王守梅，周 睿，朱詩琦，朱美琪，方 媛，張樹輝

在日常病理制片過程中，病理工作人員有時會不戴手套進(jìn)行操作：把載玻片放入玻片打碼機(jī)中，把打印好的玻片擺放整齊，拿著載玻片將漂片機(jī)中的蠟片撈起等，使載玻片上沾上操作人員的指紋，使其與切片的病理組織一起進(jìn)行脫蠟和染色，為觀察和分析指紋經(jīng)HE染色后的形態(tài)和數(shù)量，本科室進(jìn)行了以下實驗。

1 材料與方法

1.1 材料隨機(jī)選取上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬岳陽中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院病理科3名技術(shù)人員分別在潔凈的載玻片上留下指紋，每人操作30張載玻片；貝索蘇木精染色液；貝索伊紅染色液；Leica ASP300全自動脫水機(jī)、Leica EG1150石蠟包埋機(jī)、Leica RM2235石蠟切片機(jī)，Leica ST5020全自動染色機(jī)、Leica CV5030封片機(jī)。

1.2 方法每名技術(shù)人員按以下3種方法各留下指紋10張載玻片，合計90張載玻片。(1)用力按指紋：將潔凈的載玻片放好，用大拇指和食指用力在載玻片上按下指紋，按滿整張載玻片。(2)輕輕留下指紋：將潔凈的載玻片放好，用大拇指和食指輕輕地劃過潔凈的載玻片，留下指紋。(3)盡量避免留下指紋：將潔凈的載玻片放好，用大拇指和食指拿著載玻片的兩個側(cè)面和號碼標(biāo)簽側(cè)，盡可能少地接觸載玻片，盡量避免留下指紋。HE染色過程分為：全程均戴無粉無菌醫(yī)用手套進(jìn)行HE操作和全程均不戴手套進(jìn)行HE操作。

1.3 HE染色將載玻片在70 ℃烘片機(jī)上烤片15 min，全自動染封一體機(jī)(Leica ST5020全自動染色機(jī)和Leica CV5030封片機(jī))進(jìn)行HE染色和封固：二甲苯10 min×3次，100%、95%、75%乙醇(固定各1 min)、流水沖洗1 min、蘇木精8 min、分化液20 s、流水沖洗3 min、藍(lán)化液1 min、流水沖洗3 min、伊紅1 min、75%乙醇1 min、95%乙醇1 min、100%乙醇1 min×2 次、二甲苯5 min×3次，封片后結(jié)束HE染色程序。

1.4 HE切片顯微鏡下粉染物數(shù)量比較將三種方法留下指紋的HE切片由兩名高級病理醫(yī)師鏡下閱片進(jìn)行粉染物數(shù)量打分。數(shù)量較小(每高倍視野≤1個)為1分、數(shù)量一般(每高倍視野2～4個)為2分、數(shù)量較多(每高倍視野≥5個)為3分。

1.5 統(tǒng)計學(xué)分析所有數(shù)據(jù)采用SPSS 24.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析，采用χ2檢驗，檢驗水平(α)為0.05，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 三種方法留下的指紋在HE染色后載玻片上粉染物數(shù)量對比通過三種方法留下的指紋在HE染色后呈粉色，無明顯細(xì)胞核，稱之為粉染物，各組中粉染物在載玻片中均有出現(xiàn)，其中輕輕留下指紋組中的數(shù)量多于盡量避免留下指紋組，而用力按指紋組的數(shù)量明顯多于其他兩組(P<0.05，表1)。

表1 HE染色后載玻片上粉染物數(shù)量評分

2.2 三種方法留下的指紋在HE染色前、后載玻片上粉染物形態(tài)對比通過三種方法留下的指紋，染色前在顯微鏡下呈透明狀角化物，形態(tài)和大小不一；經(jīng)HE染色后呈粉色，無明顯細(xì)胞核，形態(tài)和大小不均一。用力按指紋組中粉染物數(shù)量較多且大小相差較大，形態(tài)也不一致；輕輕留下指紋組中的數(shù)量比用力按指紋組少，大小和形態(tài)較為一致；盡量避免留下指紋組中粉染物數(shù)量很少，大小和形態(tài)非常一致(圖1)。

①A①B①C①D①E①F②A②B②C②D

2.3 戴手套與否HE制片時粉染物數(shù)量對比本實驗對比了戴手套與不戴手套操作進(jìn)行HE制片時的粉染物對比，發(fā)現(xiàn)不戴手套時很多切片上都出現(xiàn)粉染物(圖2)，而戴手套操

作時粉染物很少。這些粉染物的形態(tài)和大小，與指紋經(jīng)HE染色后的大小和形態(tài)相近。

3 討論

本實驗發(fā)現(xiàn)指紋經(jīng)HE染色后可以在載玻片上留下粉染物，操作時用力按指紋組比輕輕留下指紋組中的數(shù)量多，輕輕留下指紋組比盡量避免留下指紋組的數(shù)量多，可見不戴手套進(jìn)行病理制片時就算盡量避免也不能保證在切片上完全避免留下指紋和粉染物。粉染物的形態(tài)也與手上皮膚脫落的角化物相近，隨后本組經(jīng)過對比戴手套和不戴手套進(jìn)行病理制片發(fā)現(xiàn)不戴手套操作或多或少會出現(xiàn)粉染物，而戴手套操作時HE切片中粉染物則大大減少。

在粉染物的數(shù)量上發(fā)現(xiàn)，染色后的粉染物比染色前的碎片狀物明顯減少。這是因為指紋沒有很緊密地粘在載玻片上，經(jīng)過脫蠟和染色時會有部分碎片狀物脫落在二甲苯和乙醇等試劑中，所以最終的HE切片上粉染物數(shù)量較染色前減少了。

關(guān)于粉染物的成分說法不一，有人認(rèn)為是皮膚干燥脫落的上皮污染[1]，也有學(xué)者認(rèn)為這些粉色碎片是血漿或一些固定后會凝固的各種含蛋白質(zhì)的液體。經(jīng)過實驗與分析，作者推測這些粉染物有著不同的來源：其中一種為手上皮膚脫落的角化物，在常規(guī)制片中全程帶手套可大大減少粉染物的出現(xiàn)；但在制片全程戴手套的情況下還是會出現(xiàn)粉染物，此時粉染物很可能來源于送檢標(biāo)本中血漿或其他液體。而如果不戴手套進(jìn)行操作時，操作人員手不能抓在貼片的玻璃部分，應(yīng)統(tǒng)一抓在寫號碼的玻片部分，這樣也能減少粉染物的出現(xiàn)。

在日常工作中我們會遇到一些小問題，有時候會發(fā)現(xiàn)HE切片中會出現(xiàn)粉染物，有時候還會出現(xiàn)大小均一不透明的顆粒狀物，需要耐心且細(xì)心地去探索和發(fā)現(xiàn)。本科室將有粉醫(yī)用手套換成無粉醫(yī)用手套后，這些不透明的顆粒狀物就會消失，因此發(fā)現(xiàn)這些顆粒狀物是手套上的滑石粉。所以全程戴無粉無菌醫(yī)用手套進(jìn)行病理制片可以大大減少除送檢組織外的其他雜質(zhì)出現(xiàn)，同時戴手套也是對自身的生物安全保護(hù)。此外，我們還會發(fā)現(xiàn)切片有白色點狀或云霧狀不著色區(qū)域、石蠟污染和染料污染[2]等問題，這就要求操作人員一定要重視操作流程中的每個環(huán)節(jié)，及時發(fā)現(xiàn)問題，及時解決問題，避免問題的再次出現(xiàn)。