(60.13±11.56)〕歲。兩組一般資料差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。本項(xiàng)目經(jīng)本院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2顱內(nèi)血腫量估算 根據(jù)發(fā)病后的頭部CT或MRI計(jì)算血腫量，應(yīng)用多田式公式計(jì)算顱內(nèi)血腫量的估測(cè)，根據(jù)血腫量將患者分為小血腫組(<10 ml)、中血腫組(10～30 ml)、大血腫組(>30 ml)各20例。

1.3miRNA-124的檢測(cè) 所有患者在發(fā)病后6 h內(nèi)、健康者體檢時(shí)，分別采集靜脈血10 ml，在2 h內(nèi)作如下處理：4℃條件下3 000 r/min離心10 min，取上清液，在4℃ 3 000 r/min，進(jìn)一步離心10 min，將所得的血清標(biāo)本分裝于無RNA酶和DNA酶的凍存管中，-80℃保存，待集中檢測(cè)。采用 TRIzol法提取血漿總RNA。采用Takara公司的Mir-X miRNA First-Strand Synthesis Kit合成試劑盒進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄。采用Takara公司的qRT-PCR試劑盒檢測(cè)說明書檢測(cè)miRNA-124。采用2-ΔΔCT法計(jì)算miRNA-124的相對(duì)表達(dá)量。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS22.0軟件進(jìn)行t檢驗(yàn)、單因素方差分析、LSD比較法。

2 結(jié) 果

2.1兩組血清中miRNA-124比較 對(duì)照組miRNA-124水平(4.76±0.59)明顯低于研究組(9.29±3.15，t=11.27，P=0.00)。

2.2不同血腫量血清miRNA-124比較 隨著血腫量增多ICH患者血清中miRNA-124升高(F=117.16，P<0.05)。ICH患者中miRNA-124隨著出血量的增多表達(dá)增高，呈正相關(guān)。見表1。

表1 ICH患者不同血腫量血清中miRNA-124比較

3 討 論

ICH發(fā)病兇險(xiǎn)，發(fā)病30 d的病死率高達(dá)35%～52%，僅約20%的患者在6個(gè)月后能夠恢復(fù)生活自理能力〔2〕。因此，尋求一種快速、有效的診療手段是目前研究的關(guān)鍵。隨著社會(huì)的不斷發(fā)展、科學(xué)技術(shù)的不斷更新，近年來基因芯片技術(shù)迅速發(fā)展，因循環(huán)miRNAs是高度穩(wěn)定的，且在樣本(血漿或血清)中有很長(zhǎng)的半衰期，利用定量實(shí)時(shí)聚合酶鏈反應(yīng)(qRT-PCR)技術(shù)，在當(dāng)前具有較高靈敏度和特異性的臨床實(shí)驗(yàn)室中，循環(huán)miRNAs可被快速、有效的定量。逐漸成為疾病早期診斷的新型生物標(biāo)志物〔7，8〕。而miR-124作為一種腦組織特異性miRNA，其表達(dá)水平的改變與多種神經(jīng)系統(tǒng)疾病的發(fā)生密切相關(guān)，如缺血性腦卒中、腦腫瘤、創(chuàng)傷性顱腦損傷、阿爾茨海默病等〔9〕。

miRNA-124在ICH患者血漿的表達(dá)水平臨床研究較少，Zifeng等〔10〕研究表明，miR-124在大鼠腦出血過程中的表達(dá)水平與大鼠血漿和腦組織中的表達(dá)水平有顯著同步性升高結(jié)果相符合。楊劍宏〔11〕研究，miRNA-124在腦出血患者中呈高表達(dá)，與本研究結(jié)論相符合。有研究表明，miR-124 可通過抑制下游靶基因 RhoGDIA，抑制血管平滑肌和內(nèi)皮細(xì)胞增殖、遷移能力，使血管壁修復(fù)能力受損，易導(dǎo)致腦出血發(fā)生〔12〕，同本研究結(jié)果結(jié)合，隨著miRNA-124表達(dá)的升高是否存在ICH患者再次出血的可能，有待進(jìn)一步分析及研究。還有研究闡述，miR-124作為一個(gè)重要、多效能的miRNA，廣泛表達(dá)于外周和中樞神經(jīng)系統(tǒng)，不僅可促進(jìn)神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)育成熟，而且參與神經(jīng)損傷后的修復(fù)〔13〕。

綜上，ICH后miRNA-124標(biāo)志物的檢測(cè)可用于ICH的輔助診斷，也可用來評(píng)估ICH出血嚴(yán)重程度。但本研究也具有一定的臨床局限性，如miRNA-124在血液中表達(dá)的個(gè)體差異、入組病例數(shù)較少等，仍需多中心、大樣本加以驗(yàn)證。