陳 輝

（桂林理工大學(xué)體育教學(xué)部，廣西 桂林 541004）

榆黃蘑（Pleurotus citrinopileatus Sing.）的特點為菌蓋呈草黃色至鮮黃色，光滑，漏斗狀，直徑3 cm～10 cm，菌肉白色，柄偏生，菌蓋鮮黃、油亮，形態(tài)優(yōu)美喜人[1]。榆黃蘑既有味道鮮美、香味濃郁、營養(yǎng)豐富的食用價值，又有滋補強身的藥用價值[2]。隨著生活水平的提高，人們對飲料的需求量大大提高，果蔬飲料越來越受到人們的喜歡。市場上食用菌類型飲料較少，食用菌類的藥理活性比較強，其保肝護肝、降血脂、降血糖的作用十分突出[3]。借助小鼠試驗，對榆黃蘑制劑的抗疲勞作用、耐缺氧作用以及D-半乳糖的抗氧化作用進行試驗，分析了榆黃蘑制劑抗運動性疲勞的功能，為后續(xù)相關(guān)新產(chǎn)品的創(chuàng)新與開發(fā)提供了新的思路，更好地滿足人們的日常需求。

1 材料與儀器

1.1 試驗動物

昆明種小鼠，體重約20 g，由延邊大學(xué)試驗動物科提供。選取150只小鼠。

1.2 藥品與試劑

MDA試劑盒、T-SOD試劑盒、GSH-Px試劑盒，南京建成生物工程研究所；D-半乳糖（生產(chǎn)批號F20080429），上海國藥集團化學(xué)試劑有限公司；同時聘請延邊大學(xué)藥學(xué)院呂惠子副教授對采購自黑龍江的野生榆黃蘑真?zhèn)芜M行鑒定。

1.3 儀器設(shè)備

HH-501超級恒溫水浴箱，江蘇金壇市恒豐儀器廠；VIS-723型分光光度計，上海精密科學(xué)儀器有限公司；KA-1000低速臺式離心機，上海安亭科學(xué)儀器廠；DY-Ⅱ型電動玻璃勻漿機；寧波新芝生物科技股份有限公司。

2 試驗方法

2.1 制備榆黃蘑制劑

將新鮮的榆黃蘑子實體5 g浸在50℃蒸餾水中0.5 h，使用脫脂棉進行過濾，環(huán)糊精脫澀，同時加入穩(wěn)定劑羧甲基纖維素鈉（0.3%）0.5 g，并將黃原膠（0.01%）0.5 g、瓜爾豆膠（0.01%，pH 3.6～3.8）0.2 g加入其中，使用巴氏滅菌法對其進行滅菌處理后，制得榆黃蘑生藥量為800 g的榆黃蘑制劑，使用時用蒸餾水稀釋，將其制作成榆黃蘑質(zhì)量濃度為660 g·L-1的制劑。使用蒸餾水對榆黃蘑制劑稀釋后得到濃度為330 g·L-1和165 g·L-1的制劑，用這些制劑對小鼠進行灌胃。

3)當(dāng)錨固段長度較小時，處于彈性變形階段錨固劑-圍巖界面剪應(yīng)力可近似認(rèn)為是均布的。隨著錨固長度的增加，錨固始端最大剪應(yīng)力值逐漸降低，界面剪應(yīng)力分布不均勻程度增加。

2.2 力竭游泳試驗

榆黃蘑制劑會對小鼠的皮膚組織丙二醛（MDA）含量和乳酸脫氫酶（T-SOD）活力以及全血血清乳酸（GSH-Px）造成不同影響，其具體情況詳見表2。

取血完成以后，采取頸椎脫臼的辦法將小鼠處死，使用濃度為8%硫化鈉溶液對小鼠背部進行脫毛處理。同時選擇0.4 g背部皮膚組織，漂洗背部皮膚組織的時候，使用冷卻的生理鹽水進行操作，將多余的脂肪組織處理干凈，使用濾紙進行擦拭直至干燥，對其重量進行稱取。同時與重量為9倍的冷卻生理鹽水一起放入到試管中，使用功率為3 000 r·min-1的離心設(shè)備進行離心處理5 min，選取上部清液。按照試劑盒使用說明對選擇的清液進行相關(guān)指標(biāo)的測定，獲得皮膚組織中的MDA含量值和T-SOD活力[6]。

2.3 常壓耐缺氧試驗

榆黃蘑制劑組在灌胃35 d以后，與空白組進行對比，小鼠的常壓耐缺氧時間和力竭游泳時間都發(fā)生顯著變化，高劑量組和中劑量組變化最為明顯。劇烈運動和缺氧運動會使局部肌肉血流變緩，需要通過糖酵解獲得能量。糖酵解的過程中會釋放出乳酸，乳酸會使肌肉的酸堿度發(fā)生變化，這就是造成疲勞的關(guān)鍵性誘因[7]。乳酸脫氫酶具有一定的催化作用，肝臟乳酸氧化成丙酮酸時、骨骼肌糖酵解中丙酮酸還原成乳酸時都發(fā)揮了積極的促進作用，并使其借助線粒體快速的融入到三羧酸中完成高效的循環(huán)。隨著乳酸脫氫酶活性的不斷增強，小鼠的力竭游泳時間和常壓耐缺氧能力得到提高[8]。

2.4 抗氧化試驗

小鼠被隨機分成為5組，每組30只，分別是空白組、模型組和3個榆黃蘑制劑組。模型組和榆黃蘑制劑組小鼠每天使用10%的D-半乳糖進行皮下注射（0.01 mL·g-1），后持續(xù)注射榆黃蘑制劑時間為35 d，在此期間，每隔10 d注射1次D-半乳糖；使用生理鹽水對空白組的小鼠進行注射。模型組和空白組小鼠每天灌胃等量的蒸餾水[5]。在最后1次灌胃1 h后，摘除小鼠的眼球進行取血，將樣本放入到肝素抗凝試管里，按照試劑盒的說明對全血GSH-Px活力進行測定。

1.2 檢測方法 ①血清學(xué)指標(biāo)：所有受檢對象與晨起空腹抽取靜脈血3 ml，置于普通肝素管中，靜置20 min，3 000 r/min離心10 min，取上層血清放置于-20 ℃冰箱中待測；采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)檢測視黃醇結(jié)合蛋白(RBP)、白細(xì)胞介素-4(IL-4)、免疫球蛋白E(IgE)，試劑盒購自上海晶美生物試劑有限公司，嚴(yán)格按照說明書操作規(guī)范進行；②哮喘控制測試(ACT)評分和痰EOS測定：ACT評分[5]根據(jù)患者自身情況如實填寫各項分值，算出總分，痰液EOS檢測參照支氣管哮喘防治指南[4]計數(shù)方法測定，采用百分比表示。

2.5 統(tǒng)計學(xué)分析

3 結(jié)果分析

3.1 對小鼠耐缺氧能力和力竭游泳時間造成的影響

榆黃蘑制劑會對小鼠常壓耐缺氧存活時間和力竭游泳時間造成不同影響，其具體情況見表1。

表1 榆黃蘑制劑對小鼠力竭游泳時間和常壓缺氧存活時間的影響（±s）Tab.1 Effect of Pleurotus citrinopileatus beverage on exhausted swimming time and survival time under normal pressure hypoxia in mice（±s）

注：*表示P＜0.05水平差異顯著，**表示P＜0.01水平差異極顯著。Note:*indicates that there is a significant difference at the level of P＜0.05,**indicates that there is a very significant difference at the level of P＜0.01.

組別 力竭游泳時間/min 常壓缺氧存活時間/min低劑量組 28.46±2.51*9.95±1.36*中劑量組 30.17±4.71**高劑量組 36.21±5.66** 12.05±2.47**10.55±1.35**空白組 25.11±5.068.20±1.21

與兩館相比，進入國子監(jiān)的要求就比較低，假冒比較簡單，因此更加泛濫。德宗貞元十九年（803年），韓愈《請復(fù)國子監(jiān)生徒狀》中記載：“國家典章，崇重庠序，近日趨競，未復(fù)本源。至使公卿子孫，恥游太學(xué)工商凡冗，或處上庠。 ”〔9〕(p589)太學(xué)中有工商子弟，這與“凡官人身及同居大功已上親自執(zhí)工商，家專其業(yè)，皆不得入仕”〔4〕(p34)的規(guī)定有悖。 說明德宗時，假蔭在國子監(jiān)中泛濫，甚至工商子弟都可以進入國子監(jiān)。國家政策中規(guī)定進入學(xué)館的條件已經(jīng)完全被破壞，而真正貴胄子弟已不愿進入學(xué)館學(xué)習(xí)。

3.2 對抗氧化作用的影響

將參與試驗的小鼠分為對照組和榆黃蘑制劑3組，分別是低劑量組、中劑量組、高劑量組，每組數(shù)目為30只，灌胃劑量分別為83 g·L-1、165 g·L-1和330 g·L-1，1次/d，持續(xù)35 d；使用等劑量的蒸餾水灌胃對照組小鼠。在最后1次灌胃0.5 h后，將小鼠放在寬27 cm、長32 cm的水槽中，水深為15 cm，小鼠在水槽中進行無負(fù)荷游泳，小鼠力竭游泳時間設(shè)置為小鼠頭部進入水中8 s后沒有再次抬頭的時間，同時做好記錄[4]。

由表2可知，與空白組比較，低劑量、中劑量、高劑量組的血清和肝臟中SOD值均升高，其中高劑量組升高最多（P＜0.01，P＜0.001），與對照組比較，中高劑量組的SOD值均升高。從表2的結(jié)果可以看出，與空白組比較，低劑量、中劑量、高劑量組的血清和肝臟中的MDA值分別降低了。中劑量、高劑量組的降低更為顯著（P＜0.001）。對照組與空白組的SOD和MDA較低、中劑量組變化不明顯。說明榆黃蘑飲料比紅牛飲料可以顯著加快自由基代謝，推遲疲勞的發(fā)生，減少組織中脂質(zhì)過氧化的損傷，并有助于運動后疲勞的消除及物質(zhì)與能量的恢復(fù)。

表2 榆黃蘑制劑對小鼠GSH-Px、T-SOD活力和MDA含量的影響（±s）Tab.2 Effect of Pleurotus citrinopileatus beverage on GSH PX activity,T-SOD activity and MDA content in mice（±s）

表2 榆黃蘑制劑對小鼠GSH-Px、T-SOD活力和MDA含量的影響（±s）Tab.2 Effect of Pleurotus citrinopileatus beverage on GSH PX activity,T-SOD activity and MDA content in mice（±s）

注：*表示P＜0.05水平差異顯著，**表示P＜0.01水平差異極顯著。Note:*indicates that there is a significant difference at the level of P＜0.05,**indicates that there is a very significant difference at the level of P＜0.01.

對照組 961.33±51.26 19.77±1.15低劑量組 1 047.58±79.21 19.53±2.64* 116.85±30.74*中劑量組 1 081.33±87.59 23.68±3.07* 95.62±5.97**GSH-Px/(U·mL-1)T-SOD/(U·mg-1)空白組 1 131.35±189.05 25.66±3.71 75.83±12.06 112.65±24.95組別 含量MDA/(nmol·mg-1)高劑量組 1 098.46±96.41 29.51±2.66**77.18±25.06**

采用SPSS 18.0統(tǒng)計學(xué)軟件對數(shù)據(jù)進行處理。計量資料以“±s”表示，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

4 討論

灌胃結(jié)束0.5 h后，使用裝有鈉石灰的廣口瓶將小鼠裝好，并使用凡士林將瓶口密封嚴(yán)實。詳細(xì)記錄小鼠進入瓶中直到呼吸停止的時間，將這一時間認(rèn)定為小鼠常壓缺氧存活時間。

由表1可知，在對榆黃蘑制劑組小鼠灌胃35 d后，分析所得數(shù)據(jù)發(fā)現(xiàn)，小鼠的耐缺氧能力和力竭游泳時間隨著灌胃劑量的增加得到增強，榆黃蘑高劑量組變化最大；榆黃蘑制劑組小鼠灌胃劑量的不同，也將會給小鼠常壓耐缺氧的時間造成比較明顯的影響，對高劑量榆黃蘑組和中劑量榆黃蘑組的影響最為明顯。

機體在過度運動的時候，會發(fā)生缺氧情況，骨骼肌收縮需要的能量要借助糖酵解系統(tǒng)來實現(xiàn)快速的供應(yīng)，從而產(chǎn)生許多乳酸。當(dāng)乳酸進入到血液中以后，血液的酸堿度就會發(fā)生改變，會給骨骼肌細(xì)胞內(nèi)的糖酵解過程造成一定的阻礙，從而使肌肉出現(xiàn)疲勞的狀態(tài)，使機體的運動能力降低[9]。要想使機體的運動能力得到不斷提高，使機體的疲勞感得到有效的緩解，就要對血乳酸的增長速度進行科學(xué)控制。小鼠在游泳停止后的50 min內(nèi)是血乳酸的最佳恢復(fù)時間，該試驗顯示在這段時間里，血乳酸值有所下降，說明小鼠的疲勞感有所緩解[10]。

機體耐力的提高可以借助糖原的儲備得以實現(xiàn)，使含氮化合物和蛋白質(zhì)的分解代謝以及血清尿素氮的形成得到有效控制。體內(nèi)氨基酸分解代謝的產(chǎn)物包括尿素氮在其中，肝臟是血中尿素氮的主要來源，隨著尿液不斷地排出[11]。分析可知使用榆黃蘑制劑組小鼠的血清尿素氮含量都比較低，低劑量組與空白組相比差異也非常明顯，這就說明了榆黃蘑制劑可以對運動后小鼠的血清尿素氮形成起到較好的控制作用。

《刑法修正案八》將醉酒駕駛納入到刑法處罰的范圍是必然的，而且必須實現(xiàn)對該行為的全面監(jiān)督，不能僅僅是以危險結(jié)果的發(fā)生為依據(jù)。我國目前已經(jīng)在刑法中加入了危險駕駛罪，其中包括醉酒型危險駕駛罪，在具體的規(guī)定中，不需要考慮醉酒駕駛所造成的具體后果和情節(jié)，只要行為人存在醉酒駕駛的客觀事實就構(gòu)成該類犯罪，需要處以拘役以及罰金，因此需要對該罪名的犯罪構(gòu)成要件進行研究，明確在何種情況下才能構(gòu)成該類犯罪，這樣才能更好地了解和研究醉酒型危險駕駛罪，并在實踐中實現(xiàn)對社會安全的保護。

經(jīng)過全面分析多糖類藥理作用的構(gòu)成關(guān)系發(fā)現(xiàn)，藥理活性受多糖類水溶性的影響非常明顯。榆黃蘑中提取的水溶性多糖具有較強的藥理活性，可以使小鼠的耐缺氧能力和抗氧化能力得到提高。試驗發(fā)現(xiàn)，榆黃蘑制劑可以使小鼠的抗疲勞、抗氧化和耐缺氧能力得到提高，為今后榆黃蘑制劑的推廣奠定基礎(chǔ)。

5 結(jié)論

小鼠抗疲勞試驗結(jié)果表明，不同濃度的榆黃蘑制劑均可延長小鼠的負(fù)重游泳時間，增強小鼠血清的SOD活性，降低MDA的含量，提高蛋白巰基化合物，同時降低肝臟中蛋白羰基化合物。提高肝糖原、肌糖原的儲備含量，這些說明榆黃蘑飲料具有很好的抗疲勞作用。