孫新強(qiáng)，陳克杰，楊一恭，劉 燕，周旭燕，邵 東，徐作武，王小平

1(浙江昌海制藥有限公司，浙江 紹興，310032) 2(浙江醫(yī)藥股份有限公司新昌制藥廠，浙江 紹興，312500)

蝦青素 (astaxanthin)，3,3′-二羥基-β, β′-胡蘿卜素-4,4′-二酮，屬于酮式類胡蘿卜素，因其分子結(jié)構(gòu)中紫羅酮環(huán)的3和3′位置各含一個(gè)手性 (或不對(duì)稱) 中心，故可形成3種對(duì)映異構(gòu)體，即3S-3′S、3R-3′S和3R-3′R(也稱為左旋、內(nèi)消旋和右旋)[1]?；瘜W(xué)合成蝦青素為上述3種異構(gòu)體的混合物。

法夫酵母 (Phaffiarhodozyma) 作為蝦青素的重要來源，其抽提物被證明具有安全性[2]，美國食品藥品監(jiān)督管理局于2010年增補(bǔ)其用作動(dòng)物飼料添加劑，亦于2013年進(jìn)入中國農(nóng)業(yè)部《飼料添加劑品種目錄》。基于蝦青素卓越的提高免疫、抵抗衰老和增加活力的功能，在美容、醫(yī)藥和養(yǎng)殖等領(lǐng)域呈現(xiàn)日益旺盛的市場(chǎng)需求和廣闊前景。受制于法夫酵母發(fā)酵生產(chǎn)蝦青素存在培養(yǎng)溫度低、產(chǎn)量低、碳源消耗大和耗氧水平高等問題，商業(yè)化進(jìn)程受到嚴(yán)重阻礙，因此，學(xué)術(shù)界和產(chǎn)業(yè)界圍繞基因組特性[3]、菌株篩選[4-5]、代謝改造[6-7]、培養(yǎng)基優(yōu)化[8-9]、促進(jìn)因子篩選[10-12]、環(huán)境脅迫[13-16]和發(fā)酵過程控制[12, 17-18]等方面進(jìn)行了全面研究。在法夫酵母發(fā)酵工藝方面，針對(duì)碳源的研究已相當(dāng)廣泛。AN等[19]用含尿素和NaH2PO4的糖蜜作原料，在100 L中試規(guī)模發(fā)酵罐上最大生物量為36 g/L，類胡蘿卜素產(chǎn)量為40 mg/L；NGHIEM等[20]研究了5株法夫酵母對(duì)含葡萄糖、木糖和阿拉伯糖的玉米纖維水解糖的利用，發(fā)現(xiàn)利用阿拉伯糖時(shí)蝦青素產(chǎn)量最高，而高濃度的葡萄糖會(huì)抑制其他2種糖的利用；PAN等[21]在固定氮源濃度的條件下應(yīng)用蛋白質(zhì)組學(xué)方法研究了C/N對(duì)法夫酵母細(xì)胞生長(zhǎng)和蝦青素積累的影響，得出蝦青素的產(chǎn)量與C/N呈負(fù)相關(guān)，隨C/N的增大而降低，比較蛋白組學(xué)研究則表明上述不同C/N條件下，涉及碳水化合物代謝和胡蘿卜素生成代謝的途徑發(fā)生較大變化；MIAO等[22]也報(bào)道了高糖濃度通過胡蘿卜素合成基因全局性調(diào)節(jié)因子creA，誘導(dǎo)胡蘿卜素合成基因crtE、pbs和ast的表達(dá)受到抑制。

基于上述法夫酵母發(fā)酵生產(chǎn)蝦青素過程中碳源占比高，碳源種類和濃度對(duì)菌體生理特性和蝦青素產(chǎn)量影響大的認(rèn)識(shí)，本研究對(duì)實(shí)驗(yàn)室保藏的1株具有商業(yè)化生產(chǎn)前景的法夫酵母進(jìn)行碳源種類、組合對(duì)蝦青素產(chǎn)量和蝦青素占類胡蘿卜素比例的影響進(jìn)行考察，確定了碳源控制工藝，并在10 m3發(fā)酵罐上進(jìn)行中試放大，為本菌株商業(yè)化生產(chǎn)提供技術(shù)支撐。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

1.1.1 菌株

PhaffiarhodozymaXC3015由上海來益生物藥物研究開發(fā)中心有限責(zé)任公司贈(zèng)送，保藏于浙江醫(yī)藥股份有限公司新昌制藥廠生物藥物實(shí)驗(yàn)中心。

1.1.2 試劑

蛋白胨、麥芽抽提物，英國OXOID公司；葡萄糖，西王藥業(yè)股份有限公司；麥芽糊精，山東西王糖業(yè)有限公司；糖蜜，濟(jì)南昌英達(dá)化工有限公司；乳酸，安徽豐原生物化學(xué)股份有限公司；(NH4)2SO4、KH2PO4、MgSO4·7H2O，江蘇紫東食品有限公司；酵母抽提物FM902，安琪酵母股份有限公司；麥芽糖漿，諸城市潤(rùn)生淀粉有限公司；玉米淀粉，諸城興貿(mào)玉米開發(fā)有限公司；泡敵，江山宇軒科技有限公司；蝦青素標(biāo)樣，Sigma-Aldrich (中國) 公司；α-淀粉酶，北京奧博星生物技術(shù)有限責(zé)任公司；其他試劑均為國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。

1.2 培養(yǎng)基

固體培養(yǎng)基：YM培養(yǎng)基，成分參考文獻(xiàn)[23]，加入20 g/L瓊脂。

種子培養(yǎng)基：YM培養(yǎng)基。

發(fā)酵培養(yǎng)基 (g/L)：碳源 20.0、(NH4)2SO43.0、KH2PO41.0、MgSO4·7H2O 0.5、CaCl2·2H2O 0.1、酵母抽提物 1.0、乳酸 5.0、泡敵 0.1。碳源指葡萄糖、麥芽糊精、可溶性淀粉、甘油、蔗糖、麥芽糖漿、乳糖、糖蜜和玉米淀粉水解液中的一種或其組合。

發(fā)酵罐補(bǔ)糖培養(yǎng)基 (g/L)：70 L發(fā)酵罐為葡萄糖或/和麥芽糊精 400 (補(bǔ)糖培養(yǎng)基葡萄糖與麥芽糊精比例同基礎(chǔ)料葡萄糖與麥芽糊精比例，具體根據(jù)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì))；10 m3發(fā)酵罐為葡萄糖 175、麥芽糊精 175、糖蜜 50。

種子、發(fā)酵培養(yǎng)基消前用2 mol/L NaOH溶液調(diào)pH值6.0。所有培養(yǎng)基碳源、氮源分消，滅菌條件為121 ℃，30 min。

1.3 儀器與設(shè)備

電子天平 (MS12001L/01型)，瑞士梅特勒-托利多公司；高效液相色譜儀 (1200型)，美國安捷倫科技有限公司；搖床 (Inno a 5000型)、離心機(jī) (MiniSpin型)，Eppendorf公司；紫外可見分光 (U -2600A型)，尤尼柯 (上海) 儀器有限公司；小試種子罐 (BIOTECH-30 JS型)，上海保興生物設(shè)備工程有限公司；小試發(fā)酵罐 (LiFlus SP-70L型)，Biotron公司；中試種子罐 (1 000 L型)、中試發(fā)酵罐 (10 m3型)，江蘇遠(yuǎn)方迪威爾設(shè)備科技有限公司。

1.4 試驗(yàn)方法

1.4.1 培養(yǎng)方法

平板培養(yǎng)：取冷凍甘油保藏液進(jìn)行平板劃線，于20.5 ℃條件下培養(yǎng)5～7 d，長(zhǎng)出較大菌落。

種子瓶培養(yǎng)：用接種環(huán)蘸取3～5個(gè)顏色較紅、菌落較大的單菌落，接種于種子培養(yǎng)基 (10 mL/50 mL試管)，于20.5℃、200 r/min條件下振蕩培養(yǎng)48 h。取2.5 mL上述試管培養(yǎng)液二次接種于種子培養(yǎng)基 (22.5 mL/250 mL三角瓶)，于20.5℃、200 r/min條件下振蕩培養(yǎng)36 h，獲得成熟種子瓶培養(yǎng)液。

發(fā)酵瓶培養(yǎng)：取二級(jí)成熟種子瓶培養(yǎng)液，按10%(體積分?jǐn)?shù))的比例接種于發(fā)酵培養(yǎng)基 (45 mL/500 mL三角瓶)，于20.5℃、200 r/min條件下振蕩培養(yǎng)120 h。

30 L種子罐培養(yǎng)：取二級(jí)成熟種子瓶培養(yǎng)液，按1.0%(體積分?jǐn)?shù))的比例接種于種子培養(yǎng)基 (20 L/30 L種子罐)，于溫度 (20.5±0.2) ℃、攪拌轉(zhuǎn)速350 r/min、通氣比1.5 m3/(m3·min)、罐壓0.06 MPa條件下培養(yǎng)40 h。

70 L發(fā)酵罐培養(yǎng)：將成熟種子罐培養(yǎng)液按10%(體積分?jǐn)?shù))的比例移種于發(fā)酵罐 (30 L/70 L發(fā)酵罐)，培養(yǎng)溫度(20.5±0.2)℃、通氣比0.6～1.5 m3/(m3·min)、罐壓0.06 MPa，全程用25%～28%氨水控制pH值為5.00±0.02，攪拌轉(zhuǎn)速與溶氧聯(lián)動(dòng)，關(guān)聯(lián)值為40%。發(fā)酵過程中，當(dāng)碳源質(zhì)量濃度低于10 g/L時(shí)補(bǔ)加40%的碳源，維持碳源質(zhì)量濃度為5～15 g/L之間。定期取樣測(cè)定菌體濃度、碳源濃度、類胡蘿卜素和蝦青素產(chǎn)量。

1 m3種子罐培養(yǎng)：1 m3種子罐0.5 m3計(jì)料，攪拌轉(zhuǎn)速200 r/min、通氣比1 m3/(m3·min)，其他條件同30 L種子罐培養(yǎng)。

10 m3發(fā)酵罐培養(yǎng)：10 m3發(fā)酵罐3.6 m3計(jì)料，起始攪拌轉(zhuǎn)速80 r/min，通氣比0.3～1.5 m3/(m3·min)，當(dāng)溶氧低于20%時(shí)每次提高攪拌轉(zhuǎn)速10～20 r/min，控制溶氧水平在20%～60%，其他條件同70 L發(fā)酵罐培養(yǎng)。

1.4.2 測(cè)定方法

類胡蘿卜素檢測(cè)：采用分光光度法，參考文獻(xiàn)[24]。

蝦青素高效液相色譜法測(cè)定：參考文獻(xiàn)[25]。

菌體濃度檢測(cè)：對(duì)發(fā)酵液進(jìn)行適當(dāng)稀釋，測(cè)定波長(zhǎng)600 nm處吸光度，根據(jù)光密度與細(xì)胞干重 (g/L) 的比值為(2.50±0.10)，確定細(xì)胞干重[23]。

總糖/還原糖檢測(cè)：按照菲林試劑法測(cè)定[26]。

1.4.3 淀粉水解液的制備

制備40%玉米淀粉漿，調(diào)pH值至6.20～6.40，加入0.2% CaCl2(按原料質(zhì)量計(jì)算)，然后將α-淀粉酶加入淀粉漿中(用酶量6～8 U/g)，200 r/min攪拌，加熱至85～90 ℃，液化30 min。

1.5 數(shù)據(jù)處理

試驗(yàn)均平行重復(fù)3次，試驗(yàn)數(shù)據(jù)均以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差形式表示，采用Origin Pro 8.5軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理、繪制試驗(yàn)結(jié)果圖。

2 實(shí)驗(yàn)與分析

2.1 大宗碳源種類對(duì)法夫酵母細(xì)胞生長(zhǎng)及蝦青素合成的影響

以工業(yè)發(fā)酵常用的葡萄糖、麥芽糊精、可溶性淀粉、甘油、蔗糖、麥芽糖漿、乳糖、糖蜜和玉米淀粉水解液作為碳源，在上述碳源質(zhì)量濃度均為20 g/L的條件下，考察大宗碳源對(duì)法夫酵母細(xì)胞生長(zhǎng)、蝦青素及類胡蘿卜素合成的影響，結(jié)果如圖1所示。

1-甘油;2-可溶性淀粉;3-麥芽糊精;4-蔗糖;5-葡糖糖;6-麥芽糖漿;7-乳糖;8-糖蜜;9-淀粉水解液圖1 不同碳源對(duì)法夫酵母生長(zhǎng)及蝦青素合成的影響Fig.1 Effects of different carbon sources on the growth of P.rhodozyma and the production of astaxanthin

由圖1可知，不同碳源對(duì)法夫酵母細(xì)胞生長(zhǎng)有顯著影響?？疾斓?種大宗碳源中，糖蜜、葡萄糖、麥芽糊精和麥芽糖漿更有利于法夫酵母細(xì)胞的生長(zhǎng)。比較法夫酵母類胡蘿卜素的合成能力，所考察碳源按麥芽糊精、麥芽糖漿、淀粉水解液、蔗糖、甘油、葡萄糖、可溶性淀粉、糖蜜和乳糖的順序依次降低。由于不同碳源條件下蝦青素占類胡蘿卜素比例不同，因此蝦青素產(chǎn)量不完全與類胡蘿卜素含量成正比。蝦青素產(chǎn)量最高的碳源分別為麥芽糊精、淀粉水解液、麥芽糖漿，分別為 (53.7±0.9)、(43.7±4.3)、(41.0±1.2) μg/mL，較葡萄糖作碳源時(shí)的 (24.4±0.7) μg/mL分別提高120.0%、79.1%、68.0%。雖然，乳糖作碳源時(shí)蝦青素產(chǎn)量較低，但蝦青素占類胡蘿卜素比例最高，達(dá)到58.9%，而麥芽糊精、可溶性淀粉和淀粉水解液次之，最低的為蔗糖，蝦青素占類胡蘿卜素比例僅為24.6%。

2.2 碳源組合對(duì)法夫酵母細(xì)胞生長(zhǎng)及蝦青素合成的影響

基于上述不同碳源影響法夫酵母細(xì)胞生長(zhǎng)、蝦青素合成和蝦青素占類胡蘿卜素比例的認(rèn)識(shí)，較優(yōu)蝦青素占類胡蘿卜素比例前提下的蝦青素產(chǎn)量提升是產(chǎn)品收率提高的重要保證，因此，進(jìn)一步考察了有利于細(xì)胞生長(zhǎng)的碳源組合 (葡萄糖和糖蜜)和蝦青素占類胡蘿卜素比例提高的2類碳源組合的影響。參考相關(guān)報(bào)道[27]和單因素試驗(yàn)，選取糖蜜質(zhì)量濃度為5 g/L，依次與有利于蝦青素占類胡蘿卜素比例提高的碳源 (均為15 g/L) 組合，對(duì)應(yīng)地，選取葡萄質(zhì)量糖濃度亦為5 g/L，依次與有利于蝦青素占類胡蘿卜素比例提高的碳源 (均為15 g/L) 組合，進(jìn)行發(fā)酵瓶實(shí)驗(yàn)，結(jié)果如圖2所示。

1-糖蜜+葡萄糖;2-糖蜜+乳糖;3-糖蜜+麥芽糊精;4-糖蜜+可溶性淀粉;5-葡萄糖+乳糖;6-葡萄糖+麥芽糊精;7-葡萄糖+可溶性淀粉圖2 不同碳源組合對(duì)法夫酵母生長(zhǎng)及蝦青素合成的影響Fig.2 Effects of different combinations of carbon sources on the growth of P.rhodozyma and the production of astaxanthin

糖蜜與葡萄糖、乳糖、麥芽糊精或可溶性淀粉組合時(shí)，菌體濃度均有不同程度的提高，且蝦青素產(chǎn)量分別為 (26.1±0.8)、(8.5±0.4)、(58.7±1.2)、(19.6±1.2) μg/mL，較后四者單獨(dú)作碳源時(shí)分別提高6.7%、62.4%、9.2%、20.7%，類胡蘿卜素產(chǎn)量則分別為 (83.3±2.2)、(17.6±1.0)、(134.3±3.0)、(48.7±1.5) μg/mL，分別提高15.4%、98.2%、22.8%、37.7%。雖然，糖蜜可以促進(jìn)菌體生長(zhǎng)及蝦青素、類胡蘿卜素的合成，但蝦青素占類胡蘿卜素的比例較葡萄糖、乳糖、麥芽糊精或可溶性淀粉單獨(dú)作碳源時(shí)降低，與糖蜜組合時(shí)該比例分別為31.3%、48.2%、43.7%、40.2%。葡萄糖與乳糖、麥芽糊精或可溶性淀粉組合時(shí)，蝦青素產(chǎn)量分別為 (15.0±0.3)、(55.1±0.8)、(23.9±0.9) μg/mL，較后三者單獨(dú)作碳源時(shí)分別提高186.0%、2.5%、47.0%，類胡蘿卜素產(chǎn)量則分別為 (32.9±1.0)、(130.5±1.4)、(59.2±1.4) μg/mL，分別提高269.6%、19.3%、67.3%。葡萄糖與乳糖、麥芽糊精或可溶性淀粉組合，生長(zhǎng)及生產(chǎn)特性表現(xiàn)出所組合糖的綜合特性，其蝦青素占類胡蘿卜素比例分別為45.6%、42.2%、40.3%。因此，所考察組合中麥芽糊精與糖蜜或葡萄糖的組合產(chǎn)量最高，且蝦青素占類胡蘿卜素比例達(dá)到40%以上。

2.3 70 L發(fā)酵罐碳源混合補(bǔ)加提高蝦青素產(chǎn)量

雖然，糖蜜或葡萄糖與麥芽糊精為較佳的碳源組合，但受制于三角瓶在環(huán)境參數(shù)控制 (如溶氧水平與pH值)、補(bǔ)料流加控制 (如碳源和氨水) 等方面存在不足，進(jìn)而引起發(fā)酵罐及三角瓶規(guī)模菌體生長(zhǎng)及產(chǎn)物合成特性具有較大的差異，因此有必要在發(fā)酵小試罐上考察混合碳源補(bǔ)加工藝。設(shè)置發(fā)酵基礎(chǔ)料中糖蜜質(zhì)量濃度均為5 g/L，葡萄糖或/和麥芽糊精總質(zhì)量濃度為15 g/L，考察不同比例葡萄糖和麥芽糊精在70 L發(fā)酵罐上的影響，結(jié)果如表1所示。

表1 70 L發(fā)酵罐上葡萄糖與麥芽糊精比例對(duì)法夫酵母生產(chǎn)蝦青素的影響Table 1 Effects of glucose to maltodextrin ratio on the production of astaxanthin by P.rhodozyma in 70 L fermenter

由表1可知，在所有的碳源中，葡萄糖比例越高，有利于菌體生長(zhǎng)。碳源的種類與比例影響蝦青素占類胡蘿卜素比例，其值與葡萄糖含量成負(fù)相關(guān)，且以麥芽糊精單獨(dú)作碳源時(shí)達(dá)到最高，為44.6%。當(dāng)在所考察組合中葡萄糖和麥芽糊精比例為1∶1時(shí)，蝦青素和類胡蘿卜素產(chǎn)量最高，分別為(341.0±7.2)、(850.0±20.3) μg/mL，葡萄糖或麥芽糊精比例過高時(shí)，均不利于蝦青素生產(chǎn)或細(xì)胞增殖。

2.4 10 m3發(fā)酵罐中試放大研究

在70 L小試發(fā)酵罐確定最適葡萄糖與麥芽糊精比例的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步開展中試10 m3發(fā)酵罐的工藝驗(yàn)證和放大研究。在生產(chǎn)實(shí)踐中，通常較大體積的發(fā)酵罐具有更高的溶氧供給水平，換言之，能夠保證較高的菌體濃度生長(zhǎng)需求，因此在補(bǔ)糖培養(yǎng)基中加入50 g/L糖蜜促進(jìn)生長(zhǎng)。10 m3發(fā)酵罐中試放大實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表2和圖3所示。

圖3 10 m3發(fā)酵罐中試放大實(shí)驗(yàn)結(jié)果Fig.3 Results of pilot scale-up in 10 m3 fermenter

表2 10 m3發(fā)酵罐中試放大實(shí)驗(yàn)結(jié)果Table 2 Results of pilot scale-up in 10 m3 fermenter

10 m3發(fā)酵罐工藝放大結(jié)果表明，法夫酵母發(fā)酵生產(chǎn)蝦青素的過程屬于部分生長(zhǎng)偶聯(lián)型，對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期為13～68 h，蝦青素合成期為44 h之后，經(jīng)過180 h的培養(yǎng)，細(xì)胞干重、蝦青素和類胡蘿卜素分別達(dá)到 (92.9±1.1) g/L、(360.3±0.8) μg/mL和 (853.2±20.2) μg/mL，與70 L小試發(fā)酵罐相比，分別提高11.2%、5.65%和0.35%，蝦青素占類胡蘿卜素比例以及干菌體蝦青素含量也分別達(dá)到42.2%和3.88 mg/(g細(xì)胞干重)。

3 討論

雖然，法夫酵母在工業(yè)化生產(chǎn)蝦青素方面顯示出巨大的商業(yè)吸引力，但其發(fā)酵過程中呈現(xiàn)的克勒勃屈利效應(yīng) (Crabtree effect)[28]和高糖對(duì)胡蘿卜素合成基因的抑制作用[22]提示碳源濃度尤其是葡萄糖濃度對(duì)蝦青素發(fā)酵的重要性。同時(shí)，不同碳源在分子構(gòu)成、碳鏈長(zhǎng)短、微量成分等方面不盡相同，造成以菌體生長(zhǎng)速率、蝦青素產(chǎn)量和比例等為主要參數(shù)的發(fā)酵技術(shù)指標(biāo)存在較大差異。朱明軍等[29]報(bào)道糖蜜有利于法夫酵母生長(zhǎng)，木糖有利于蝦青素積累，采用木糖和糖蜜的混合碳源蝦青素產(chǎn)量達(dá)到1.9 mg/L。朱曉立等[27]進(jìn)行了不同配比的糖蜜和淀粉糖混合碳源對(duì)法夫酵母生物量和蝦青素產(chǎn)量的影響，確定最佳比例為糖蜜占總糖的40%，此時(shí)生物量為8.61 g/L，蝦青素產(chǎn)量為7 338 μg/L。AN等[19]認(rèn)為甜菜糖蜜中Na和P是限制性營養(yǎng)物質(zhì)，以尿素和NaH2PO4強(qiáng)化糖蜜營養(yǎng)構(gòu)成，中試規(guī)模類胡蘿卜素產(chǎn)量為40 mg/L。上述關(guān)于碳源種類和濃度的相關(guān)研究存在如下缺陷：1) 所考察碳源單價(jià)過高，用于商業(yè)生產(chǎn)不具成本優(yōu)勢(shì)，如木糖單價(jià)是麥芽糊精和葡萄糖的7～8倍；2) 局限于從發(fā)酵層次的產(chǎn)量提高出發(fā)，未充分考慮蝦青素占類胡蘿卜素比例及其工藝控制；3) 菌株產(chǎn)量低，以停留在三角搖瓶水平為主，離商業(yè)化生產(chǎn)甚遠(yuǎn)。

本研究在保證蝦青素占類胡蘿卜素比例較優(yōu)的前提下進(jìn)行碳源組合以提升蝦青素產(chǎn)量，所考察的碳源市場(chǎng)價(jià)集中在3～6元/kg，且大量可得。通過搖瓶水平篩選，發(fā)現(xiàn)含低分子、短碳鏈的糖蜜、葡萄糖、麥芽糊精和麥芽糖漿有利于細(xì)胞增殖，長(zhǎng)碳鏈的可溶性淀粉以及乳糖、淀粉水解液、甘油和蔗糖對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)效果相對(duì)稍差。從蝦青素占類胡蘿卜素的比例分析，以單糖或二糖為主要成分的碳源，如糖蜜、蔗糖、葡萄糖和麥芽糖漿，蝦青素占類胡蘿卜素比例較低，而具有較高聚合度的麥芽糊精、可溶性淀粉和淀粉水解液以及細(xì)胞代謝較差的乳糖，蝦青素占類胡蘿卜素比例較高。碳源組合中引入葡萄糖或糖蜜雖然會(huì)導(dǎo)致蝦青素占類胡蘿卜素比例的下降，但在一定的糖蜜濃度下，通過控制較佳的葡萄糖和麥芽糊精比例，仍能實(shí)現(xiàn)高蝦青素比例、高生產(chǎn)強(qiáng)度和高菌體干重統(tǒng)一的目標(biāo)。中試試驗(yàn)中，在補(bǔ)糖培養(yǎng)基中加強(qiáng)有利于菌體生長(zhǎng)的糖蜜比例，可充分發(fā)揮中試罐提供更強(qiáng)供氧水平的優(yōu)勢(shì)，能進(jìn)一步提升菌體干重和蝦青素產(chǎn)量。

本研究明確了法夫酵母可用于工業(yè)化生產(chǎn)的碳源種類、組合和比例，實(shí)現(xiàn)小試及中試規(guī)模蝦青素產(chǎn)量與比例的提高，具有商業(yè)化運(yùn)用價(jià)值。目前，圍繞法夫酵母發(fā)酵控制，傾向于低糖發(fā)酵、兩階段補(bǔ)料控制[21-23]，因此后續(xù)除了對(duì)發(fā)酵培養(yǎng)基配方、環(huán)境因子進(jìn)行控制外，更多地需要在補(bǔ)料方式、碳源控制水平進(jìn)行優(yōu)化，降低碳溢流，從而進(jìn)一步提升高產(chǎn)菌株產(chǎn)量。