王 娟，張剛應(yīng)

(河北中保綠農(nóng)作物科技有限公司，北京 100193)

30%咪鮮·氟環(huán)唑微乳劑是一種具有預(yù)防和防治效果的廣譜混配殺菌劑，咪鮮胺和氟環(huán)唑均執(zhí)行企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)分析方法。有關(guān)咪鮮胺分析方法已報(bào)道氣相色譜法[6-9]、液相色譜法[3-5]，氟環(huán)唑用液相色譜法分析也有報(bào)道[1-2]。但兩者復(fù)配制劑的分析方法目前尚未見(jiàn)公開(kāi)報(bào)道。本文所報(bào)道分析方法是采用高效液相色譜法對(duì)咪鮮胺和氟環(huán)唑混劑同時(shí)進(jìn)行分離測(cè)定，提高了檢測(cè)速度，拓寬了分析方法，簡(jiǎn)便且易行，適于生產(chǎn)質(zhì)量控制及相關(guān)分析的研究。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 試劑和溶液 乙腈：色譜級(jí)；甲醇：色譜級(jí)；水：新蒸二次蒸餾水；氟硅唑標(biāo)樣：已知質(zhì)量分?jǐn)?shù)，w≥99.0%；咪鮮胺標(biāo)樣：已知質(zhì)量分?jǐn)?shù)，w≥99.0%；

1.2 儀器 高效液相色譜儀：water 2695帶可調(diào)波長(zhǎng)紫外檢測(cè)器；色譜工作站；色譜柱：150mm×4.6mm(i.d.)不銹鋼柱，內(nèi)填SunFireTMC18、5μm填充物；過(guò)濾器：濾膜孔徑約0.45μm；微量進(jìn)樣器：50μL。

1.3 色譜條件 流動(dòng)相：甲醇+乙腈+水=30+40+30(V/V)使用前經(jīng)0.45μm聚四氟乙烯膜過(guò)濾，并超聲脫氣20min；柱溫：室溫；檢測(cè)波長(zhǎng)：210 nm；流量：1.0mL/min；進(jìn)樣量：5μL。保留時(shí)間：咪鮮胺，10.6min；氟環(huán)唑，6.4min。典型色譜圖(圖1、2)。

圖1 標(biāo)樣液相色譜圖圖2 試樣液相色譜圖

1.4 溶液的配制

1.4.1 標(biāo)樣溶液的制備 分別稱取咪鮮胺標(biāo)樣0.1g、氟環(huán)唑標(biāo)樣0.05g(準(zhǔn)確至0.000 2g)于100mL容量瓶中，用甲醇溶解，超聲振蕩5 min，冷卻至室溫，用甲醇稀釋至刻度，搖勻。用移液管移取上述溶液5mL于50mL容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻。

1.4.2 試樣溶液的制備 稱取30%咪鮮·氟環(huán)唑微乳劑試樣0.5g(準(zhǔn)確至0.000 2g)于100mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻。用移液管移取上述溶液5mL于50mL容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻。

1.4.3 測(cè)定 在上述操作條件下，待儀器基線穩(wěn)定后，連續(xù)注入數(shù)針標(biāo)樣溶液，待相鄰2針的峰面積相對(duì)變化<1.5%，按照標(biāo)樣溶液、試樣溶液、試樣溶液、標(biāo)樣溶液的順序進(jìn)行測(cè)定。

1.4.4 計(jì)算 將2針標(biāo)樣溶液和2針試樣溶液中咪鮮胺(或氟環(huán)唑)的峰面積分別進(jìn)行平均，試樣中咪鮮胺(或氟環(huán)唑)的質(zhì)量分?jǐn)?shù)X(%)按式(1)計(jì)算：

(1)

式中：

X——試樣溶液中咪鮮胺(或氟環(huán)唑)質(zhì)量分?jǐn)?shù)，%；

A2——試樣溶液中咪鮮胺(或氟環(huán)唑)峰面積的平均值；

m1——咪鮮胺(或氟環(huán)唑)標(biāo)樣的質(zhì)量，g；

P——咪鮮胺(或氟環(huán)唑)標(biāo)樣的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，%；

A1——標(biāo)樣溶液中咪鮮胺(或氟環(huán)唑)峰面積的平均值；

m2——試樣的質(zhì)量，g。

計(jì)算結(jié)果應(yīng)表示至2位小數(shù)。

2 結(jié)果與討論

2.1 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇 據(jù)相關(guān)研究顯示，氟環(huán)唑在205nmnm[1-2]附近具有強(qiáng)吸收，咪鮮胺在210nm[3-5]附近有強(qiáng)吸收。但考慮到兩者均需有較好的吸收，而且各種雜質(zhì)不影響主組分的測(cè)定，因此，綜合考慮多種因素且經(jīng)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證后，選擇210nm作為本方法的最佳吸收波長(zhǎng)。

2.2 流動(dòng)相的選擇 根據(jù)咪鮮胺和氟環(huán)唑的特點(diǎn)，選用甲醇溶解樣品。分別用甲醇-水、乙腈-水以及甲醇-乙腈-水按不同的體積比做了多個(gè)流動(dòng)相配比試驗(yàn)。結(jié)果表明，當(dāng)甲醇︰乙腈：水為30∶40∶30 (V/V)時(shí)，各組分均能得到較理想的分離，且基線平穩(wěn)，峰形對(duì)稱。

2.3 分析方法的線性相關(guān)性 分別配制5個(gè)不同濃度的標(biāo)樣溶液，按1.3色譜操作條件下進(jìn)行分析，以咪鮮胺(氟環(huán)唑)濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到咪鮮胺和氟環(huán)唑線性方程結(jié)果(表1)。

表1 方法的線性回歸方程實(shí)驗(yàn)

2.4 方法的精密度 稱取同一批次30%咪鮮·氟環(huán)唑微乳劑6個(gè)樣品，在1.3色譜操作條件下進(jìn)行分析，分別獲得咪鮮胺和氟環(huán)唑的標(biāo)準(zhǔn)偏差和變異系數(shù)，結(jié)果(表2)。咪鮮胺和氟環(huán)唑標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為0.098、0.087，變異系數(shù)分別為0.49%、0.86%。

表2 方法的精密度實(shí)驗(yàn)

2.5 方法的準(zhǔn)確度實(shí)驗(yàn) 按照配方比例要求，將除原藥以外的所有助劑混勻，作制劑空白，按照制劑標(biāo)稱值在制劑空白中添加有效成分，合成5個(gè)制劑樣品，在1.3色譜操作條件下進(jìn)行分析，測(cè)定咪鮮胺的平均加標(biāo)回收率為99.18%；氟環(huán)唑的平均加標(biāo)回收率為99.53%(表3)。

表3 方法的準(zhǔn)確度實(shí)驗(yàn)

3 結(jié)論

本文所提出的采用高效液相色譜法對(duì)30%咪鮮·氟環(huán)唑微乳劑中咪鮮胺、氟環(huán)唑的含量進(jìn)行分析，分離效果好，精密度和準(zhǔn)確度高，可作為咪鮮胺和氟環(huán)唑混合制劑的有效分析方法。