喬 璐 栗 磊 宋夢(mèng)嬌 侯益民 李雪菊

1.河南中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，河南鄭州 450046；2.河南省開(kāi)封市中心醫(yī)院，河南開(kāi)封 475000；3.河南省科高中標(biāo)檢測(cè)技術(shù)有限公司，河南鄭州 450000

石膽草[Corallodiscus flabellatus（Craib） Burtt]苦苣苔科（Gesneriaceae）珊瑚苣苔屬植物，又名石花、石蝴蝶、鎮(zhèn)心草、巖指甲等，主要分布于中國(guó)云南、四川、西藏等地區(qū)，具有活血解毒、消腫止痛、清化濕熱的功效[1-3]。在河南民間曾用于感冒初期上呼吸道感染及治療婦女月經(jīng)不調(diào)、赤白帶下等癥狀。目前關(guān)于石膽草的化學(xué)成分研究，主要是苯乙醇苷、黃酮碳苷、黃酮氧苷等極性較大的成分[4-10]，而其脂溶性成分的研究，目前尚未有文獻(xiàn)報(bào)道。本研究采用GC-MS聯(lián)用技術(shù)對(duì)石膽草脂溶性成分進(jìn)行研究與分析，以期為石膽草的后續(xù)研究和應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 儀器與試劑

Agilent 7890/7000B三重串聯(lián)四級(jí)桿氣質(zhì)聯(lián)用儀（美國(guó)安捷倫公司）；BT-25S型十萬(wàn)分之一電子天平（德國(guó)賽多利斯公司）；AB204-N型萬(wàn)分之一電子天平（德國(guó)梅特勒公司）；索氏提取器（南京金正玻璃儀器廠）；調(diào)溫試電熱套（北京中興偉業(yè)儀器有限公司）；N1100VWD型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器（上海愛(ài)朗儀器有限公司）。分析純石油醚（沸程60～90℃）、甲醇、正己烷無(wú)水硫酸鈉、三氟化硼均為分析純。

1.2 藥材

苦苣苔科（Gesneriaceae）珊瑚芭苔屬（Corallodiscus）植物石膽草 [Corallodiscus flabellatus（Craib） Burtt]的全草，晾干，待用。

2 方法

2.1 樣品制備

取1.2項(xiàng)下的樣品，粉碎成粗粉備用。稱(chēng)取各樣品10g，以石油醚為溶劑，80℃索氏提取6h，提取液減壓濃縮，得提取物，石膽草為淺黃色油狀物，石膽草莖葉為淺綠色油狀提取物。加入0.5mmol/L氫氧化鉀甲醇溶液，60℃恒溫水浴30min，冷卻后加入三氟化硼甲醇溶液5mL，于60℃水浴，加熱回流5min，冷卻，加正己烷和飽和氯化鈉水溶液各2mL，取上清液加無(wú)水Na2SO4干燥，取樣分析。

2.2 GC-MS分析

2.2.1 氣相色譜條件 色譜柱為HP-FFAP型石英毛細(xì)管柱（30mm×0.25mm，0.25μm），載氣為高純氦氣（99.999%），氦氣流速1.0mL/min；進(jìn)樣口溫度為240℃；分流；升溫程序?yàn)椋?0℃保持2min，按10℃/min升溫至190℃，保持 2min，以2℃/min升溫至230℃，保持15min，氣化室溫度280℃，接口溫度240℃。

2.2.2 質(zhì)譜條件 離子源：電子轟擊源，電子能量70eV；掃描范圍m/z30～600amu，離子源溫度230℃，溶劑延遲：4.5min，GC-MS接口溫度240℃。

2.3 數(shù)據(jù)處理

用NIST98系統(tǒng)譜庫(kù)自動(dòng)檢索組分的質(zhì)譜，結(jié)合有關(guān)文獻(xiàn)，分別與八峰索引、EPA/NIH相對(duì)照，匹配度均在80%以上。化合物的定量使用HewlettPackard軟件按峰面積歸一化法計(jì)算相對(duì)含量。

2.4 DPPH法測(cè)定抗氧化能力

采用清除自由基的方法測(cè)定脂溶性成分的抗氧化能力[11]：DPPH自由基清除活性測(cè)定采用96孔板法，不同濃度的樣品液及維生素C各取100μL放置于96孔板中，再添加100μL DPPH自由基溶液，在室溫中反應(yīng)30min后采用酶標(biāo)儀測(cè)定其在517nm處的吸光度值。清除率的計(jì)算公式為：

清除率 =[（A0-Ai）/A0]×100%

其中，A0表示空白組吸光度，Ai為樣品組的吸光度，所有測(cè)定操作重復(fù)3次，取平均值。

3 結(jié)果與分析

3.1 石膽草脂溶性成分種類(lèi)比較

依照上述條件對(duì)石膽草及其莖葉的脂溶性成分進(jìn)行分析，共檢測(cè)出63個(gè)色譜峰，得出的總離子流圖見(jiàn)圖1，總離子流圖中的各峰經(jīng)質(zhì)譜掃描后得到質(zhì)譜圖，對(duì)質(zhì)譜圖和相關(guān)資料進(jìn)行分析鑒定，共鑒定了47個(gè)化合物，包括脂肪酸類(lèi)、萜類(lèi)、烷烴類(lèi)、醇類(lèi)、酮類(lèi)、甲酯等，占脂溶性成分的84.34%。各脂溶性成分的分子式、名稱(chēng)、分子量及計(jì)算得出的相對(duì)百分含量，見(jiàn)表1。

綜上表所述，石膽草脂溶性成分主要是脂肪酸，其含量占石膽草脂溶性成分的61.47%，其中，不飽和脂肪酸為17.31%，飽和脂肪酸為44.16%。在石膽草脂溶性成分中，含量較高的是棕櫚酸甲酯（11.72%）、亞油酸甲酯（10.93%）、11-硬脂酸甲酯（7.62%）、反式角鯊烯（6.72%）、山崳酸甲酯（5.57%）、木蠟酸甲酯（3.84%）、亞麻酸甲酯（3.73%）等。

3.2 石膽草脂溶性成分抗氧化活性研究

清除DPPH自由基能力的試驗(yàn)結(jié)果顯示，石膽草脂溶性成分對(duì)DPPH有一定的清除作用，其對(duì)DPPH自由基的半數(shù)清除率IC50分別為0.54mg/mL，見(jiàn)表2。

從石膽草脂溶性成分中，共鑒定出47個(gè)化合物，主要成分為脂肪酸類(lèi)化合物?；钚越Y(jié)果顯示，其脂溶性成分具有一定的抗氧化活性。

4 討論

圖1 石膽草脂溶性成分總離子流色譜圖

氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用(GC-MS)是一種結(jié)合氣相色譜和質(zhì)譜的特性，在試樣中鑒別不同物質(zhì)的方法。氣相色譜具有很強(qiáng)的分離能力，質(zhì)譜具有獨(dú)特的鑒定能力且靈敏度極高，可以在無(wú)標(biāo)準(zhǔn)品作對(duì)照的情況下，對(duì)一些脂溶性未知成分進(jìn)行分析鑒定[12]。

表1 石膽草脂溶性成分GC-MS分析

表2 石膽草脂溶性成分對(duì)DPPH自由基清除能力

目前關(guān)于石膽草的化學(xué)成分的研究主要是針對(duì)苯乙醇苷、黃酮碳苷、黃酮氧苷等極性較大的成分，本研究是以石膽草中極性較小的未知脂溶性成分為研究對(duì)象，采用索氏提取法對(duì)石膽草脂溶性成分進(jìn)行提取，運(yùn)用GC-MS法對(duì)石膽草的脂溶性成分進(jìn)行研究，利用計(jì)算機(jī)檢索NIST98譜庫(kù)，對(duì)檢測(cè)到的63個(gè)化合物進(jìn)行分析，結(jié)合人工譜圖解析鑒定出47個(gè)化合物，占總脂溶性成分的84.34%，其中脂肪酸含量占石膽草脂溶性成分的61.47%。在石膽草脂溶性成分中，含量較高的是棕櫚酸甲酯（11.72%）、亞油酸甲酯（10.93%）、11- 硬脂酸甲酯（7.62%）、反式角鯊烯（6.72%）、山崳酸甲酯（5.57%）、木蠟酸甲酯（3.84%）、亞麻酸甲酯（3.73%）。并對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果中棕櫚酸甲酯、亞油酸甲酯、11- 硬脂酸甲酯、反式角鯊烯、山崳酸甲酯、木蠟酸甲酯、亞麻酸甲酯作抗氧化活性分析。

現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究表明，脂肪酸是人體脂肪和類(lèi)脂的基本構(gòu)建因子，是細(xì)胞膜磷脂的重要組分，直接參與細(xì)胞膜的組成及蛋白質(zhì)與膜內(nèi)受體調(diào)控，是重要的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)之一[13]。反式角鯊烯在石膽草中相對(duì)含量為6.72%，是一種較強(qiáng)的天然抗氧化劑，能調(diào)節(jié)動(dòng)物體內(nèi)膽固醇代謝，具有防癌及抗癌、抗輻射、解毒作用，在食品添加劑和藥物緩釋劑方面得到廣泛應(yīng)用[14]。山崳酸主要用于防水劑、殺蟲(chóng)劑、助溶劑、化妝品添加劑的原料及山崳酸銀鹽作熱顯影性感光材料等[15]。研究結(jié)果豐富了石膽草脂溶性成分的物質(zhì)基礎(chǔ)，確定石膽草脂溶性成分含有一些具有藥用價(jià)值和可作為化工原料的成分，這為石膽草藥用價(jià)值的進(jìn)一步開(kāi)發(fā)利用提供科學(xué)的參考依據(jù)。