楊志國(guó)，鮑春花

（菏澤市立醫(yī)院 腫瘤科,山東 菏澤 274000）

據(jù)流行病學(xué)統(tǒng)計(jì),肝癌的發(fā)生率與死亡率在所有惡性腫瘤中均位居前列,我國(guó)更是肝癌的高發(fā)國(guó)家之一［1］。導(dǎo)致肝癌的因素眾多,而基因易感性是其中較為重要的一種。谷胱甘肽轉(zhuǎn)硫酶（glutathione S-transferases,GSTs）屬于多功能酶,可以使谷胱甘肽與多種致癌物結(jié)合,催化兩者反應(yīng),是人體重要的解毒過(guò)程［2］。GSTM1 和GSTT1均屬于谷胱甘肽轉(zhuǎn)硫酶的基因表型,當(dāng)GSTM1 和GSTT1 不能在肝臟中表達(dá)時(shí),會(huì)使相應(yīng)的解毒酶失活,不能催化肝內(nèi)解毒反應(yīng),最終導(dǎo)致肝癌形成［3］。既往研究表明,GSTT1 和GSTM1 對(duì)肝癌產(chǎn)生的影響結(jié)果多存在差異［4］。因此,本研究探討谷胱甘肽轉(zhuǎn)硫酶M1 和T1 基因多態(tài)性與肝癌易感性的關(guān)系,現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2018 年6 月至2019 年3 月菏澤市立醫(yī)院收治的50 例肝癌患者作為病例組,另取同期該院體檢的80 例健康志愿者作為對(duì)照組。其中,病例組男性34 例,女性16 例；平均年齡（62.71±5.64）歲；平均病程（1.45±0.39）年。對(duì)照組男性54 例,女性26 例；平均年齡（61.56±5.97）歲。納入標(biāo)準(zhǔn)［5］：①病例組患者經(jīng)病理或活檢確診為肝癌；②對(duì)照組成員間無(wú)血緣關(guān)系；③兩組男女構(gòu)成比及年齡比例基本一致；④均成功獲得PCR 片段。本研究通過(guò)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn),患者及其家屬知情同意。兩組性別、年齡、平均病程等臨床資料比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

1.2 研究方法

1.2.1 取血 嚴(yán)格遵循無(wú)菌原則,研究對(duì)象于清晨空腹?fàn)顟B(tài)下抽血6 mL,保存于-20℃冰箱中備用。

1.2.2 提取基因DNA 病例組肝癌組織標(biāo)本與對(duì)照組靜脈血標(biāo)本的DNA 提取分別用血液/細(xì)胞/組織基因組DNA 提取試劑盒、血液基因組DNA 提取試劑盒,DNA 置于-20℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.3 PCR 擴(kuò)增 使用多重PCR 技術(shù)對(duì)GSTM1、GSTT1 及β-球蛋白的基因片段進(jìn)行擴(kuò)增,將β-球蛋白的基因片段作為對(duì)照,避免出現(xiàn)假陰性。反應(yīng)總體積為25 μL,儀器為美國(guó)MJResearch 公司PTC-200 型PCR 儀。94℃預(yù)變性5 min,94℃變性1 min,62℃退火1 min,72℃延伸5 min,總共35個(gè)循環(huán)。將反應(yīng)產(chǎn)物置于瓊脂糖凝膠（1.5%）中電泳30 min（電壓為120 V）,最后在采集儀器上觀察結(jié)果。根據(jù)是否存在215 bp 條帶判定是否為GSTM1 缺失基因型,根據(jù)是否存在480 bp 條帶判定是否為GSTT1 缺失基因型,350 bp 條帶為β-球蛋白基因內(nèi)對(duì)照。

1.3 觀察指標(biāo)

①215 bp 條帶作為GSTM1 基因是否缺失的標(biāo)準(zhǔn)。②480 bp 條帶作為GSTT1 基因是否缺失的標(biāo)準(zhǔn)。③β-球蛋白基因中的350 bp 條帶作為對(duì)照。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

數(shù)據(jù)分析采用SPSS 20.0 統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）表示,比較用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以率（%）表示,比較用χ2檢驗(yàn),P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組GSTT1 缺失和GSTM1 缺失與肝癌發(fā)生的關(guān)系

病例組GSTT1 的陰性率高于對(duì)照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）,O^R值為2.010（95%CI：1.090～3.700）。表明當(dāng)缺失GSTT1 基因時(shí),發(fā)生肝癌的風(fēng)險(xiǎn)性可提高約1.00 倍。病例組GSTM1 陰性率高于對(duì)照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）,O^R值為2.370（95%CI：1.270～4.430）。表明當(dāng)缺失GSTM1 基因時(shí),發(fā)生肝癌的風(fēng)險(xiǎn)性可提高約1.37倍。見(jiàn)表1。

2.2 GSTT1 缺失和GSTM1 缺失相互作用對(duì)肝癌的影響

將GSTM1（+）、GSTT1（+）作為對(duì)照,僅表達(dá)GSTM1 時(shí),發(fā)生肝癌的風(fēng)險(xiǎn)性可提高約1.36倍。僅表達(dá)GSTT1 時(shí),發(fā)生肝癌的風(fēng)險(xiǎn)性可提高約1.70 倍。GSTM1 和GSTT1 均缺失時(shí),發(fā)生肝癌的風(fēng)險(xiǎn)性可提高約4.59 倍,表明GSTM1 和GSTT1具有協(xié)同作用。兩組比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=8.885,P=0.031）。見(jiàn)表2。

表1 兩組GSTT1 缺失和GSTM1 缺失與肝癌發(fā)生的關(guān)系 ［n(%)］

表2 GSTT1 缺失和GSTM1 缺失相互作用對(duì)肝癌的影響 ［n(%)］

3 討論

肝癌是一種發(fā)病率和死亡率均較高的惡性腫瘤,其由多因素和多過(guò)程共同參與造成［6］。既往研究已表明,環(huán)境因素（黃曲霉毒素、乙型肝炎病毒及飲水污染）和遺傳因素（各種靶向基因、GSTM1 及GSTT1 等）是造成肝癌眾多因素中最重要的兩種因素［7］。環(huán)境因素為決定肝癌是否發(fā)生的始動(dòng)因素,而遺傳基因是決定肝癌是否發(fā)生的易感因素［8］。代謝酶的功能及種類在不同基因型中呈現(xiàn)多態(tài)性,而這種多態(tài)性導(dǎo)致了不同個(gè)體對(duì)致突變劑或致癌劑易感程度的不同［9］。因此,導(dǎo)致致癌物代謝反應(yīng)過(guò)程變化的遺傳基因都可能對(duì)肝癌的發(fā)生產(chǎn)生影響。谷胱甘肽轉(zhuǎn)硫酶作為一種重要的解毒酶,常在第二時(shí)相中發(fā)揮作用,通過(guò)谷胱甘肽結(jié)合反應(yīng)或與外源性有害物質(zhì)直接結(jié)合使致癌物分解排出,完成解毒過(guò)程［10］。GSTM1 和GSTT1 均屬于谷胱甘肽轉(zhuǎn)硫酶的基因表型,其中GSTM1 含有3 種等位基因（a、b 及null）,該基因缺失會(huì)導(dǎo)致GSTM1 無(wú)法表達(dá),不能進(jìn)行解毒反應(yīng),且GSTM1 和GSTT1 是一組同工酶,催化反應(yīng)相同,因此GSTT1 無(wú)法表達(dá)時(shí)解毒反應(yīng)同樣無(wú)法完成。

本研究結(jié)果表明,病例組GSTT1 陰性率明顯高于對(duì)照組,且比較有差異,表明當(dāng)缺失GSTT1基因時(shí),發(fā)生肝癌的風(fēng)險(xiǎn)性可提高約1.00 倍；病例組GSTM1 陰性率明顯高于對(duì)照組,且比較有差異,表明當(dāng)缺失GSTM1 基因時(shí),發(fā)生肝癌的風(fēng)險(xiǎn)性可提高約1.37 倍。僅表達(dá)GSTM1 時(shí),發(fā)生肝癌的風(fēng)險(xiǎn)性可提高約1.36 倍；僅表達(dá)GSTT1 時(shí),發(fā)生肝癌的風(fēng)險(xiǎn)性可提高約1.70 倍；GSTM1 和GSTT1 均缺失時(shí),發(fā)生肝癌的風(fēng)險(xiǎn)性可提高約4.59 倍,表明GSTM1 和GSTT1 具有協(xié)同作用。

綜上所述,GSTM1 和GSTT1 均可使發(fā)生肝癌的風(fēng)險(xiǎn)性提高,且兩者具有協(xié)同效果,其在肝癌的篩查和預(yù)防中具有指導(dǎo)價(jià)值。