黎青梅 黃煥宜 黎莉 何國華 陳冬玲

（陽江市人民醫(yī)院檢驗(yàn)科 廣東 陽江 529599）

沙門菌為腸道常見的革蘭陰性桿菌，是引起細(xì)菌性食物中毒、腸胃炎、傷寒等多種疾病的重要病原體之一[1-2]。沙門菌引起的腸胃炎和腹瀉具有潛伏期短，發(fā)展迅速，病情嚴(yán)重等特點(diǎn)[3]，全世界每年感染沙門菌的病人約9400 萬，其中最終造成15.5 萬死亡。在我國引起食物中毒的細(xì)菌中沙門菌占首位，嚴(yán)重威脅人類的身體健康。為了能夠有效找到沙門氏菌的檢驗(yàn)、分離、鑒定技術(shù)，我院對其進(jìn)行了研究，本文主要針對增菌后在不同培養(yǎng)基中對沙門氏菌檢出效果進(jìn)行分析。

1.材料

1.1 標(biāo)本來源

選取2018 年1 月—12 月在陽江市人民醫(yī)院因急性腹瀉送檢的肛拭樣本200 例，納入標(biāo)準(zhǔn)：患者糞便如水樣便、稀便、膿血便、黏液便；大便鏡檢白細(xì)胞≥5/高倍視野）、可見紅細(xì)胞和巨噬細(xì)胞；不考慮采集樣本前患者是否使用過抗菌藥物。

1.2 儀器與試劑

SBG增菌液、木糖賴氨酸Tergitol 4（XLT4）培養(yǎng)基、SS平板、木糖賴氨酸脫氧膽鹽（XLD）、沙門菌顯色培養(yǎng)基（CAS）、沙門氏菌診斷血清，恒溫培養(yǎng)箱，生物安全柜，全自動細(xì)菌鑒定及藥敏分析儀。

2.方法

2.1 肛拭樣本的接種

本實(shí)驗(yàn)分為實(shí)驗(yàn)組（SBG 增菌液接種法）和對照組（直接接種法）兩組，每例糞便樣本均分別采用SBG 增菌液接種法和直接接種法接種。實(shí)驗(yàn)組先采用SBG 增菌液增菌18 ～24 小時，后再轉(zhuǎn)種XLT4 培養(yǎng)基、SS 平板、XLD 培養(yǎng)基、CAS 培養(yǎng)基。對照組則未采用增菌法，直接接種XLT4 培養(yǎng)基、SS 平板、XLD培養(yǎng)基、CAS 培養(yǎng)基。35℃培養(yǎng)18 ～24 小時后，觀察平板上菌落生長情況。

2.2 沙門菌的鑒定與分型

選取可疑菌落（在XLT4 培養(yǎng)基、SS 平板、XLD 培養(yǎng)基為中等大小，黑色菌落；CAS 培養(yǎng)基為中等大小，紫色菌落）沙門菌的血清學(xué)鑒定和藥敏實(shí)驗(yàn)，血清學(xué)實(shí)驗(yàn)鑒定為沙門菌菌株送到廣東省疾病預(yù)防控制中心做血清分型。

2.3 統(tǒng)計學(xué)分析

為減少誤差，所有培養(yǎng)基均由同組檢驗(yàn)科醫(yī)師進(jìn)行檢測。應(yīng)用SPSS23.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。計數(shù)資料采用卡方檢驗(yàn)，P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

3.結(jié)果

3.1 增菌對處理提高沙門菌檢出率

實(shí)驗(yàn)組與對照組的沙門菌陽性例數(shù)差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P ＜0.05）。因此，通過增菌處理后，樣本中的沙門菌檢出例數(shù)得到顯著提高，更能有效地檢出沙門菌，見表1。

表1 兩組標(biāo)本沙門菌檢出結(jié)果比較（例）

3.2 4 種培養(yǎng)基培養(yǎng)增菌后沙門菌檢出率

為了進(jìn)一步考察SBG 增菌后何種培養(yǎng)基（XLT4，SS，XLD 和CAS）培養(yǎng)更能有助于沙門菌檢出，對增菌后的200 例標(biāo)本采用檢出率指標(biāo)進(jìn)行評價。其中CAS 沙門菌陽性例數(shù)最多，檢出率也最高（27.5%）。XLT4 與SS 檢出率比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P ＞0.05）；XLT4 與XLD 檢出率比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P ＞0.05）；XLT4 與CAS 檢出率比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P ＞0.05）；SS 與XLD 檢出率比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P ＞0.05）；SS 與CAS 檢出率比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P ＞0.05）；XLD 與CAS 檢出率比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P ＞0.05）；即兩兩比較檢出率差異都無統(tǒng)計學(xué)意義，見表2。

表2 增菌后不同培養(yǎng)基沙門菌檢出率比較（n=200）

3.3 4 種培養(yǎng)基增菌后沙門菌準(zhǔn)確率

實(shí)驗(yàn)組200 例糞便樣本檢出的可疑沙門氏菌，經(jīng)廣東省疾病預(yù)防控制中心鑒定，確認(rèn)沙門氏菌49 例。其中，以CAS 培養(yǎng)出的沙門菌準(zhǔn)確率最高（98%）。經(jīng)比較，XLT4 與CAS 準(zhǔn)確率差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P ＜0.05）；其余組合準(zhǔn)確率差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P ＞0.05）；總體上，采用CAS 培養(yǎng)基培養(yǎng)準(zhǔn)確率略高于其它三種培養(yǎng)基，見表3。

表3 增菌后不同培養(yǎng)基沙門菌準(zhǔn)確率比較

3.4 沙門菌菌株分型

實(shí)驗(yàn)組經(jīng)鑒定和血清分型，確診49 株沙門菌，其中以鼠傷寒沙門菌變種為主，其次是腸炎沙門菌和鼠傷寒沙門菌，共占69.38%（34/49），各沙門菌血清型分離結(jié)果見表4。

表4 49 株沙門菌血清型分布

4.討論

沙門菌菌體大小約（0.6 ～0.9）×（1 ～3）微米，無芽胞，無莢膜。除雞白痢沙門氏菌和雞傷寒沙門氏菌外，大多有周身鞭毛。營養(yǎng)要求不高，分離培養(yǎng)常采用腸道選擇鑒別培養(yǎng)基。生化反應(yīng)對本屬菌的鑒別具有重要參考意義。不液化明膠，不分解尿素，不產(chǎn)生吲哚，不發(fā)酵乳糖和蔗糖，能發(fā)酵葡萄糖、甘露醇、麥芽糖和衛(wèi)芽糖，大多產(chǎn)酸產(chǎn)氣，少數(shù)只產(chǎn)酸不產(chǎn)氣[4]。VP 試驗(yàn)陰性，有賴氨酸脫羧酶。對熱抵抗力不強(qiáng)，在60℃ 15 分鐘可被殺死。在水中存活2 ～3 周。在5%的石炭酸中，5 分鐘死亡。

增菌是沙門菌培養(yǎng)重要的一步，常用于臨床實(shí)驗(yàn)室細(xì)菌的分離培養(yǎng)。SBG 增菌液是一種選擇性培養(yǎng)基，含有蛋白胨、酵母膏粉、甘露醇、亞硒酸氫鈉、磺胺吡啶鈉和磺綠等成分，既可以滿足沙門菌及一般細(xì)胞生長繁殖所必需的碳源、氮源和微量元素，有利于受損傷的沙門菌修復(fù)，使受損傷的沙門菌恢復(fù)到損傷前的穩(wěn)定的生理狀態(tài)，又可以抑制革蘭氏陽性菌和非沙門氏菌的大多數(shù)革蘭氏陰性腸道菌，利于沙門菌的分離培養(yǎng)[5]。我院研究糞便標(biāo)本采用運(yùn)送培養(yǎng)基和一次性采樣拭子采集，可保證標(biāo)本運(yùn)送與保存時致病菌不受影響，可排除分析前標(biāo)本的影響。

直接接種的糞便樣本檢出率低，本實(shí)驗(yàn)中檢出率僅為4.5%，其原因一方面由于糞便樣本中存在的沙門菌數(shù)量少或采樣前服用抗菌藥物導(dǎo)致的沙門菌減少而低于培養(yǎng)的閾值；另一方面由于沙門菌抵抗力不強(qiáng)，在采樣后到接種期間受環(huán)境各種因素如溫度、酸堿度的影響，造成不同程度的損傷。綜合以上各種因素的影響最終導(dǎo)致檢出率減低，結(jié)果出現(xiàn)假陰性。所以增菌意義重大。

使用增菌液結(jié)合培養(yǎng)基培養(yǎng)是檢測沙門菌感染最簡便、最快捷、最經(jīng)濟(jì)實(shí)惠的方法，且該方法檢測準(zhǔn)確率較高，大大減少了人力資源和實(shí)驗(yàn)材料的浪費(fèi)， 但在這次研究發(fā)現(xiàn)，反復(fù)出現(xiàn)了如銅綠假單胞菌、熒光假單胞菌、變形菌、摩氏摩根菌等假陽性菌，使用不同培養(yǎng)基最終檢出率也有一定的差異，不同菌型的細(xì)菌區(qū)分較為困難，在實(shí)際應(yīng)用中也沒有明確的標(biāo)準(zhǔn)規(guī)范，因?yàn)椴煌牟≡]有適合其生長的特定培養(yǎng)基。因此臨床在對沙門菌感染患者進(jìn)行檢測時，可使用兩種或多種培養(yǎng)基分別進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng)，以提高陽性檢出率，減少漏診或誤診。

綜上所述，本結(jié)果表明，SBG 增菌液增菌的實(shí)驗(yàn)組，與直接培養(yǎng)的對照組相比，檢出率明顯提高。通過增菌后，若使用單個培養(yǎng)基可考慮CAS 培養(yǎng)基，沙門菌培養(yǎng)檢出率和準(zhǔn)確性較高；若聯(lián)合兩種培養(yǎng)建可考慮CAS 培養(yǎng)基和SS 培養(yǎng)基。臨床操作時可根據(jù)實(shí)際情況選擇培養(yǎng)基類型。