李先強 江春雨 徐春艷 吉果 王甜

[摘 要]鹽類瀉藥的泄下機理分析是獸醫(yī)藥理學(xué)以及藥理學(xué)消化系統(tǒng)章節(jié)中重要的一項實驗教學(xué)。傳統(tǒng)教學(xué)實驗設(shè)計是在麻醉家兔腸管上分析腸管內(nèi)容物的容積變化，進而觀察鹽類瀉藥的瀉下現(xiàn)象。實驗極易受家兔腸道內(nèi)容物的顏色、數(shù)量、性狀等因素干擾，通常實驗效果并不明顯，并不能給予學(xué)生對瀉藥瀉下機理的視覺觀察。該文的研究將具有鮮艷顏色的葉綠素染料與鹽類瀉藥聯(lián)合用藥，對實驗用小鼠應(yīng)用灌胃給藥方式，繼而觀察小鼠腸內(nèi)容物的移動距離、腸體積變化和結(jié)腸中糞便情況。在染料的幫助下，鹽類瀉藥對小鼠的瀉下效果極其明顯，從而顯著增加了學(xué)生對鹽類瀉藥瀉下機理的理解與掌握，在節(jié)約實驗動物經(jīng)費的同時，更提高了實驗教學(xué)質(zhì)量。

[關(guān)鍵詞]鹽類瀉藥;瀉下機理;實驗改進;教學(xué)質(zhì)量

[中圖分類號] S859.7[文獻標(biāo)識碼] A[文章編號] 1674-9324（2020）44-0-03[收稿日期] 2020-05-07

一、引言

獸醫(yī)藥理學(xué)實驗是教學(xué)中必不可少的教學(xué)環(huán)節(jié)，是對繁雜理論知識掌握的重要教學(xué)活動，更是后續(xù)臨床獸醫(yī)相關(guān)專業(yè)課程學(xué)習(xí)質(zhì)量的重要保障。通過實驗課程的實踐操作，加深學(xué)生對理論知識的理解，提高本專業(yè)學(xué)生對獸醫(yī)藥理學(xué)的思考、操作、總結(jié)、反思和創(chuàng)新等基本素養(yǎng)能力。本科階段的教學(xué)實驗大多為驗證性實驗，根據(jù)理論課程的不同章節(jié)，設(shè)置相應(yīng)操作性實驗，在給予學(xué)生一定視覺體驗的基礎(chǔ)上感受藥物的體內(nèi)作用過程，進而幫助學(xué)生加深對復(fù)雜的藥物作用機理的理解和掌握。然而，藥物的體內(nèi)作用極易受多種因素干擾，學(xué)生常不能很好地觀察到預(yù)期的實驗結(jié)果，進而導(dǎo)致多數(shù)獸醫(yī)藥理學(xué)實驗效果并不理想，這嚴(yán)重制約著動物醫(yī)學(xué)專業(yè)學(xué)生對獸醫(yī)藥理學(xué)知識的掌握，更是提高獸醫(yī)藥理學(xué)教學(xué)質(zhì)量的主要障礙。因此，對傳統(tǒng)教學(xué)實驗進行改進以增加實驗結(jié)果的可觀察性具有重要意義[1]。

鹽類瀉藥的泄下機理分析是消化系統(tǒng)中重要的一項教學(xué)實驗，旨在加深學(xué)生對鹽類瀉藥作用機理的理解，從而在臨床上依據(jù)其作用機理及應(yīng)用范圍科學(xué)合理的選擇瀉藥。傳統(tǒng)實驗以健康家兔為研究對象，大多是在靜脈麻醉的基礎(chǔ)上剖開家兔腹腔，用棉線將十二指腸結(jié)扎成若干段，每段分別注射試驗用鹽類瀉藥以及對照用生理鹽水，然后將腸管放回腹腔，一定時間后觀察腸管內(nèi)容物變化情況。然而，這種實驗設(shè)計涉及的麻醉、腹部手術(shù)存在很大的不確定性，對實驗結(jié)果干擾較大，且局部給藥，耗時長、操作復(fù)雜、并且此給藥方法脫離獸醫(yī)臨床實踐。另外，就實驗結(jié)果而言，學(xué)生也不能很好的觀察到鹽類瀉藥的泄下作用現(xiàn)象。本研究通過將葉綠素染料和鹽類瀉藥采用聯(lián)合作用的方式灌胃給藥小鼠后，在染料顏色的巨大襯托作用下，觀察小鼠給藥后腸管變化和內(nèi)容物移動距離，進而把鹽類瀉藥作用機理簡單化并可視化。通過此次教學(xué)實驗設(shè)計的改進，旨在提高消化系統(tǒng)章節(jié)中鹽類瀉藥的泄下機理分析實驗教學(xué)效果，也為動物醫(yī)學(xué)其他專業(yè)課程中消化系統(tǒng)的教學(xué)實驗設(shè)計提出建議與思考。

二、探討傳統(tǒng)實驗設(shè)計

傳統(tǒng)的鹽類瀉藥在家兔體內(nèi)的瀉下機理分析實驗設(shè)計存在諸多的不利因素。

（一）家兔麻醉

家兔麻醉實驗多采用5%水合氯醛按3mL/kg體重靜脈給藥，這要求學(xué)生不僅要正確地進行靜脈注射操作保障全程無藥物泄漏，還要嚴(yán)控麻醉藥物的注射速度。實際上，僅僅就家兔麻醉，學(xué)生往往就需要花費大量寶貴的課堂時間，且每組常只有1只家兔，多數(shù)情況下是一人操作多人圍觀。另外，麻醉藥物作用存在較為明顯的個體差異，常導(dǎo)致學(xué)生按照規(guī)定劑量并不能很好地將家兔麻醉，甚至有些家兔因為對麻醉藥物的過敏直接死亡[2]，這些不利因素都極大影響了腹腔手術(shù)的操作。除此之外，機體處于深度麻醉狀態(tài)，家兔腸道對瀉藥的敏感性是否與清醒狀態(tài)保持一致？鹽類瀉藥瀉下現(xiàn)象不明顯是否與家兔機體處于麻醉狀態(tài)有關(guān)？這些都是教學(xué)實驗順利開展的不利因素。

（二）腹部手術(shù)

為了快速地將鹽類瀉藥注射到小腸中并直接觀察腸道內(nèi)容物情況，不得已進行手術(shù)，打開腹腔，找到小腸人為采用結(jié)扎方式分為三段，每段約為5—7cm，分別注射高濃度鹽類瀉藥溶液、生理鹽水、低濃度鹽類瀉藥溶液。然后再將腸道送回至家兔腹腔內(nèi)并保溫處理30—40分鐘時間后，觀察比較三段腸道內(nèi)容物變化情況，分析鹽類瀉藥的瀉下機理。首先，手術(shù)操作時間、腸道注射藥物時間、等待藥物作用時間再加上家兔的麻醉時間，等本次實驗現(xiàn)象出現(xiàn)時，實驗課時間已所剩無幾導(dǎo)致很難進行分析與討論。其次，每組1只家兔，在整個實驗過程中，需要團隊協(xié)作的機會很少，在實驗員的協(xié)助下，完全可由一名學(xué)生獨立完成，這大大減少其他組員的積極性，學(xué)生也缺少了動手的機會，缺乏團隊意識。另外，腸管局部給藥不僅耗時長、不利操作、還嚴(yán)重脫離了獸醫(yī)臨床實踐，無法保障理論聯(lián)系實踐，更是直接忽略了瀉藥在體內(nèi)ADME過程。家兔麻醉，體溫較低，如何做到保溫措施也是影響實驗結(jié)果的不利因素[3]。

（三）藥效評價

傳統(tǒng)實驗設(shè)計是在腸管注射瀉藥30～40分鐘后觀察家兔小腸內(nèi)容物變化情況，然而，這僅僅觀察了家兔不同腸段體積變化，即腸充盈情況。雖然能解釋鹽類瀉藥在腸內(nèi)形成了高滲環(huán)境，阻止腸內(nèi)水分被吸收和將組織中水分吸入腸管從而增加了腸液體體積的機理。然而，由于腸斷被棉線結(jié)扎，這始終無法讓學(xué)生觀察到糞便因瀉藥的下瀉作用而引起的后移現(xiàn)象。另外，因為腸斷內(nèi)液體體積變大就說明瀉藥的瀉下作用是否過于武斷，不能讓學(xué)生信服也就不能加深學(xué)生對瀉藥瀉下機理的掌握，也就失去了實驗教學(xué)的初衷。

三、分析改進的實驗設(shè)計

（一）實驗動物

在傳統(tǒng)實驗設(shè)計的基礎(chǔ)上，將實驗動物調(diào)整為6—8周齡雌性小鼠若干作為給藥對象。使每個實驗組所有同學(xué)都至少有1只小鼠進行實際操作，在調(diào)動學(xué)生的動手積極性的同時，還體現(xiàn)了動物福利中“3R原則”的替代原則。實驗動物數(shù)目的增加必然增大了實驗成功的概率，同學(xué)之間可以相互對照實驗結(jié)果，結(jié)合討論教學(xué)法，使學(xué)生相互比較分析可能出現(xiàn)的實驗結(jié)果與探討其中原因，進而加深對鹽類瀉藥瀉下實驗的作用機理。更重要的是由于實驗動物替換成了小鼠，也就不需要再進行麻醉和腹腔手術(shù)步驟了，這不僅明顯節(jié)省了大量寶貴的課堂時間，還排除了本教學(xué)實驗中大量的不利因素干擾，更使得實驗現(xiàn)象便于觀察實驗原理易于理解。

（二）實驗步驟

瀉藥選擇與傳統(tǒng)實驗保持一致，依次為陰性對照組、低劑量組、高劑量組，增設(shè)空白對照組。采用灌胃給藥，灌胃劑量為0.1—0.2mL/kg，為豐富可能出現(xiàn)的實驗結(jié)果，每個實驗組之間可適當(dāng)調(diào)增或調(diào)減鹽類瀉藥的濃度或給藥的劑量。經(jīng)口給藥與獸醫(yī)臨床實踐保持高度一致，藥物經(jīng)歷了大部分消化道，這對于學(xué)生理解并初步預(yù)測瀉藥的作用時間奠定了一定實踐基礎(chǔ)。由于小鼠未進行麻醉和手術(shù)處理，對保障鹽類瀉藥的敏感性以及給藥后癥狀的出現(xiàn)具有重要意義。通常給藥后20—30分鐘將小鼠處死并解剖腹腔后分離小腸觀察腸道內(nèi)容物變化情況，節(jié)省了時間也給開展實驗教學(xué)中的師生討論與總結(jié)環(huán)節(jié)提供了可行性。

（三）著色處理

本教學(xué)實驗設(shè)計改進最大的亮點就在于使用了葉綠素染料著色處理，這使得原本不易觀察的實驗結(jié)果直接化和可視化，如下圖所示，為部分學(xué)生的實驗結(jié)果。

給藥后小鼠腸管圖示

A.空白對照組;B.生理鹽水組;C.6.5%硫酸鎂溶液組;D.20%硫酸鎂溶液組

由上圖可知，小鼠腸道內(nèi)容物被明顯著色，對比A與B和C，生理鹽水組和低濃度鹽類瀉藥組并沒有加大腸道內(nèi)容物的下移距離，反觀對比A與D可以發(fā)現(xiàn)鹽類瀉藥大幅度提高了腸道內(nèi)容物的下移距離，得出高濃度鹽類瀉藥有瀉下作用，顯然比僅憑家兔腸內(nèi)液體體積變大推斷鹽類瀉藥的瀉下機理更具有可信性，應(yīng)該動物試驗驗證理論知識，這也是本科教學(xué)實驗的初衷所在。葉綠素易溶于、耐熱、耐酸且有較好的相容性，作為色素添加劑在臨床藥物制劑研發(fā)中調(diào)節(jié)服藥依從性以及保障調(diào)劑處方具有重要意義。本教學(xué)實驗中涉及的硫酸鎂或硫酸鈉溶液的pH值為5—7，且給藥方式為灌胃，因此本教研組選用的葉綠素作為實驗著色劑。

（四）評價藥效

對比傳統(tǒng)實驗設(shè)計僅是簡單分析家兔腸段的充盈情況，本次改進的實驗設(shè)計在鹽類瀉藥評價藥效上具有諸多優(yōu)勢。首先，直觀的對比了空白對照組與實驗組小鼠腸體積變化，分析了小腸的充盈情況。其次，應(yīng)用直尺科學(xué)測定內(nèi)容物的綠移距離，更具科學(xué)性、準(zhǔn)確性和較高的可信度。最后，本次改進實驗設(shè)計具有多重評價標(biāo)準(zhǔn)，在觀察直腸內(nèi)是否有成型糞便的同時，還能模擬藥物ADME過程后的藥理作用效果，不僅能觀察到硫酸鎂或硫酸鈉形成高滲溶液后，引起的腸充盈，還能很好的觀察到鹽類瀉藥加速食物像腸后端推進的促進下泄作用。

四、總結(jié)與展望

獸醫(yī)藥理學(xué)教學(xué)實驗過程中常出現(xiàn)藥物作用現(xiàn)象不明顯的情況。為使實驗現(xiàn)象更明顯、激發(fā)學(xué)生積極性、主動性、提高學(xué)生操作能力，本教學(xué)組通過改變實驗對象，采用葉綠素著色處理結(jié)合體內(nèi)實驗方法模擬口服給藥，觀察鹽類瀉藥促進食物向大腸移動的情況，使腸道充盈現(xiàn)象更易于觀察，提升了藥效評價標(biāo)準(zhǔn)。本教學(xué)實驗改進明顯活躍了課堂氣氛，加強了學(xué)生動手實驗的主動性，同時也激發(fā)了學(xué)生對實驗的思考與討論熱情，在學(xué)生更好理解容積性瀉藥作用機理的情況下預(yù)期可提高此項教學(xué)實驗的教學(xué)質(zhì)量和教學(xué)效果。

實驗教學(xué)是培養(yǎng)動物醫(yī)學(xué)專業(yè)人才獸醫(yī)學(xué)素養(yǎng)過程中的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，如何改進傳統(tǒng)實驗教學(xué)的方式方法以適應(yīng)新時代人才培養(yǎng)目標(biāo)的需要是各大專院校亟待解決的重要課題。新形勢下，社會要求動物醫(yī)學(xué)專業(yè)學(xué)生具有更高的實踐能力，這也給獸醫(yī)藥理學(xué)實驗教學(xué)提出更高的要求，如何在有限的實驗教學(xué)課時內(nèi)使學(xué)生積極參與，主動思考討論，切實加強對藥理學(xué)理論知識的理解與掌握具有重要意義。為此，獸醫(yī)藥理學(xué)相關(guān)教學(xué)組應(yīng)加大對傳統(tǒng)實驗教學(xué)內(nèi)容的改進力度，積極參與傳統(tǒng)藥理學(xué)實驗材料、方法、設(shè)計等的改進，注重理論與實踐相互驗證與鞏固的基礎(chǔ)上增進知識點的前后聯(lián)系和橫向聯(lián)系，注重培養(yǎng)學(xué)生創(chuàng)新意識、創(chuàng)新精神與創(chuàng)新能力，重視獸醫(yī)藥理學(xué)知識轉(zhuǎn)化能力的提高。

參考文獻

[1]李先強，王甜，徐春艷，等.執(zhí)業(yè)獸醫(yī)師制度下獸醫(yī)藥理學(xué)教學(xué)方法和教學(xué)手段的改革與創(chuàng)新[J].教育現(xiàn)代化，2019，12（101）： 65-67.

[2]劉為萍.0.7%戊巴比妥鈉在家兔實驗手術(shù)麻醉中追加劑量的探討[J].中國醫(yī)療前沿，2013，8（01）：17-18.

[3]李正，董秀珍，尤富生，等.電阻抗成像監(jiān)護家兔腹內(nèi)出血的實驗研究[J].生物醫(yī)學(xué)工程與臨床，2006，10（01）：11-14.