李 銳 王 霞 張曉紅 陳宏海 馬 躍

（沈陽市第五人民醫(yī)院，沈陽 110023）

胰腺癌是最具侵襲性的惡性腫瘤之一，其5年生存率極低[1]，80%以上的患者確診時(shí)已發(fā)生侵襲轉(zhuǎn)移，治愈率較低[2]。因此，早期診斷和治療是提高和改善胰腺癌預(yù)后的關(guān)鍵。微小RNA（microRNAs，miRNA）是一類高度保守的非編碼短鏈RNA，通過與靶向mRNA 的3'UTR 結(jié)合抑制翻譯過程。超過一半的已知miRNA 通過直接靶向癌基因或抑癌基因參與了人類腫瘤的發(fā)生或轉(zhuǎn)移[3]。研究顯示miR-671-5p 在胃癌細(xì)胞中低表達(dá)，過表達(dá)miR-671-5p 抑制胃癌細(xì)胞增殖，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡[4]；在骨肉瘤中miR-671-5p 也呈低表達(dá)，上調(diào)其表達(dá)可阻滯細(xì)胞周期，抑制骨肉瘤細(xì)胞增殖[5]。但miR-671-5p 在胰腺癌組織中的表達(dá)及其對(duì)胰腺癌細(xì)胞增殖和凋亡的影響尚未有研究。腫瘤壞死因子α 誘導(dǎo)蛋白8（tumour necrosis factor-alpha-induced protein 8，TNFAIP8），是一種抗凋亡和致瘤分子，研究顯示人胰腺癌組織中TNFAIP8 的表達(dá)明顯高于正常胰腺組織，干擾TNFAIP8 表達(dá)可發(fā)揮抗增殖和侵襲作用[6-7]。生物信息學(xué)分析顯示TNFAIP8是miR-671-5p 的潛在靶基因，但miR-671-5p 能否靶向TNFAIP8 參與胰腺癌進(jìn)展尚未可知。本研究旨在揭示miR-671-5p 對(duì)胰腺癌細(xì)胞增殖和凋亡的影響和調(diào)控機(jī)制，以期為胰腺癌的早期診療提供新的靶點(diǎn)。

1 材料和方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

收集2016年5月至2017年5月間沈陽市第五人民醫(yī)院肝膽胰外科收治并經(jīng)病理學(xué)確診的20 例胰腺癌患者的胰腺癌組織及與其對(duì)應(yīng)的癌旁正常組織（距離癌灶邊界≥3 cm），離體30 min 內(nèi)置于液氮罐凍存。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，所有患者均簽署知情同意書。

人胰腺癌細(xì)胞capan-1 購于上海斯信生物科技有限公司；人正常胰腺導(dǎo)管上皮細(xì)胞HPDE6C7 購于上海雅吉生物；DMEM 培養(yǎng)基購于北京索萊寶生物科技公司；胰蛋白酶購于美國Gibco 公司；胎牛血清購于杭州四季青生物公司；LipofectamineTM2000 和TRIzol 試劑購于美國Invitrogen 公司；模擬物陰性對(duì)照（miR-NC）、miR-671-5p 模擬物（miR-671-5p mimics）、小干擾RNA 陰性對(duì)照（si-NC）、TNFAIP8 小干擾RNA（si-TNFAIP8）、野生型熒光素酶報(bào)告基因載體（WT-TNFAIP8）、突變型熒光素酶報(bào)告基因載體（MUT-TNFAIP8）以及PCR 引物均由上海吉瑪制藥公司提供；四甲基偶氮唑藍(lán)（MTT）試劑盒、膜聯(lián)蛋白V 異硫氰酸熒光素/碘化丙啶（Annexin V-FITC/PI）試劑盒購于上海碧云天生物公司；TNFAIP8 抗體購于上海瑞齊生物科技有限公司；B 細(xì)胞淋巴瘤/白血病-2（B cell lymphoma/leukemia-2，Bcl-2） 抗體購于美國Santa Cruz 公司；四甲基偶氮唑藍(lán)（methyl thiazolyl tetrazolium，MTT）試劑盒、兔源磷酸甘油醛脫氫酶（phosphoglyceraldehyde dehydrogenase，GAPDH）抗體、兔源細(xì)胞周期D1（cyclin D1）抗體、鼠源p21 抗體、兔源Bcl-2 相關(guān)X 蛋白（Bcl-2 associated X protein，Bax）抗體、HRP 標(biāo)記的山羊抗小鼠及山羊抗兔IgG 購于北京百奧萊博生物科技有限公司。

1.2 細(xì)胞培養(yǎng)和分組

Capan-1細(xì)胞在含10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為37℃、含5% CO2的細(xì)胞培養(yǎng)箱。用0.25%的胰蛋白酶消化后進(jìn)行傳代培養(yǎng)。將對(duì)數(shù)期capan-1細(xì)胞接種于6孔板，當(dāng)細(xì)胞融合度約為60%時(shí)，按照LipofectamineTM2000說明書步驟分別將miR-NC、miR-671-5p mimics、si-NC、si-TNFAIP8轉(zhuǎn)染至capan-1細(xì)胞，依次記為miR-NC組、miR-671-5p組、si-NC組、si-TNFAIP8組。為進(jìn)一步驗(yàn)證miR-671-5p是通過調(diào)控TNFAIP8表達(dá)進(jìn)而影響胰腺癌細(xì)胞增殖和凋亡，將pcDNA和pcDNA-TNFAIP8分別與miR-671-5p mimics共轉(zhuǎn)染至capan-1細(xì)胞，并依次記為miR-671-5p+pcDNA組和miR-671-5p+pcDNA-TNFAIP8組。

1.3 qRT-PCR 檢測(cè)miR-671-5p 和TNFAIP8 mRNA 的表達(dá)水平

用TRIzol 試劑從胰腺癌組織、癌旁組織和各組capan-1 細(xì)胞中提取總RNA。采用cDNA 合成試劑盒將RNA 逆轉(zhuǎn)為cDNA。隨后，使用SYBR Premix Ex Taq 在ABI 7500 上進(jìn)行qRT-PCR。分別以U6 和GAPDH 為內(nèi)源性對(duì)照，引物序列如下：miR-671-5p-正向引物序列為5'-ACACTCCAGCTG GGAGGAAGCCCTGGAGGGG-3'；TNFAIP8-反向引物序列為5'-TGAAGATGGAGCACTGCTG A-3'，TNFAIP8-反向引物序列為5'-GGTCTGTTA CCCGTTAGGAAG-3'；U6-正向引物序列為5'-C TCGCTTCGGCAGCACA-3'，U6-反 向引物序列為5'-AACGCTTCACGAATTTGCGT-3'GAPDH-正向引物序列為5'-TGACTTCAACAGCGACACC CA-3'，GAPDH-反向引物序列為5'-CACCCTGTTG CTGTAGCCAAA-3'。2-ΔΔCt法計(jì)算miR-671-5p 和TNFAIP8 mRNA 的相對(duì)表達(dá)量。

1.4 雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)驗(yàn)證miR-671-5p 和TNFAIP8 的靶向關(guān)系

采用生物信息學(xué)數(shù)據(jù)庫StarBase 預(yù)測(cè)miR-671-5p 靶基因顯示，TNFAIP8 是miR-671-5p 的 潛在靶基因，隨后利用雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)驗(yàn)證兩者靶向關(guān)系。將miR-NC、miR-671-5p mimics分 別 與WT-TNFAIP8 和MUT-TNFAIP8 共轉(zhuǎn)染至capan-1 細(xì)胞，轉(zhuǎn)染48 h 檢測(cè)各組capan-1 細(xì)胞熒光素酶活性變化。為驗(yàn)證兩者的調(diào)控關(guān)系，分別將miR-NC、miR-671-5p mimics、anti-miR-NC、anti-miR-671-5p 轉(zhuǎn)染至capan-1 細(xì)胞，轉(zhuǎn)染48 h 時(shí)免疫印跡檢測(cè)TNFAIP8 表達(dá)變化。

1.5 MTT 實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞活力

將對(duì)數(shù)期capan-1 細(xì)胞按照5×103個(gè)/孔接種到96 孔板，當(dāng)細(xì)胞融合度約為60%時(shí)，按照上述分組進(jìn)行細(xì)胞轉(zhuǎn)染，分別在轉(zhuǎn)染24、48、72 h 時(shí)間點(diǎn)，向每孔內(nèi)加入20 μL 的MTT 試劑，培養(yǎng)箱內(nèi)孵育4 h，棄去上清液，每孔加入150 μL 的二甲基亞砜，低速搖床震蕩10 min 至結(jié)晶完全溶解，隨后采用酶標(biāo)儀檢測(cè)各孔在490 nm 波長(zhǎng)處的吸光度值。

1.6 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡

收集轉(zhuǎn)染48 h 的各組細(xì)胞，磷酸鹽緩沖液洗滌細(xì)胞后，采用結(jié)合緩沖液調(diào)整細(xì)胞濃度為1×106cells/mL。取100 μL 細(xì)胞懸液加入到流式管內(nèi)，分別加入5 μL 的Annexin V-FITC 和5 μL 的PI，避光孵育15 min，補(bǔ)加400 μL 的結(jié)合緩沖液，立即采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡情況。

1.7 免疫印跡檢測(cè)TNFAIP8、cyclin D1、p21、Bcl-2和Bax蛋白的表達(dá)水平

收集轉(zhuǎn)染48 h 的各組細(xì)胞，采用蛋白提取試劑盒提取各組細(xì)胞蛋白，測(cè)定蛋白濃度和純度。取適量蛋白樣品和等體積的2×上樣緩沖液混勻后，沸水浴5 min 使細(xì)胞蛋白變性。取30 μg 蛋白樣品上樣后，進(jìn)行聚丙烯酰胺凝膠電泳。利用濕法轉(zhuǎn)膜裝置將細(xì)胞蛋白轉(zhuǎn)移至硝酸纖維素膜，將膜置于5%脫脂奶粉中室溫封閉1 h，加入稀釋的一抗（1∶500）室溫反應(yīng)2 h，加入辣根過氧化物酶標(biāo)記的二抗（1∶2 000）室溫反應(yīng)1 h，利用ECL 發(fā)光試劑盒進(jìn)行顯色，凝膠成像系統(tǒng)拍照后，以GAPDH 為內(nèi)參，圖像處理軟件分析各目的灰度值。

1.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS18.0 進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。所有組均設(shè)置3 個(gè)平行實(shí)驗(yàn)或復(fù)孔，重復(fù)3 次。數(shù)據(jù)均采用±s表示，2 組間比較采用t檢驗(yàn)，多組間比較采用單因素方差分析，進(jìn)一步組間比較采用SNK-q檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 miR-671-5p 和TNFAIP8 在胰腺癌組織中的表達(dá)

胰腺癌組織miR-617-5p、TNFAIP8 mRNA、TNFAIP8 的表達(dá)分別 為1.00±0.06、1.01±0.07、0.23±0.03，癌旁組織分別為0.48±0.05、3.05±0.29、0.61±0.06。與癌旁組織比較，胰腺癌組織miR-617-5p 的表達(dá)水平降低，TNFAIP8 mRNA 和TNFAIP8 的表達(dá)水平升高（圖1），差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。

圖1 胰腺癌組織TNFAIP8 蛋白表達(dá)Fig 1 TNFAIP8 protein expression in pancreatic cancer

2.2 miR-671-5p 和TNFAIP8 在胰腺癌capan-1 細(xì) 胞和正常胰腺細(xì)胞HPDE6C7 中的表達(dá)

正常胰腺導(dǎo)管上皮細(xì)胞HPDE6C7 中miR-617-5p、TNFAIP8 mRNA、TNFAIP8 的表達(dá)分別為1.00±0.07、1.00±0.05、0.21±0.02，胰腺癌細(xì)胞capan-1 中的表達(dá)分別為0.56±0.05、2.74±0.27、0.55±0.05，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（圖2）（P＜0.01）。

圖2 胰腺癌細(xì)胞TNFAIP8 蛋白表達(dá)Fig 2 TNFAIP8 protein expression in pancreatic cancer cells

2.3 miR-671-5p 靶向調(diào)控TNFAIP8 的表達(dá)

生物信息學(xué)數(shù)據(jù)庫StarBase 靶基因預(yù)測(cè)顯示，miR-671-5p 可與TNFAIP8 的3′UTR 區(qū)域存在部分連續(xù)互補(bǔ)結(jié)合位點(diǎn)（圖3A）。雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)顯示，與miR-NC 和WT-TNFAIP8 共轉(zhuǎn)染組 比 較，miR-371-5p mimics 和WT-TNFAIP8 共轉(zhuǎn)染組capan-1 細(xì)胞熒光素酶活性（0.48±0.05 比1.03±0.09）顯著降低（P＜0.01）；與miR-NC 和WT-TNFAIP8 共轉(zhuǎn)染組比較，miR-371-5p mimics和WT-TNFAIP8 共轉(zhuǎn)染組capan-1 細(xì)胞熒光素酶活性（1.02±0.08 比1.04±0.09）變化無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。免疫印跡驗(yàn)證miR-671-5p 和TNFAIP8 的調(diào)控關(guān)系顯示，與miR-NC 組比較，miR-671-5p 組TNFAIP8蛋白的表達(dá)水平（0.24±0.03 比0.58±0.05）顯著降低；與anti-miR-NC 組比較，anti-miR-671-5p 組TNFAIP8 的表達(dá)水平（0.89±0.08 比0.56±0.04）顯著升高（P＜0.01，圖3B）。以上結(jié)果說明miR-671-5p 靶向負(fù)調(diào)控TNFAIP8 表達(dá)。

2.4 miR-671-5p 過表達(dá)對(duì)胰腺癌capan-1 細(xì)胞增殖和凋亡的影響

結(jié)果顯示（圖4，表1），與miR-NC 組比較，miR-671-5p 組capan-1 細(xì)胞miR-671-5p 的表達(dá)量顯著增加，cyclin D1 和Bcl-2 蛋白的表達(dá)量顯著降低，p21 和Bax 蛋白的表達(dá)量顯著升高，細(xì)胞在轉(zhuǎn)染48、72 h 時(shí)間點(diǎn)細(xì)胞活力顯著降低，細(xì)胞凋亡率顯著升高（P＜0.01）。

圖4 miR-671-5p 過表達(dá)對(duì)胰腺癌capan-1 細(xì)胞增殖和凋亡的影響Fig 4 Effect of miR-671-5p overexpression on proliferation and apoptosis of pancreatic cancer capan-1 cells

表1 miR-671-5p 過表達(dá)對(duì)胰腺癌capan-1 細(xì)胞增殖和凋亡的影響（n=9，±s）Tab 1 Effect of overexpressing miR-671-5p on proliferation and apoptosis of pancreatic cancer capan-1 cells（n=9，±s）

表1 miR-671-5p 過表達(dá)對(duì)胰腺癌capan-1 細(xì)胞增殖和凋亡的影響（n=9，±s）Tab 1 Effect of overexpressing miR-671-5p on proliferation and apoptosis of pancreatic cancer capan-1 cells（n=9，±s）

**P＜0.01 vs miR-NC

Group miR-671-5p OD 490 Apoptosis rate（%）Cyclin D1 protein p21 protein Bcl-2 protein Bax protein 24 h 48 h 72 h miR-NC 1.01±0.09 0.36±0.04 0.71±0.06 1.12±0.09 7.36±0.74 0.71±0.06 0.23±0.03 0.68±0.06 0.36±0.03 miR-671-5p 2.87±0.28** 0.33±0.03 0.44±0.04** 0.57±0.05** 21.44±2.13** 0.29±0.03** 0.61±0.06** 0.27±0.03** 0.81±0.07**

2.5 干擾TNFAIP8 表達(dá)對(duì)胰腺癌capan-1 細(xì)胞增殖和凋亡的影響

結(jié)果顯示（圖5，表2），與si-NC 組比較，si-TNFAIP8 組capan-1 細(xì)胞TNFAIP8 蛋 白的表達(dá)量顯著降低，cyclin D1 和Bcl-2 蛋白的表達(dá)量顯著降低，p21 和Bax 蛋白的表達(dá)量顯著升高，細(xì)胞在轉(zhuǎn)染48、72 h 時(shí)間點(diǎn)細(xì)胞活力顯著降低，細(xì)胞凋亡率顯著升高（P＜0.01）。

圖5 干擾TNFAIP8 表達(dá)對(duì)胰腺癌capan-1 細(xì)胞增殖和凋亡的影響Fig 5 Effect of interfering with TNFAIP8 expression on proliferation and apoptosis of pancreatic cancer capan-1 cells

表2 干擾TNFAIP8 表達(dá)對(duì)胰腺癌capan-1 細(xì)胞增殖和凋亡的影響（n=9，±s）Tab 2 Effect of interfering with TNFAIP8 expression on proliferation and apoptosis of pancreatic cancer capan-1 cells （n=9，±s）

表2 干擾TNFAIP8 表達(dá)對(duì)胰腺癌capan-1 細(xì)胞增殖和凋亡的影響（n=9，±s）Tab 2 Effect of interfering with TNFAIP8 expression on proliferation and apoptosis of pancreatic cancer capan-1 cells （n=9，±s）

**P＜0.01 vs si-NC

Group TNFAIP8 protein OD 490 Apoptosis rate（%）cyclin D1 protein p21 protein Bcl-2 protein Bax protein 24 h 48 h 72 h si-NC 0.63±0.06 0.37±0.04 0.73±0.06 1.15±0.09 6.87±0.69 0.73±0.07 0.22±0.03 0.69±0.06 0.37±0.03 si-TNFAIP8 0.21±0.03** 0.36±0.03 0.51±0.05** 0.66±0.06** 18.36±1.85** 0.34±0.03** 0.58±0.05** 0.31±0.03** 0.76±0.07**

2.6 TNFAIP8 過表達(dá)逆轉(zhuǎn)了miR-671-5p 過表達(dá)對(duì)胰腺癌capan-1 細(xì)胞增殖和凋亡的作用

結(jié)果顯示（圖6，表3），與miR-NC 組比較，miR-671-5p 組capan-1 細(xì)胞TNFAIP8、cyclin D1 和Bcl-2 蛋白的表達(dá)量顯著降低，p21 和Bax 蛋白的表達(dá)量顯著升高，細(xì)胞在轉(zhuǎn)染48、72 h 時(shí)間點(diǎn)細(xì)胞活力顯著降低，細(xì)胞凋亡率顯著升高；與miR-671-5p+pcDNA 組比較，miR-671-5p+pcDNA-TNFAIP8組capan-1 細(xì)胞TNFAIP8、cyclin D1 和Bcl-2 蛋白的表達(dá)量顯著升高，p21 和Bax 蛋白的表達(dá)量顯著降低，細(xì)胞在轉(zhuǎn)染48、72 h 時(shí)間點(diǎn)細(xì)胞活力顯著升高，細(xì)胞凋亡率顯著降低（P＜0.05）。

3 討論

胰腺癌是一種高度致命性惡性腫瘤，其死亡率與發(fā)病率相當(dāng)[8]。近年來，盡管在胰腺癌的治療上付出了很大努力，但大多數(shù)患者預(yù)后仍然較差。因此，了解調(diào)控胰腺癌細(xì)胞增殖和凋亡的分子機(jī)制，開發(fā)新的、有效的胰腺癌治療方法是目前醫(yī)學(xué)臨床亟待解決的重大課題。

miRNA 在多種人類癌癥包括胰腺癌的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要作用[9]。已有研究證實(shí)miR-671-5p在人類癌癥進(jìn)展起關(guān)鍵作用。miR-671-5p 在食管鱗狀細(xì)胞癌組織中下調(diào)表達(dá)，過表達(dá)miR-671-5p抑制食管鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞的增殖、克隆形成和遷移[10]。miR-671-5p 通過下調(diào)FOXM1 的表達(dá)抑制乳腺癌細(xì)胞的增殖、侵襲及上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化，其還可通過降低DNA 修復(fù)能力，提高乳腺癌細(xì)胞對(duì)紫外線和化療的敏感性[11]。此外，miR-671-5p 的表達(dá)失調(diào)與兒童脊索瘤的進(jìn)展具有一定相關(guān)性[12]。本研究結(jié)果顯示，胰腺癌組織中miR-671-5p 的表達(dá)水平顯著低于癌旁組織，過表達(dá)miR-671-5p 可抑制胰腺癌細(xì)胞增殖，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。檢測(cè)增殖和凋亡相關(guān)蛋白顯示，過表達(dá)miR-671-5p 可抑制促增殖蛋白cyclin D1 和抗凋亡蛋白Bcl-2 表達(dá)，促進(jìn)增殖抑制蛋白p21 和促凋亡蛋白Bax 表達(dá)。以上研究說明miR-671-5p 通過抑制細(xì)胞增殖能力和誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，在胰腺癌中發(fā)揮抑癌作用。

圖6 TNFAIP8 過表達(dá)逆轉(zhuǎn)了miR-671-5p 過表達(dá)對(duì)胰腺癌capan-1 細(xì)胞增殖和凋亡的作用Fig 6 Overexpressing TNFAIP8 reversed the effect of miR-671-5p overexpression on pancreatic cancer capan-1 cell proliferation and apoptosis

表3 TNFAIP8 過表達(dá)逆轉(zhuǎn)了miR-671-5p 過表達(dá)對(duì)胰腺癌capan-1 細(xì)胞增殖和凋亡的作用（n=9，±s）Tab 3 TNFAIP8 overexpression reversed the effect of miR-671-5p overexpression on pancreatic cancer capan-1 cell proliferation and apoptosis （n=9，±s）

表3 TNFAIP8 過表達(dá)逆轉(zhuǎn)了miR-671-5p 過表達(dá)對(duì)胰腺癌capan-1 細(xì)胞增殖和凋亡的作用（n=9，±s）Tab 3 TNFAIP8 overexpression reversed the effect of miR-671-5p overexpression on pancreatic cancer capan-1 cell proliferation and apoptosis （n=9，±s）

*P＜0.05 vs miR-NC；#P＜0.05 vs miR-671-5p+pcDNA

Group TNFAIP8 protein OD 490 Apoptosis rate（%）Cyclin D1 protein p21 protein Bcl-2 protein Bax protein 24 h 48 h 72 h miR-NC 0.64±0.06 0.35±0.04 0.74±0.06 1.13±0.09 7.36±0.73 0.72±0.07 0.24±0.03 0.67±0.06 0.35±0.03 miR-671-5p 0.22±0.03* 0.32±0.03 0.47±0.04* 0.62±0.06* 20.66±2.08* 0.30±0.03* 0.62±0.06 0.28±0.03 0.82±0.08 miR-671-5p+pcDNA 0.20±0.03 0.31±0.03 0.44±0.04 0.57±0.05 21.98±2.23 0.28±0.03 0.64±0.05 0.26±0.03 0.83±0.07 miR-671-5p+pcDNA-TNFAIP8 0.53±0.05# 0.34±0.03 0.63±0.05# 0.93±0.08# 12.69±1.24# 0.61±0.05# 0.35±0.03# 0.55±0.05# 0.46±0.04#

TNFAIP8，也被稱為NDEN 或SCCS2，編碼一種抗凋亡蛋白。研究顯示TNFAIP8 在宮頸癌[13]和卵巢癌[14]等多種人類惡性腫瘤中表達(dá)上調(diào)并具有致癌作用。TNFAIP8 的表達(dá)上調(diào)與食管鱗癌患者的腫瘤分期、浸潤(rùn)程度、遠(yuǎn)端轉(zhuǎn)移、淋巴和靜脈侵犯以及不良預(yù)后顯著相關(guān)[15]。TNFAIP8 還影響上皮性卵巢癌、非小細(xì)胞肺癌對(duì)鉑類化療藥的耐藥性[16-17]。TNFAIP8 還促進(jìn)前列腺癌細(xì)胞的生存和對(duì)多西他賽的耐藥[18]。本研究結(jié)果顯示，胰腺癌組織中TNFAIP8 的表達(dá)水平顯著升高，與前人研究結(jié)果相吻合[19]。進(jìn)一步研究證實(shí)TNFAIP8 是miR-671-5p 的直接靶點(diǎn)，且miR-671-5p 在轉(zhuǎn)錄后水平負(fù)調(diào)控TNFAIP8 表達(dá)。干擾TNFAIP8 表達(dá)抑制胰腺癌細(xì)增殖并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，過表達(dá)TNFAIP8 可逆轉(zhuǎn)miR-671-5p 過表達(dá)對(duì)胰腺癌細(xì)胞增殖、凋亡及其相關(guān)蛋白表達(dá)的影響。提示miR-671-5p 通過下調(diào)TNFAIP8 表達(dá)在胰腺癌中發(fā)揮抑癌基因作用。由于TNFAIP8 在胰腺癌[7]和肺癌[20]等惡性腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移中發(fā)揮促進(jìn)作用，今后將探討miR-671-5p 調(diào)控TNFAIP8 表達(dá)對(duì)胰腺癌侵襲轉(zhuǎn)移的影響。

綜上所述，miR-671-5p 在胰腺癌組織中呈低表達(dá)。miR-671-5p 通過靶向TNFAIP8 抑制細(xì)胞增殖，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，從而在胰腺癌中發(fā)揮抑癌基因作用。本研究提示miR-671-5p 可能是胰腺癌早期診療的潛在靶點(diǎn)。