廖常英 凌 玲 王作龍 趙鳳容

（重慶市江北區(qū)中醫(yī)院，1 婦產(chǎn)科，2 檢驗科，重慶 402000）

子宮內(nèi)膜癌是女性常見生殖系統(tǒng)惡性腫瘤之一，占女性全身惡性腫瘤7%[1]，近年來發(fā)病率呈不斷上升趨勢，且出現(xiàn)發(fā)病年齡年輕化，嚴重危害女性健康和生命安全[2-3]。叉頭框蛋白C1（forkhead box protein C1，F(xiàn)OXC1）屬于叉頭框（FOX）轉(zhuǎn)錄因子家族。FOX 家族共有19 個亞族，參與許多重要的生物學(xué)功能，包括細胞周期調(diào)控、上皮細胞分化等[4]。FOX 家族基因通過轉(zhuǎn)錄因子活性控制其他基因表達，在腫瘤形成、分化、轉(zhuǎn)移和血管形成中也占據(jù)重要地位[5]。沉默鼻咽癌細胞系5-8F FOXC1 基因后，5-8F 細胞凋亡率明顯增高，且可影響細胞周期分布[6]。FOXC1 在乳腺癌和子宮內(nèi)膜癌中均作為主要的調(diào)節(jié)因子[7]，但關(guān)注FOXC1表達水平與子宮內(nèi)膜癌間的關(guān)系的研究仍較少?；诖?，本研究回顧性分析子宮內(nèi)膜癌、非典型子宮內(nèi)膜增生和子宮肌瘤患者臨床資料，以探究子宮內(nèi)膜癌癌組織FOXC1 表達的水平及意義。

1 材料和方法

1.1 一般資料

回顧性分析2015年1月至2018年3月間收治的100 例子宮內(nèi)膜癌患者、20 例非典型子宮內(nèi)膜增生和20 例子宮肌瘤患者臨床資料。納入標準：所有患者均經(jīng)病理檢查確診，子宮肌瘤患者均經(jīng)病理檢查證實子宮內(nèi)膜正常；癌癥患者術(shù)前未經(jīng)放化療或激素治療者；年齡＞18 歲者；經(jīng)本院倫理委員會審核通過。排除標準：合并其他惡性腫瘤者；臨床資料不完整者。100 例子宮內(nèi)膜癌患者年齡47～68 歲、平均（57.19±6.26）歲，病理分型：子宮內(nèi)膜樣腺癌80 例、低分化腺癌10 例、腺鱗癌5 例、漿液性腺癌5 例，分化程度：低分化26 例、中分化38 例、高分化36 例，病理分期（依據(jù)國際婦產(chǎn)科聯(lián)盟子宮內(nèi)膜癌分期[8]）：Ⅰ期78 例、Ⅱ期10 例、Ⅲ期12 例。20 例非典型子宮內(nèi)膜增生患者年齡51～73 歲、平均（57.91±7.09）歲。20 例子宮肌瘤患者年齡44～70 歲、平均（56.95±7.43）歲。子宮內(nèi)膜癌、非典型子宮內(nèi)膜增生及子宮肌瘤患者年齡對比差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。

1.2 研究方法

采用免疫組織化學(xué)方法檢測子宮內(nèi)膜癌組織FOXC1 水平。所有腫瘤組織標本均經(jīng)10%甲醛固定、石蠟包埋，5 μm 連續(xù)切片；切片常規(guī)脫蠟，將切片置入修復(fù)液中微波爐高火5 min、中低火15 min，室溫冷卻30 min 行抗原修復(fù)，3% H2O2去離子水常溫孵育10 min；使用正常山羊封閉血清、室溫孵育20 min；按照說明書稀釋一抗（兔抗人FOXC1 多克隆抗體來自上海澤葉生物科技有限公司），一抗50 μL 室溫孵育2 h；免疫組織化學(xué)檢測系統(tǒng)試劑1 室溫孵育20 min，免疫組織化學(xué)檢測系統(tǒng)試劑2 室溫孵育20 min（兔超敏2 步法免疫組織化檢測試劑來自上海奇康生物科技有限公司）；二氨基聯(lián)苯胺（DAB）顯色5～10 min，蘇木精復(fù)染、乙醇脫水、二甲苯透明、樹膠固封。

1.3 評估方法

陽性結(jié)果判斷標準[9]：FOXC1 以細胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒判為陽性，隨機計數(shù)10 個高倍視野的1 000 個瘤細胞，按每高倍鏡視野陽性細胞百分比計為0 分（＜5%）、1 分（5%～25%）、2 分（26%～50%）、3 分（51%～75%）、4 分（＞76%），按染色強度計1 分（淡黃色）、2 分（黃色）、3 分（棕黃色）。陽性強度=陽性細胞百分比評分×染色強度評分，＞4 分為陽性，≤4 分為陰性。

1.4 觀察指標

比較子宮內(nèi)膜癌不同病理組織FOXC1 的表達情況，并分析其與子宮內(nèi)膜癌患者病理類型、分化程度、病理分期、受累肌層、宮頸受累、附件受累和盆腔淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等臨床病理特征間的關(guān)系。

1.5 統(tǒng)計學(xué)處理

采用SPSS19.0 統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)分析，F(xiàn)OXC1 陽性表達等計數(shù)數(shù)據(jù)以[n（%）]表示，行χ2檢驗或Fisher 精確概率檢驗，P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不同病理組織FOXC1 表達水平的比較

不同疾病子宮內(nèi)膜FOXC1 陽性率對比差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）；其中子宮內(nèi)膜癌癌組織FOXC1 陽性率為89.00%，高于癌旁組織的32.00%、非典型子宮內(nèi)膜增生的60.00%及正常子宮內(nèi)膜的20.00%（P＜0.01），子宮內(nèi)膜癌癌旁組織FOXC1 陽性率（32.00%）低于非典型子宮內(nèi)膜增生（60.00%），與正常子宮內(nèi)膜陽性率對比差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）；非典型子宮內(nèi)膜增生FOXC1 陽性率（60.00%）高于正常子宮內(nèi)膜20.00%（P＜0.01）。

2.2 FOXC1 在子宮內(nèi)膜癌中的表達水平與臨床病理特征的關(guān)系

子宮內(nèi)膜癌患者不同病理類型、宮頸是否受累、附件是否受累患者FOXC1陽性率差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），但分化程度低、病理分期高、受累肌層多以及盆腔淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者FOXC1陽性率顯著升高，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）（表1）。

3 討論

本研究結(jié)果顯示，不同疾病子宮內(nèi)膜FOXCI陽性率對比，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。其中FOXCI 在子宮內(nèi)膜癌癌組織的陽性率最高，在本組數(shù)據(jù)中可高達89.00%；非典型子宮內(nèi)膜增生患者FOXC1 陽性率為60.00%；而子宮內(nèi)膜癌旁組織和正常子宮內(nèi)膜FOXCI 陽性率對比，差異無統(tǒng)計學(xué)意義，這與多數(shù)研究中表明FOXCI 在癌組織中表達水平更高的結(jié)論相一致[10]。人叉頭框基因家族由50 個成員組成，命名為FOXA1～FOXS1，其中FOXC 是FOX 家族中較重要的亞族，F(xiàn)OXC1 和FOXC2 均是近年來腫瘤相關(guān)病機研究較多的成員[11-12]。目前國內(nèi)有文獻顯示，F(xiàn)OXC1 能夠抑制上皮型鈣黏附素表達，或與惡性間質(zhì)化表型腫瘤的相關(guān)蛋白協(xié)同表達，促進腫瘤上皮細胞向間質(zhì)細胞的轉(zhuǎn)變，成為腫瘤獲得侵襲轉(zhuǎn)移能力的根源[13-14]。陳柏林等[15]研究也指出，F(xiàn)OXC1 可能通過改變纖維連接蛋白、波形蛋白的表達調(diào)節(jié)鼻咽癌的侵襲和轉(zhuǎn)移能力。

表1 FOXC1 在子宮內(nèi)膜癌中的表達水平與臨床病理特征的關(guān)系[n（%）]Tab 1 The relationship between the expression level of FOXC1 in endometrial cancer and clinicopathological characteristics[n (%)]

本研究結(jié)果還顯示，子宮內(nèi)膜癌患者不同病理類型、宮頸是否受累、附件是否受累患者FOXC1陽性比例無差異，但分化程度低、病理分期高、受累肌層多以及盆腔淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者FOXC1 陽性比例顯著升高。提示FOXC1 高表達與子宮內(nèi)膜癌發(fā)生相關(guān)，且隨著子宮內(nèi)膜癌患者病情進展均可表達出更高水平的FOXC1。結(jié)合以往研究分析認為：miR-495 通過直接抑制FOXC1 表達來減少細胞生長，誘導(dǎo)細胞凋亡并抑制子宮內(nèi)膜癌的轉(zhuǎn)移；而FOXC1 過表達則可逆轉(zhuǎn)miR-495 在子宮內(nèi)膜癌細胞中介導(dǎo)的細胞反應(yīng)[16-17]。FOXC1 過度表達可消除miR-495 對子宮內(nèi)膜癌細胞生長和遷移的抑制以及細胞凋亡的促進作用[18]，提示FOXCI 蛋白表達水平的確影響子宮內(nèi)膜癌的發(fā)展、遷移，但本研究更關(guān)注的是FOXCI 在不同類型子宮內(nèi)膜疾病中表達情況，以及其是否可作為評估子宮內(nèi)膜癌病情嚴重程度的指標。非典型子宮內(nèi)膜增生是子宮內(nèi)膜癌的前期病變，術(shù)前診斷往往依靠診刮或?qū)m腔鏡下活檢[19]。本組數(shù)據(jù)顯示，子宮內(nèi)膜癌癌組織FOXCI陽性率高于非典型子宮內(nèi)膜增生，F(xiàn)OXCI 高表達或也與非典型子宮內(nèi)膜增生癌變有關(guān)。且基于miR-495 與FOXC1 的相關(guān)關(guān)系，miR-495 可作為子宮內(nèi)膜癌基因治療的靶點之一，也可將FOXC1 陽性作為子宮內(nèi)膜癌病情的評估指標之一[20-21]。但本研究受限于隨訪時間，未能記錄子宮內(nèi)膜癌患者的治療效果及預(yù)后狀況。因此后續(xù)學(xué)者可從這些角度進行更多研究，以更多地發(fā)現(xiàn)FOXC1 在子宮內(nèi)膜癌中的作用。

綜上所述，子宮內(nèi)膜癌癌組織中FOXC1 陽性率較良性子宮病變組織明顯增高，且隨著子宮內(nèi)膜癌患者分化程度越低，病理分期越高，受累肌層越多以及出現(xiàn)盆腔淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移時其FOXC1 陽性率更高，由此提示FOXC1 的表達與子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生和進展有著密不可分的關(guān)系。