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        鈴鐺刺花提取物增強(qiáng)機(jī)體免疫力及運(yùn)動抗疲勞作用研究

        2020-11-04 09:43:38
        文體用品與科技 2020年21期
        關(guān)鍵詞:鈴鐺糖原灌胃

        (寧波職業(yè)技術(shù)學(xué)院 浙江 寧波 315800)

        鈴鐺刺花是一種學(xué)名為“鹽豆木”的花,主要分布在我國西北及新疆地區(qū)鹽堿荒漠地的一種灌木,該植物喜光、耐鹽堿、耐干旱,是良好的固沙、改良鹽堿地的樹種。在中國西北部長期用作高產(chǎn)牧草,其花和嫩葉可供食用,味道鮮美,是當(dāng)?shù)厝讼矏鄣拇杭臼巢模哂袠O高的營養(yǎng)價值。研究鈴鐺刺花提取物對增強(qiáng)機(jī)體免疫力及運(yùn)動抗疲勞作用,可增強(qiáng)人體對疾病的抵抗力。從天然產(chǎn)物中篩選抗疲勞和增強(qiáng)機(jī)體免疫作用的有效成分、研究其作用機(jī)制具有重要現(xiàn)實(shí)意義。

        1、實(shí)驗(yàn)材料

        1.1、實(shí)驗(yàn)動物

        昆明種小鼠SPF級,由新疆醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心提供,動物合格證號:SCXK(新)2011-0004。

        1.2、實(shí)驗(yàn)試劑

        鈴鐺刺花提取物(浸膏),由昌吉職業(yè)技術(shù)學(xué)院藥學(xué)院提供。小鼠血清尿素氮檢測試劑盒,小鼠全血乳酸檢測試劑盒,小鼠肝糖原含量檢測試劑盒,均為南京建成生物工程研究所提供。

        1.3、實(shí)驗(yàn)器材

        多級閃蒸鍋JMF-320-A;中藥多功能提取罐。

        DC-TQ-30;旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器RE-52;循環(huán)水式多用真空泵SHB-Ⅲ;Sartorius CP225D型電子天平;小鼠灌胃器;爬桿器具:自制,直徑1cm,長25cm的玻璃棒,砂紙打磨后上端固定在木板上制成爬桿架,下端懸空,玻璃棒下端距離地面30cm,地面鋪上2cm左右的海綿以防止小鼠落下摔傷。游泳箱:根據(jù)《保健食品檢驗(yàn)與評價技術(shù)規(guī)范》要求自制。紫外可見分光光度計,北京普析通用儀器有限責(zé)任公司。電熱恒溫水槽,上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司。全自動生化分析儀,日本 Beckman Coul-ter K·K。

        2、實(shí)驗(yàn)方法

        2.1、實(shí)驗(yàn)條件

        實(shí)驗(yàn)條件設(shè)施齊全,將邀請運(yùn)動醫(yī)學(xué)及化學(xué)實(shí)驗(yàn)方面的老師進(jìn)行技術(shù)指導(dǎo),利用學(xué)員化工學(xué)院基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)室平臺進(jìn)行實(shí)驗(yàn),為確保本次課題能順利的完成作出基本保障。

        2.2、鈴鐺刺花提取液的制備

        鈴鐺刺花提取物(浸膏),氣味清香,粘稠的棕褐色流浸膏,由昌吉職業(yè)技術(shù)學(xué)院藥學(xué)院提供。樣品用蒸餾水稀釋成最大濃度2g·mL-1(以不堵塞灌胃針為標(biāo)準(zhǔn)),置4℃冰箱備用。

        2.3、鈴鐺刺花提取液抗疲勞作用

        (1)爬桿實(shí)驗(yàn)。

        取小鼠40只,雌雄各半,適應(yīng)性喂養(yǎng)3天,隨機(jī)分為4組,空白組,鈴鐺刺花高、中、低劑量組(4、2和1)g·kg-1,每組 10只。鈴鐺刺花各劑量組分別灌胃鈴鐺刺花提取液,1日1次,1次0.2ml/10g小鼠,空白組同樣每日灌胃0.2ml/10g小鼠的生理鹽水,連續(xù)10天。試驗(yàn)前訓(xùn)練小鼠兩天,使其學(xué)會爬桿。末次給予受試物30min后,將小鼠放在長25cm、直徑1cm、光滑的有機(jī)玻璃竿上,使肌肉處于靜力緊張狀態(tài),記錄小鼠由于肌肉疲勞從玻璃棒上跌落下來的時間,第3次跌落時終止實(shí)驗(yàn),累計3次的時間作為爬桿時間。延長率=(給藥組跌落時間-空白對照組跌落時間/空白對照組跌落時間)×100%。

        (2)游泳實(shí)驗(yàn)。

        小鼠于末次灌胃后30min,將尾根部負(fù)荷5%體質(zhì)量鉛塊的小鼠投入自制水槽中游泳,水深30cm,水溫30℃,尾部負(fù)重沙袋,同時開始計時,記錄小鼠游泳開始至頭部沒入水面以下8s不再上浮的時間,作為小鼠負(fù)重游泳時間。

        2.4、小鼠游泳后血清尿素氮、血乳酸含量測定

        連續(xù)灌胃鈴鐺刺花提取液10天,于末次給藥30min后(禁食不禁水),將小鼠放入水深30cm,水溫30℃水槽中,不負(fù)重游泳90min,休息60min后撥眼球取血0.5mL,加肝素抗凝后,以3000r·min-1離心15min,取血清,按照試劑盒的方法測定血清中的乳酸和尿素氮含量。

        2.5、小鼠游泳后肝糖原含量測定

        連續(xù)灌胃鈴鐺刺花提取液10天,于末次給藥30min后(禁食不禁水),置小鼠放入水深30cm,水溫30℃水槽中,不負(fù)重游泳90min,游泳后立即處死,小鼠肝臟用生理鹽水漂洗,再用濾紙吸干,稱重,然后加入堿液破壞組織保留糖原,按樣本重量(9mg)∶堿液體積(μL)=1:3,一起加入試管中,用冰箱保鮮膜將管口扎起,以防水分蒸發(fā),在膜上用針頭扎一小孔,以便氣體熱脹冷縮,沸水浴煮20min,流水冷卻。按試劑盒要求將糖原水解液進(jìn)一步制備成糖原檢測液,測定肝糖原含量。

        2.6、統(tǒng)計分析方法

        采用SPSS 16.0統(tǒng)計軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計分析,計量資料以(x±s)表示,組間比較采用單因素方差分析,多重比較采用LSD和Dunnett比較。兩組比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)(Independent-Sample T Test)。

        3、實(shí)驗(yàn)結(jié)果

        3.1、鈴鐺刺花提取液最大耐受量計算

        鈴鐺刺花提取液每人每日推薦量為12g,相當(dāng)于0.2g.kg-1(成人體重以60kg計),鈴鐺刺花流浸膏濃度為2g·ml-1生藥,灌胃體積為0.02mL.g-1BW,每天灌胃3次,則計算出小鼠的最大耐受劑量MTD為:120g生藥/kg小鼠,根據(jù)計算公式得出小鼠MTD相當(dāng)于人用量的倍數(shù)為(小鼠體重以20g計):

        鈴鐺刺花急性毒性在測不出LD 50的情況下,進(jìn)行了最大耐受量研究,每天給藥3次的最大給藥劑量,體重均有不同程度的增長,實(shí)驗(yàn)結(jié)束后對小鼠進(jìn)行大體病理學(xué)觀察,未發(fā)現(xiàn)有明顯病理改變,全程實(shí)驗(yàn)動物無死亡,鈴鐺刺花提取液對小鼠的MTD為120g生藥/kg小鼠,相當(dāng)于成人臨床日用量的300倍,結(jié)果證明動物完全能耐受,未出現(xiàn)任何毒性反應(yīng),表明鈴鐺刺花食用是安全的。

        3.2、鈴鐺刺花提取液對耐力時間的影響

        在爬桿試驗(yàn)當(dāng)中鈴鐺刺花高和中劑量組小鼠的爬桿時間與空白對照組相比較,具有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.01),分別使小鼠跌落的時間延長了46.70%和47.53%,低劑量組雖無統(tǒng)計學(xué)意義,但也使小鼠的跌落時間延長了13.26%;在抗疲勞游泳實(shí)驗(yàn)中:鈴鐺刺花高和中劑量組小鼠的游泳時間與空白對照組相比較,具有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.01),但無劑量依賴性趨勢,但此實(shí)驗(yàn)結(jié)果充分說明該藥能提高抗疲勞的能力(見表1)。

        表1 鈴鐺刺花提取液對小鼠負(fù)重游泳時間的影響(x±s)

        3.3、鈴鐺刺花提取液疲勞代謝物指標(biāo)的影響

        與正常對照組比較,各給藥組運(yùn)動后小鼠的血乳酸含量均有降低,其中中劑量組和高劑量組與對照組比較具有顯著性差異(P<0.01);與正常對照組比較,各給藥組運(yùn)動后小鼠的血清尿素氮有降低趨勢,但無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。各給藥組運(yùn)動后小鼠的肝糖原含量均高于正常對照組,其中中劑量組和高劑量組與對照組比較具有顯著性差異(P<0.01);表明鈴鐺刺提取物可以降低實(shí)驗(yàn)小鼠運(yùn)動后的乳酸和尿素氮的含量,提高實(shí)驗(yàn)小鼠運(yùn)動后肝糖原的含量(見表2)。

        表2 鈴鐺刺花提取液對運(yùn)動后小鼠疲勞代謝物指標(biāo)的影響(x±s)

        4、討論

        本試驗(yàn)設(shè)定的鈴鐺刺花提取物每人每日推薦量為12g,相當(dāng)于0.2g·kg-1(成人體重以60kg計);最大給藥量試驗(yàn)中鈴鐺刺提取物,濃度為 2g·m-1,灌胃體積為 0.02ml·g-1,每天灌胃 3 次,則計算出小鼠的藥物用量為:120g@kg-1,MTD相當(dāng)于成人臨床日用量的300倍,按體重計算,小鼠1天最大給藥量相當(dāng)于成人臨床日用劑量的100倍以上則較為安全,表明鈴鐺刺提取物毒性低,動物完全能耐受,未出現(xiàn)任何毒性反應(yīng)?!侗=∈称窓z驗(yàn)與評價技術(shù)規(guī)范》中對緩解體力疲勞功能的判定,認(rèn)為負(fù)重游泳實(shí)驗(yàn)結(jié)果陽性,血清乳酸、尿素、肝糖元/肌糖元三項(xiàng)生化指標(biāo)中任二項(xiàng)指標(biāo)陽性,可判定該受試樣品具有緩解體力疲勞的作用。本實(shí)驗(yàn)通過小鼠給藥10天后,與空白組比較,鈴鐺刺花提取液中、高劑量均能明顯延長小鼠的游泳和爬竿時間,3個劑量組均能降低運(yùn)動后小鼠血乳酸含量,其中中劑量組(2g·kg-1)和高劑量組(4g·kg-1)與對照組的差異顯著;同時3個劑量組均能提高運(yùn)動后小鼠肝糖原的含量,其中中劑量組(2g·kg-1)和高劑量組(4g·kg-1)與對照組的差異顯著;與正常對照組比較,各給藥組運(yùn)動后小鼠的血清尿素氮有降低趨勢,但無統(tǒng)計學(xué)意義。表明鈴鐺刺花提取液可以顯著緩解運(yùn)動后小鼠的疲勞。

        綜上所述,鈴鐺刺花是一種安全的、有抗疲勞作用的植物,鈴鐺刺花的提取物對提高機(jī)體免疫力及運(yùn)動抗疲勞的作用。

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