福建省福州肺科醫(yī)院檢驗(yàn)科 （福建 福州 350008）

內(nèi)容提要：目的：對(duì)BD PHOENIX-100全自動(dòng)微生物鑒定儀在進(jìn)行葡萄球菌鑒定時(shí)的鑒定水平做出客觀評(píng)價(jià)。方法：以分離自2018年3月～2020年5月患者標(biāo)本的葡萄球菌為樣本，共計(jì)79株，對(duì)樣本進(jìn)行常規(guī)培養(yǎng)，然后分別以API Staph與PHOENIX-100作為鑒定儀器，檢測(cè)葡萄球菌樣本，參照API Staph的檢測(cè)結(jié)果，對(duì)PHOENIX-100的應(yīng)用優(yōu)缺點(diǎn)做出評(píng)價(jià)。結(jié)果：兩種檢測(cè)方式的鑒定結(jié)果一致性為87.34%（69/79），對(duì)比鑒定分析，可知在金黃色葡萄球菌檢測(cè)中，二者鑒定結(jié)果完全相符。在對(duì)凝固酶陰性葡萄球菌進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，一致性為74.29%（26/35）。結(jié)論：以PHOENIX-100進(jìn)行葡萄球菌鑒定，基本可適應(yīng)臨床鑒定要求，鑒定金黃色葡萄球菌時(shí)可靠性較強(qiáng)，然而以該鑒定儀鑒定凝固酶陰性葡萄球菌則應(yīng)對(duì)鑒定結(jié)果持有謹(jǐn)慎態(tài)度，客觀認(rèn)識(shí)其鑒定結(jié)果的局限性。

當(dāng)前醫(yī)學(xué)研究中，以全自動(dòng)微生物鑒定儀進(jìn)行微生物鑒定成為眾多研究者的選擇[1]。在多樣性的鑒定儀中，PHOENIX-100具有代表性，但大部分學(xué)者認(rèn)為API Staph的鑒定結(jié)果科學(xué)性更高[2]，是較為優(yōu)質(zhì)的微生物鑒定應(yīng)用儀器[3]。此次研究的主要目的即為對(duì)PHOENIX-100的應(yīng)用可靠性進(jìn)行分析，評(píng)價(jià)其在鑒定葡萄球菌時(shí)結(jié)果的準(zhǔn)確性，以從2018年3月～2020年5月患者標(biāo)本中獲取的葡萄球菌為鑒定對(duì)象，同時(shí)使用API Staph進(jìn)行鑒定，對(duì)比鑒定結(jié)果差異，從而對(duì)PHOENIX-100的應(yīng)用可靠性做出評(píng)價(jià)，判斷其鑒定能力，便于相關(guān)領(lǐng)域鑒定工作提升鑒定質(zhì)量。

1.資料與方法

1.1 一般資料

本次研究樣本為79株葡萄球菌，均分離于2018年3月～2020年5月患者標(biāo)本。79例葡萄球菌樣本中，44株金葡（即金黃色葡萄球菌），35株CNS（即凝固酶陰性葡萄球菌）。

本次研究所使用儀器為PHOENIX-100，是全自動(dòng)性質(zhì)的微生物鑒定儀，生產(chǎn)廠家為美國BD公司，除該鑒定儀外，還包括與儀器配合使用的PMIC/ID55鑒定卡。作為對(duì)照檢測(cè)，則使用API Staph，包括鑒定葡萄球菌所必需的試劑條和同系列試劑。

1.2 方法

以臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程（第4版）為標(biāo)準(zhǔn)執(zhí)行操作，對(duì)患者標(biāo)本進(jìn)行接種，并將葡萄球菌從標(biāo)本中分離，得到葡萄球菌菌株樣本，進(jìn)行PHOENIX-100鑒定和API Staph檢測(cè)，鑒定要求為鑒定到種。根據(jù)PHOENIX-100使用手冊(cè)要求，以及API Staph使用說明要求，分別進(jìn)行鑒定。部分菌株在兩種鑒定方法中結(jié)果存在差異，重復(fù)鑒定操作，經(jīng)重復(fù)測(cè)試結(jié)果仍然差異性較大，執(zhí)行人工檢測(cè)手段，確定鑒定結(jié)果。

以API Staph對(duì)79株葡萄球菌進(jìn)行鑒定，可確定其中金葡為44株，CNS為35株。選取金葡ATCC 25923作為質(zhì)控菌株。

1.3 觀察指標(biāo)

以API Staph對(duì)葡萄球菌樣本的鑒定結(jié)果作為參照依據(jù)，以金葡ATCC 25923為質(zhì)控菌株，對(duì)比API Staph鑒定結(jié)果和PHOENIX-100所得出的鑒定結(jié)果的不同，分析PHOENIX-100鑒定準(zhǔn)確性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS 21.0軟件處理葡萄球菌樣本數(shù)據(jù)，計(jì)數(shù)資料（菌株數(shù)量、PHOENIX-100鑒定結(jié)果準(zhǔn)確性）采用χ2檢驗(yàn)，以%表示。計(jì)量資料采用t檢驗(yàn)，以±s表示。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.結(jié)果

2.1 質(zhì)控菌株

對(duì)金葡ATCC 25923進(jìn)行兩種鑒定方法下的分別鑒定。以PHOENIX-100對(duì)該菌株進(jìn)行鑒定，結(jié)果顯示為金葡。以API Staph對(duì)該菌株執(zhí)行鑒定操作，可確認(rèn)為金葡。二者鑒定結(jié)果一致。對(duì)比兩種鑒定方式中的%id皆為99.9。

2.2 全局結(jié)果

通過對(duì)79株樣本執(zhí)行兩種鑒定操作，鑒定完成后，PHOENIX-100鑒定結(jié)果中與API Staph鑒定結(jié)果相符合的樣本例數(shù)是69株，另有11株樣本在兩種鑒定方式中未取得一致性的鑒定結(jié)果，PHOENIX-100與API Staph鑒定結(jié)果相符性是87.34%。

2.3 金葡鑒定

以PHOENIX-100對(duì)44株金葡執(zhí)行鑒定操作，鑒定結(jié)果均顯示為金葡[100%（44/44）]。該鑒定結(jié)果與API Staph鑒定完全一致，相符性100%。

2.4 CNS鑒定

以PHOENIX-100對(duì)35株CNS執(zhí)行鑒定操作，鑒定結(jié)果顯示其中26株為CNS，另有9株樣本在兩種鑒定方式中未取得相同的鑒定結(jié)果，PHOENIX-100與API Staph鑒定結(jié)果相符性是74.29%。在PHOENIX-100鑒定中，表皮葡萄球菌誤鑒定為金葡的樣本為3株，顯示假陽性，另有6株樣本鑒定結(jié)果與API Staph鑒定結(jié)果存在差異，分別為2株API Staph鑒定為表皮葡萄球菌的樣本在PHOENIX-100鑒定中顯示為人葡萄球菌，3株API Staph鑒定為人葡萄球菌的樣本在PHOENIX-100鑒定中顯示為表皮葡萄球菌，1株API Staph鑒定為路鄧葡萄球菌的樣本在PHOENIX-100鑒定中顯示為腐生葡萄球菌，見表1。

表1.CNS鑒定對(duì)比

3.討論

在葡萄球菌龐大的構(gòu)成群屬中，具有最強(qiáng)致病影響的即為金黃色葡萄球菌[4]，該菌分布范圍較廣[5]，可通過多種途徑迅速傳播，致使更多機(jī)體受到其感染，是具有強(qiáng)烈感染性的病原菌，機(jī)體在受到金葡感染后，通常表現(xiàn)為皮膚感染，出現(xiàn)呼吸系統(tǒng)異常[6]，金葡還易導(dǎo)致感染患者出現(xiàn)敗血癥[7]。金葡歸屬于革蘭陽性球菌，在醫(yī)院中發(fā)生的獲得性感染，經(jīng)?？砂l(fā)現(xiàn)金葡的影響[8]。一種鑒定手段能否達(dá)到臨床研究的鑒定要求，需要以多個(gè)指標(biāo)進(jìn)行衡量，其中是否可準(zhǔn)確鑒定金葡，即是核心標(biāo)準(zhǔn)之一[9]。在本次研究中，79株葡萄球菌樣本經(jīng)過API Staph鑒定可知包含44例金葡，PHOENIX-100對(duì)此進(jìn)行準(zhǔn)確鑒定，兩種鑒定方式在結(jié)果上一致性為100%，顯示PHOENIX-100執(zhí)行金葡鑒定時(shí)科學(xué)性較高，說明PHOENIX-100的實(shí)驗(yàn)室鑒定水平具有可靠性，對(duì)臨床具有支持作用。

金葡菌致病性較強(qiáng)，為食源性質(zhì)的微生物，此菌體對(duì)高鹽環(huán)境耐受性強(qiáng)，即使是在10%鹽濃度的條件下，也可以生存和生長。金葡具有寄生性，可附著在動(dòng)物或人的機(jī)體表面，以皮膚為生存和生長基地，也可在呼吸系統(tǒng)（如鼻腔）中寄生，或者在消化系統(tǒng)（如腸胃）中寄生，機(jī)體中的一些患部（如化膿后的瘡或者癰）中。不僅如此，污水和無處不在的空氣也是其存活環(huán)境[10]。當(dāng)生存環(huán)境達(dá)到了金葡的條件需求后，該菌體即可產(chǎn)生腸毒素，腸毒素具有明顯的致病性，會(huì)致使機(jī)體出現(xiàn)食物中毒表現(xiàn)，破壞腸道組織，使患者出現(xiàn)嘔吐和腹瀉癥狀。菌株鑒定時(shí)，確定為金葡，臨床醫(yī)生可對(duì)其高致病性引起重視，而金葡被誤鑒定成CNS，則應(yīng)導(dǎo)致臨床治療忽視其菌體影響，造成干預(yù)之后，影響臨床治療及時(shí)性，降低治療有效性。本次研究PHOENIX-100對(duì)金葡的鑒定結(jié)果完全準(zhǔn)確，未見遺漏金葡菌株，未見鑒定結(jié)果顯示為CNS、實(shí)際為金葡的樣本，可避免上述不良影響的發(fā)生。在本次對(duì)比鑒定研究中，存在3例表皮葡萄球菌被錯(cuò)誤鑒定為金葡，顯示假陽性，以試管法進(jìn)行重復(fù)檢測(cè)，顯示為陰性，以羊血平板進(jìn)行檢測(cè)，未見明顯的溶血環(huán)。該結(jié)果顯示，當(dāng)以PHOENIX-100執(zhí)行菌體檢測(cè)鑒定為金葡，但其菌體溶血性存在異常，和菌落形態(tài)也存在違和之處，即為可疑菌落，則應(yīng)使用API Staph進(jìn)行重復(fù)鑒定，也可使用手工法重復(fù)檢測(cè)，對(duì)其進(jìn)行進(jìn)一步鑒別，避免出現(xiàn)金葡誤判。

根據(jù)本次研究相關(guān)結(jié)果可知，以PHOENIX-100進(jìn)行CNS鑒定時(shí)，與API Staph對(duì)其鑒定的結(jié)果存在一定差異，相符性偏低，本次研究二者鑒定結(jié)果相符性為74.29%。分析導(dǎo)致差異存在的誘因，鑒定依據(jù)可能為主要影響因素，PHOENIX-100鑒定與API Staph鑒定都是與生理學(xué)合并生物化學(xué)的方法執(zhí)行鑒定，分析細(xì)菌所表現(xiàn)出的生理特點(diǎn)和生化特點(diǎn)，作為鑒定依據(jù)，但存在多維度因素可對(duì)其生理生化方面的反應(yīng)特性產(chǎn)生影響，例如細(xì)菌在不同的生長階段特性表現(xiàn)具有差異性，反應(yīng)水平不一致，長期受到抗生素影響的機(jī)體病原菌存在原有生理生化特性典型性消失的可能，此類因素皆存在干擾作用，會(huì)對(duì)鑒定結(jié)果造成影響，PHOENIX-100與API Staph的鑒定結(jié)果相符性無法達(dá)到預(yù)期。

綜上所述，PHOENIX-100在鑒定葡萄球菌時(shí)具有一定可靠性，可應(yīng)用于臨床，對(duì)金葡菌鑒定結(jié)果較為可靠，但在進(jìn)行CNS鑒定時(shí)，可能發(fā)生錯(cuò)誤鑒定的情況，需要注意對(duì)鑒定結(jié)果進(jìn)行檢驗(yàn)。