周世陽，賀芳，李俊，王睿＊

（1.貴州省檢測技術(shù)研究應(yīng)用中心，貴州 貴陽 550014；2.貴陽市白云區(qū)疾病預(yù)防控制中心，貴州 貴陽 550016）

唑嘧磺草胺，化學(xué)名稱為2′,6′-二氟-5-甲基[1,2,4]三唑并[1,5-α]嘧啶-2-磺酰苯胺，是一種由Dow AgroSciences 公司開發(fā)的三唑并嘧啶磺酰胺類內(nèi)吸性除草劑，通過根和葉吸收，在整株植物中傳導(dǎo)至生長點(diǎn)，主要用于防除大豆、豌豆、玉米田闊葉雜草和禾本科雜草[1]。

目前，對唑嘧磺草胺分析檢測方法報道主要有非水滴定法[2]、紫外分光光度法[3]、高效液相色譜法[4-6]、液相-串聯(lián)質(zhì)譜分析法[7-8]，本試驗用Smart and Barko 培養(yǎng)基模擬穗狀狐尾藻在野外的生長條件中受到唑嘧磺草胺毒性危害，并建立一種對培養(yǎng)基中存在的唑嘧磺草胺進(jìn)行定性和定量的高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜分析方法，該方法操作簡單、快速，擁有良好的分離效果和線性關(guān)系，且精密度和回收率均符合要求，適用于唑嘧磺草胺在單劑或復(fù)配制劑進(jìn)行化學(xué)農(nóng)藥登記毒性試驗中的質(zhì)量濃度測定，也適用于唑嘧磺草胺在環(huán)境水體中的殘留測定。

1 試驗部分

1.1 儀器與試劑

液質(zhì)聯(lián)用儀：Agilent 1290-6470A，具有AJS ESI離子源，Masshunter 數(shù)據(jù)采集、定性分析、定量分析工作站；梅特勒-托利多XSE205DU 型電子分析天平；Merck KGaA 色譜純乙腈；去離子水；唑嘧磺草胺標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)：含量=99.4%（SWARDA Biochemical Inc）；唑嘧磺草胺原藥：含量98.0%；Smart and Barko培養(yǎng)基配制配方如表1。

表1 Smart and Barko 培養(yǎng)基配方

1.2 儀器操作條件

1.2.1 液相色譜操作條件

流動相：乙腈-0.1%甲酸水（體積比30∶70），柱溫：40 ℃，流速：0.3 mL·min-1，進(jìn)樣體積：3.0 μL，色譜柱：Agilent Eclipse Plus C18（2.1 mm×50 mm，1.8 μm）。

1.2.2 質(zhì)譜操作條件

離子源參數(shù)：正離子模式；干燥氣：N2；干燥氣溫度：300 ℃；干燥氣流速：5 L·min-1；鞘氣：N2；鞘氣溫度：300 ℃；鞘氣流速：11 L·min-1；霧化器壓力（Nebulizer）：45 psi；噴嘴電壓：500 V；毛細(xì)管電壓（Capillary）：+3 500 V；監(jiān)測模式：MRM，離子采集參數(shù)見表2。

表2 MRM 離子采集參數(shù)

上述液相-質(zhì)譜操作條件是典型的的操作參數(shù)，可根據(jù)不同的儀器特點(diǎn)，做出適當(dāng)調(diào)整，以期獲得最佳效果，唑嘧磺草胺標(biāo)準(zhǔn)品典型色譜圖見圖1。

圖1 唑嘧磺草胺標(biāo)準(zhǔn)品典型色譜圖

1.3 實驗步驟

1.3.1 標(biāo)樣溶液的配制

稱取唑嘧磺草胺標(biāo)樣0.010 7 g 置于100.0 mL容量瓶中，用乙腈溶解并稀釋至刻度，得唑嘧磺草胺濃度為106.36 mg·L-1的標(biāo)樣儲備液，用Smart and B a r k o 培養(yǎng)基將唑嘧磺草胺稀釋成濃度為53.18 μg·L-1的標(biāo)準(zhǔn)使用液。

1.3.2 唑嘧磺草胺工作液的配制

吸取適當(dāng)體積的標(biāo)準(zhǔn)使用液，再用培養(yǎng)基稀釋一系列濃度為21.27、10.64、4.25、2.13、1.06、0.43、0.21、0.106 μg·L-1的唑嘧磺草胺工作溶液（采用的是基質(zhì)配標(biāo)的方法）。

1.3.3 樣品處理

用Smart and Barko 培養(yǎng)基配制準(zhǔn)確濃度為4.51 μg·L-1唑嘧磺草胺試樣溶液，過膜后，取5 mL置于10 mL 試管中，加入5 mL 培養(yǎng)基配制的準(zhǔn)確濃度為10.18 μg·L-1唑嘧磺草胺標(biāo)樣溶液，搖勻，平行5 次。按1.2 儀器操作條件進(jìn)行測試。

1.3.4 測定

選取0.21～21.27 μg·L-1的工作溶液用于制作校正曲線，濃度為2.13 μg·L-1的唑嘧磺草胺標(biāo)液用于精密度測定，0.106 μg·L-1的唑嘧磺草胺標(biāo)液用于檢出限和定量限實驗。

1.3.5 計算

本方法采用外標(biāo)法對唑嘧磺草胺進(jìn)行定量計算，工作曲線公式為：

其中：y—色譜峰響應(yīng)值；

x—唑嘧磺草胺的濃度；

α—工作曲線的斜率；

b—工作曲線的截距。

2 結(jié)果與討論

2.1 線性相關(guān)性測定

在1.2 的液相色譜條件下，將1.3.2 中的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液上機(jī)分析，分析結(jié)果見表3。

表3 線性相關(guān)性測定結(jié)果

結(jié)果顯示當(dāng)唑嘧磺草胺在質(zhì)量濃度 0.21～21.27 μg·L-1范圍時，濃度與響應(yīng)呈良好線性關(guān)系，得到唑嘧磺草胺的線性回歸方程為y=314.10x+16.41，線性相關(guān)系數(shù)R2為0.999；以唑嘧磺草胺質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)、響應(yīng)為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，見圖2。

圖2 唑嘧磺草胺線性關(guān)系曲線

2.2 分析方法的精密度

取2.13 μg·L-1的唑嘧磺草胺工作溶液用于方法精密度試驗，在1.2 的液相色譜條件下重復(fù)分析6 次，分析結(jié)果見表4。RSD（保留時間）＝0.23%，RSD（響應(yīng)）＝1.23%，滿足定性分析和定量分析的基本要求。

表4 分析方法的精密度測定結(jié)果

2.3 檢出限和定量限

選取0.106 μg·L-1的唑嘧磺草胺工作溶液用于檢出限和定量限試驗，在1.2 的液相色譜條件下平行分析6 次，分析結(jié)果見表5。由信噪比（S/N）計算出檢出限（LOD=3×分析濃度/S/N）和定量限（LOQ=10×分析濃度/S/N），6 次分析平均結(jié)果的LOD＝0.024 μg·L-1，LOQ＝0.079 μg·L-1。

表5 分析方法的精密度測定結(jié)果

2.4 加標(biāo)回收率試驗

用Smart and Barko 培養(yǎng)基配制準(zhǔn)確質(zhì)量濃度為4.51 μg·L-1唑嘧磺草胺試樣溶液，過膜后，取5 mL置于10 mL 試管中，加入5 mL 培養(yǎng)基配制的質(zhì)量濃度為10.18 μg·L-1唑嘧磺草胺標(biāo)樣溶液，搖勻，平行5 次。按1.2 儀器操作條件進(jìn)行測試，唑嘧磺草胺在培養(yǎng)基中的平均加標(biāo)回收率為105.76%，說明該方法有良好的準(zhǔn)確度，滿足實驗要求，分析結(jié)果見表6。

表6 回收率試驗結(jié)果

3 結(jié) 論

本試驗建立了一種測定水體基質(zhì)中唑嘧磺草胺質(zhì)量濃度的高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜分析方法，該方法操作簡單，擁有良好的線性關(guān)系、精密度和回收率，檢出限和定量限也較低，適用于原藥和復(fù)配制劑中唑嘧磺草胺在進(jìn)行環(huán)境影響或環(huán)境毒理評價時的質(zhì)量濃度測定。