于紅博 王海波

1.吉林省吉林市中心醫(yī)院檢驗(yàn)科，吉林吉林 132000；2.吉林醫(yī)藥學(xué)院附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科，吉林吉林 132013

慢性支氣管炎是氣管、支氣管黏膜及周圍組織的一種慢性非特異性炎癥，是我國(guó)老年人群的一種常見病和多發(fā)病，據(jù)相關(guān)醫(yī)學(xué)統(tǒng)計(jì)，發(fā)病率約為15%[1-3]?；颊卟『螅跗诎Y狀僅表現(xiàn)為咳痰、咳嗽和喘息等，隨著病情的進(jìn)展，后期可導(dǎo)致肺氣腫等多種并發(fā)癥，甚至引起呼吸衰竭和窒息等，直接危及患者生命[4-5]。因此慢性支氣管炎患者的早期診斷，是改善和提高患者康復(fù)質(zhì)量的重要前提。近年來，隨著檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)的發(fā)展，抗中性粒細(xì)胞胞漿抗體（ANCA）的檢測(cè)逐步成為慢性支氣管炎患者早期診斷的一個(gè)新的研究方向。常規(guī)的檢驗(yàn)方法包括線性免疫分析法和間接免疫熒光法等，為了進(jìn)一步探討不同檢測(cè)方法的準(zhǔn)確性，我院檢驗(yàn)科根據(jù)慢性支氣管炎患者患病程度的不同，分為輕癥組和重癥組兩組，分別采取線性免疫分析法、間接免疫熒光法和聯(lián)合檢測(cè)的方法加以檢測(cè)。現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇我院2019年9月～2020年1月檢驗(yàn)科收集的281份血清樣本作為研究對(duì)象。男151例，女130例，年齡19～76歲，平均（51.1±6.2）歲。69例為確診的慢性支氣管炎患者，其中39例為輕癥支氣管炎患者，30例為重癥慢性支氣管炎患者。其余212例為體檢中心體檢的健康人群。慢性支氣管炎的診斷標(biāo)準(zhǔn)參照符合中華醫(yī)學(xué)會(huì)呼吸學(xué)分會(huì)制定的《慢性阻塞性肺炎診治指南》中的相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)。另外根據(jù)患者支氣管炎患病程度的不同，將患者血氧分壓檢測(cè)結(jié)果和動(dòng)脈血二氧化碳分壓檢測(cè)結(jié)果分別≥60mm Hg和≤55mm Hg定義為輕癥患者，將檢測(cè)結(jié)果分別＜60mm Hg和＞55mm Hg的患者定義為重癥患者。

1.2 檢驗(yàn)方法

研究對(duì)象均清晨空腹采血5mL，分離血清后，放入-20℃冰箱中保存。然后分別采取線性免疫分析法、間接免疫熒光法和聯(lián)合檢驗(yàn)的方法檢測(cè)ANCA。在線性免疫分析法檢測(cè)方面，試劑盒購(gòu)自德國(guó)IMREC公司。實(shí)驗(yàn)步驟為檢驗(yàn)醫(yī)師首先將核抗原印跡于硝化纖維膜上，將非特異反應(yīng)區(qū)封閉，切割纖維膜為膜條。結(jié)合膜條上的抗原與特異性抗體，然后剔除未結(jié)合蛋白。加入辣根過氧化物酶標(biāo)記的抗人IgG二抗與之結(jié)合，加入TMB底物，結(jié)合抗體表現(xiàn)藍(lán)色的免疫復(fù)合物。ANCA陽(yáng)性的判定標(biāo)準(zhǔn)為：實(shí)驗(yàn)完成后，將膜條與試劑盒配套的Cut-Off、PR3、MPO三條帶進(jìn)行顏色比較。若顏色比Cut-Off同色或偏深，則判斷ANCA為陽(yáng)性，反之判斷為陰性[6]；在間接免疫熒光法檢測(cè)方面，試劑盒購(gòu)自歐盟公司。檢驗(yàn)師先將生物載片從試劑盒中取出。用磷酸緩沖鹽溶液1∶100稀釋血清和抗體。然后將加樣板置于泡沫板上，滴加稀釋后的血清樣本25μL于加樣板的反應(yīng)區(qū)中，開始第一次溫育，時(shí)間為30min。溫育完成后，用磷酸鹽緩沖液沖洗載片1s后，浸入脫色缸浸洗5min。加異硫氰酸熒光素標(biāo)記羊抗人IgG，再次溫育，用磷酸鹽緩沖液沖洗和脫色缸浸洗，最后使用蓋玻片將樣本封片，實(shí)驗(yàn)操作結(jié)束。在熒光顯微鏡下判斷結(jié)果。ANCA的陰性判斷標(biāo)準(zhǔn)為中性粒細(xì)胞無(wú)特異性熒光。胞漿型抗中性粒細(xì)胞抗體（cANCA）陽(yáng)性的判定標(biāo)準(zhǔn)為整個(gè)中性粒細(xì)胞胞漿中，均勻分布顆粒型熒光，細(xì)胞核未顯示熒光。核周型抗中性粒細(xì)胞抗體（pANCA）陽(yáng)性的判定標(biāo)準(zhǔn)為在中性粒細(xì)胞核周呈現(xiàn)出外觀為帶狀且光滑的熒光。在聯(lián)合檢驗(yàn)方面，樣本同時(shí)采用線性免疫分析法和間接免疫熒光法檢驗(yàn)，其中任何一種方法檢驗(yàn)結(jié)果為陽(yáng)性，則判斷結(jié)果為陽(yáng)性。

1.3 觀察指標(biāo)

（1）不同檢測(cè)方法檢查患者ANCA陽(yáng)性率結(jié)果比較；（2）不同檢測(cè)方法檢測(cè)結(jié)果的敏感度比較。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS22.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)本研究數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。計(jì)數(shù)資料以[n（%）]表示，行χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各種檢測(cè)方法檢測(cè)ANCA的陽(yáng)性率結(jié)果比較

輕癥患者ANCA陽(yáng)性率結(jié)果，見表1，三種檢測(cè)方法總陽(yáng)性率比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；重癥患者ANCA陽(yáng)性率結(jié)果見表2，三種檢測(cè)方法總陽(yáng)性率比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

2.2 不同檢測(cè)方法的敏感度比較

輕癥患者和重癥患者檢測(cè)結(jié)果的敏感度比較見表3。對(duì)于輕癥患者，聯(lián)合檢驗(yàn)的敏感度高于線性免疫分析法和間接免疫熒光法，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；對(duì)于重癥患者，聯(lián)合檢驗(yàn)的敏感度高于線性免疫分析法，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜ 0.05）。

表1 輕癥患者ANCA陽(yáng)性率檢測(cè)結(jié)果[n（%）]

表2 重癥患者ANCA陽(yáng)性率檢測(cè)結(jié)果[n（%）]

表3 不同檢測(cè)多法的敏感度比較

3 討論

慢性支氣管炎是老年患者最為常見的一種疾病，據(jù)相關(guān)醫(yī)學(xué)統(tǒng)計(jì)，發(fā)病率約為15%，而且隨著我國(guó)老齡化社會(huì)的到來，慢性支氣管炎患者的數(shù)量將會(huì)進(jìn)一步增長(zhǎng)[7-9]。慢性支氣管炎的致病因素較為復(fù)雜，如吸煙、空氣污染和過敏等，均是主要的致病因素。如在吸煙方面，香煙的煙霧中包含尼古丁和焦油等多種有害物質(zhì)，當(dāng)人體主動(dòng)或被動(dòng)吸入后，會(huì)對(duì)支氣管黏膜上皮造成不同程度的損害；在空氣污染方面，其原理與香煙類似，都是由于毒害物質(zhì)的吸入而損傷支氣管；在過敏方面，患者內(nèi)源或外源抗體可引起變態(tài)反應(yīng)，導(dǎo)致支氣管痙攣或產(chǎn)生炎癥等[10-13]?；颊甙l(fā)病后，典型的癥狀表現(xiàn)如咳嗽和咳痰等，持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)，一般在3個(gè)月以上，且容易反復(fù)。若干預(yù)方法不當(dāng)，后期還可出現(xiàn)支氣管擴(kuò)張癥和肺氣腫等并發(fā)癥，甚至導(dǎo)致窒息等，從而嚴(yán)重威脅患者的健康。

在慢性支氣管炎患者的治療方面，已經(jīng)形成了較為系統(tǒng)且完善的治療體系，主要是控制感染、鎮(zhèn)咳祛痰和平喘等[14]。但由于患者病程較長(zhǎng)，越早對(duì)患者加以治療干預(yù)，患者后期的預(yù)后越好。因此慢性支氣管炎患者的早期診斷工作，成為檢驗(yàn)科等科室研究的核心問題之一。

ANCA是指與中性粒細(xì)胞及單核細(xì)胞胞漿中溶酶體酶發(fā)生反應(yīng)的抗體。當(dāng)中性粒細(xì)胞受抗原刺激后，胞漿中的α-顆粒釋放蛋白酶-3、髓過氧化物酶物質(zhì)及白細(xì)胞抗原生成，刺激機(jī)體而產(chǎn)生ANCA。近年來，隨著檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)的發(fā)展，經(jīng)臨床醫(yī)學(xué)證實(shí)ANCA的上升，會(huì)激活人體內(nèi)的NF-κB炎癥性信號(hào)通路，從而導(dǎo)致支氣管炎的發(fā)生及加重。如劉寧寧等[15]在臨床工作中發(fā)現(xiàn)，慢性支氣管炎患者ANCA檢測(cè)數(shù)值明顯高于健康人群等。

在相關(guān)研究的背景下，ANCA的相關(guān)檢驗(yàn)工作，逐步成為各醫(yī)院檢驗(yàn)科工作的重點(diǎn)?，F(xiàn)階段主要的檢測(cè)方法包括線性免疫分析法和間接免疫熒光法等，為了進(jìn)一步探討ANCA與慢性支氣管炎之間的關(guān)系，我院首先將慢性支氣管炎患者分為輕癥組和重癥組，并采取以上兩種方法獨(dú)立檢驗(yàn)和聯(lián)合檢驗(yàn)的方法，分別加以研究。

在研究結(jié)果方面，首先對(duì)于輕癥慢性支氣管炎患者，發(fā)現(xiàn)線性免疫分析法和間接免疫熒光法兩種方法檢測(cè)結(jié)果無(wú)差異，但采取聯(lián)合檢驗(yàn)后，檢驗(yàn)結(jié)果的敏感度優(yōu)于以上兩種檢測(cè)方法，說明聯(lián)合檢驗(yàn)的方法，對(duì)慢性支氣管炎患者可以起到良好的早期診斷的效果；對(duì)于重癥慢性支氣管炎患者，同樣未見線性免疫分析法和間接免疫熒光法兩種方法的區(qū)別，采取聯(lián)合檢驗(yàn)后，敏感度高于線性免疫分析法，其他各項(xiàng)結(jié)果比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。提示聯(lián)合檢驗(yàn)方法效果優(yōu)于線性免疫分析法。

綜上所述，采取線性免疫分析法和間接免疫熒光法聯(lián)合檢驗(yàn)的方法，對(duì)于早期慢性支氣管炎患者具有較為理想的診斷效果，建議對(duì)疑似患者盡早檢驗(yàn)其ANCA水平，以盡早發(fā)現(xiàn)和治療。而對(duì)于重癥患者，采取間接免疫熒光法和聯(lián)合檢驗(yàn)的方法，可以達(dá)到基本相同的檢驗(yàn)效果，盡量不選擇線性免疫分析法進(jìn)行檢驗(yàn)。