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        食用菌多糖分析方法研究進展

        2020-10-29 06:17:36邵雙宇司夏利張巖松屠鵬飛張慶英
        食品科學 2020年19期
        關鍵詞:單糖檢測器食用菌

        邵雙宇,司夏利,張巖松,屠鵬飛,張慶英,

        (1.北京大學醫(yī)學部藥學院,天然藥物及仿生藥物國家重點實驗室,北京 100191;2.洛陽師范學院食品與藥品學院,河南 洛陽 471934)

        食用菌在我國具有悠久的食用和藥用傳統(tǒng),而食用菌功效與其多糖密切相關[1],其中香菇、靈芝、羊肚菌、黑木耳和銀耳等食用菌的多糖備受研究者關注?,F(xiàn)代藥理學研究表明食用菌多糖具有廣泛的生物學活性[2-3],有望從中發(fā)現(xiàn)療效顯著、安全性高的多糖類藥物,如香菇多糖可用于癌癥的輔助治療[4],羊肚菌多糖可以減輕人肺泡上皮細胞氧化損傷[5],而靈芝多糖可以減少糖尿病大鼠腸道有害菌群進而調節(jié)血糖[6]等。食用菌多糖的活性與理化性質、化學結構密切相關,但是由于多糖分子質量大、結構復雜,對其準確測定具有較大挑戰(zhàn)。近年來多種多糖分析方法用于食用菌多糖研究,分析方法繁多,不同方法的特點各不相同。雖有涉及食用菌多糖提取、分離、純化和分析方法的綜述,但多側重于對某一種食用菌多糖結構與活性的歸納總結,如銀耳多糖[7]、雙胞菇多糖[8]、杏鮑菇多糖[9]、黑木耳多糖[10]等,關于食用菌多糖分析方法的系統(tǒng)、全面綜述目前鮮見報道。本文系統(tǒng)查閱了Web of Science、PubMed、SciFinder Academic和中國知網(wǎng)等數(shù)據(jù)庫,對近20 年有關食用菌多糖提取、分離、純化和分析方法的文獻進行歸納總結,對比分析各種方法,旨在為食用菌多糖的深入研究提供參考。

        1 食用菌多糖的提取

        1.1 水提取法

        水提取法是提取多糖的傳統(tǒng)方法,按照提取方式可分為煎煮法[11]和浸提法[12],按照水的狀態(tài)可分為常壓熱水提取法和亞臨界水提取法,按照pH值不同分為中性水提取法、酸水提取法和堿水提取法[13]。常壓熱水提取法使用廣泛,在提取食用菌多糖時可和其他方法結合,例如酶聯(lián)熱水提取法[14]。亞臨界水提取法通過增加壓力使水在高溫下保持液態(tài),這種高溫可以破壞食用菌的細胞壁,有助于水溶劑滲透,且能降低多糖溶液黏度、加快分子運動速率,達到更高的提取效率,如陶瑞霄等[15]于120 ℃下提取銀耳多糖40 min,得到銀耳粗多糖的提取率為62.31%。

        1.2 超聲提取法

        超聲提取法主要利用超聲波的機械效應、空化效應及熱效應,提高分子運動速率和溶劑穿透能力,進而提高提取效率。超聲提取法可與其他技術聯(lián)用,進一步提高提取率,如Zhang Jixian等[16]使用亞臨界水提技術處理香菇,再使用超聲處理,采用響應面法優(yōu)化各項參數(shù),香菇多糖提取率在最佳條件下可以達到17.34%。

        1.3 微波提取法

        微波提取法利用極性溶劑在微波作用下的偶極轉動和離子傳導遷移,加速樣品與溶劑之間的物質傳遞[17]。微波提取法常與其他技術聯(lián)用以提高多糖提取率,如黃瓊等[18]首先使用果膠酶處理金針菇1.5 h,再使用微波法提取3 次,每次90 s,金針菇多糖提取率為21.76%。

        1.4 復合酶提取法

        適量的水解酶有利于破壞食用菌的細胞壁,使多糖更易被提取,常用酶有纖維素酶、半纖維素酶和果膠酶[19]等。復合酶提取法可與其他技術聯(lián)用,如超聲波協(xié)同酶解并結合亞臨界水提取法[20],以提高多糖提取率、縮短提取時間。

        1.5 其他提取方法

        為了能在較低的溫度下高效快捷地提取食用菌多糖,許多新興技術被應用于食用菌多糖提取。超臨界流體提取法通過加入高極性夾帶劑可以提取分子質量較小的食用菌多糖,如金凌云等[21]對比了超臨界流體提取法和幾種常規(guī)提取方法,發(fā)現(xiàn)超臨界流體提取法在提取灰樹花多糖時雖然提取率較低,但是多糖純度更高。閃式提取法在室溫下利用強力攪拌產(chǎn)生的剪切力將食用菌高度粉碎,并在局部負壓滲透作用下快速高效提取多糖[22],如秦令祥等[23]利用閃式提取法提取香菇多糖,響應面法優(yōu)化實驗條件,多糖提取率可達6.38%。

        1.6 食用菌多糖的提取方法總結

        表1總結了這些提取方法的優(yōu)缺點、影響因素以及在食用菌多糖提取方面的應用。

        表1 食用菌多糖提取方法Table 1 Extraction methods for edible mushroom polysaccharides

        2 食用菌多糖的分離、純化

        多糖的分離、純化是指除去粗多糖中的蛋白質、氨基酸、色素及水溶性小分子等雜質,并進一步采用分級沉淀法、色譜柱法、膜分離法等得到分子質量較為均一的精多糖。

        2.1 雜質去除法

        以水作為溶劑提取多糖時,會將水溶性雜質如蛋白質、氨基酸和其他水溶性小分子提取出來,因此需要在后續(xù)實驗中除去。脫除蛋白常用Sevag法、三氯乙酸(trichloroacetic acid,TCA)法和酶法,表2總結了這3 種方法的操作原理和優(yōu)缺點。

        表2 食用菌多糖脫蛋白方法Table 2 Methods for removing proteins from edible mushroom polysaccharides

        多糖脫色方法有氧化脫色法、活性炭法、大孔樹脂法、離子交換法等[41]。氧化脫色法[42]操作簡便、不引入雜質,其他3 種方法利用吸附原理,將多糖與色素分離,操作相對繁瑣,且脫色效果不一,如吳小燕[43]在堿性條件下利用過氧化氫氧化除去黑木耳多糖色素。粗多糖中的水溶性小分子常用透析法[38]和超濾法[44]除去,超濾法可同時實現(xiàn)多糖的純化和濃縮,相比于透析法要更加高效,但是成本稍高,如蔡銘等[45]利用分子質量3 000 Da的納濾膜除去猴頭菇多糖中的水溶性小分子。

        2.2 分級沉淀法

        分級沉淀法是利用不同多糖在有機溶劑中溶解度變小易沉淀而將多糖分離的方法,如Liu Yanfang等[46]利用乙醇分級沉淀法得到分子質量約為3.75×106Da的赤芝多糖。

        2.3 色譜柱法

        色譜柱法是純化分離多糖的常用方法,一般先使用離子交換色譜將酸性多糖與中性多糖分離,再通過凝膠色譜得到均一多糖。常用的離子交換色譜填料有二乙基氨基乙基纖維素(diethylaminoethyl cellulose,DEAE)和離子交換樹脂,常用的凝膠色譜填料有瓊脂糖[47]、葡聚糖[48]、聚丙烯酰胺葡聚糖[49]等。Zhang Ying等[50]利用DEAE陰離子交換色譜分離黑木耳中的酸性多糖和中性多糖,再用聚丙烯酰胺葡聚糖進一步分離得到兩種較為均一的黑木耳多糖。

        2.4 膜分離法

        膜分離法是一種以不同透過性的膜作為分離介質來分離不同粒徑物質的技術。膜分離法通過使用不同相對分子質量的超濾膜,可同時實現(xiàn)多糖的純化和濃縮。Chang等[51]利用分子質量10、300 kDa的超濾膜和醇沉法將靈芝多糖分為低聚糖、小于10、10~300 kDa和大于300 kDa的4 種不同分子質量的靈芝多糖,活性研究發(fā)現(xiàn)大于300 kDa的靈芝多糖對于小鼠腸道菌群調節(jié)作用更為突出。

        2.5 高速逆流色譜法

        高速逆流色譜(high-speed counter-current chromatography,HSCCC)法是一種無固定相載體的液-液分配色譜,利用樣品在兩相中的分配能力不同進行分離純化。如Song Guanglei等[52]用聚乙二醇1 000-K2HPO4-KH2PO4-H2O兩相體系將毛木耳粗多糖分離純化成分子質量為162、259 kDa和483 kDa的3 種較為均一的多糖。

        2.6 非對稱流場流分離法

        非對稱流場流分離(asymmetrical flow field-flow fractionation,AF4)法是利用不同分子粒徑的樣品在載液的層流作用下形成拋物線形輪廓,分子粒徑越小越靠近拋物線中心,則被更快洗脫。Wu Dingtao等[53]研究對比AF4和高效凝膠滲透過濾色譜(high performance gel permeation filtration chromatography,HPGPC)對于銀耳多糖的分離效果,發(fā)現(xiàn)AF4更適合分離銀耳多糖這種會在HPGPC色譜柱上產(chǎn)生異常色譜行為的多糖。

        2.7 食用菌多糖的分離、純化方法總結

        表3總結了不同分離、純化方法的優(yōu)缺點、常用試劑和色譜柱材料等。

        表3 食用菌多糖分離、純化方法Table 3 Isolation and purification methods for edible mushroom polysaccharides

        3 食用菌多糖的定量分析

        食用菌多糖的生物活性和其絕對含量密切相關,因此多糖含量一直是行業(yè)內控制其質量的重要指標。從原理上講,食用菌多糖的定量方法包括直接測定法和間接測定法。

        3.1 直接測定法

        3.1.1 高效液相色譜-示差折光檢測器法

        高效液相色譜-示差折光檢測器(high performance liquid chromatography-refractive index detector,HPLCRID)法使用多糖專用色譜柱,且以已知多糖(如葡聚糖)作為對照品,可以直接計算待測多糖的含量。此法操作簡單,但測定結果受標準品影響較大。如韓振泰等[58]采用分子質量10 kDa葡聚糖作為標準品,使用多糖專用分析柱,采用HPLC-RID法直接測定靈芝多糖含量。

        3.1.2 近紅外光譜法

        近紅外光譜法與化學計量學算法結合,通過構建多糖含量預測模型來用于多糖含量測定。如賴長江生等[12]收集了來自4 個省份的47 份靈芝樣品,采用近紅外光譜分析靈芝藥材粉末,苯酚-硫酸法測定總多糖含量,偏最小二乘回歸法建立總多糖含量預測模型,進而測定靈芝多糖的含量。該法雖然可以實現(xiàn)無損檢測,但是需要收集大量樣品、建模過程復雜、預測結果準確度有待考察,并未被廣泛應用。

        3.2 間接測定法

        3.2.1 比色法

        比色法被廣泛應用于食用菌多糖的含量測定,其原理是多糖水解后的單糖在硫酸作用下生成糖醛衍生物,然后與苯酚、蒽酮、咔唑等縮合成有色化合物,在適當?shù)牟ㄩL和濃度范圍內吸光度與多糖的濃度成正比。常用的比色方法包括苯酚-硫酸法、蒽酮-硫酸法、硫酸-咔唑法和硫酸-間羥基聯(lián)苯法等,其中前兩種主要用于多糖的總糖含量測定,后兩種主要用于酸性糖(糖醛酸)的含量測定[59]。由于比色法一般使用葡萄糖作為對照品,而實際多糖樣品中單糖組成復雜,不同單糖顯色程度不一,使此方法的準確性受到質疑,但是比色法成本低廉、操作簡單,目前仍被廣泛使用。Xu Yu等[60]使用苯酚-硫酸法測定靈芝多糖和超聲降解多糖的總糖含量,發(fā)現(xiàn)二者含量幾乎相同。Chen等[61]使用比色法測定的黑木耳粗多糖中總糖質量分數(shù)和糖醛酸質量分數(shù)分別為42.5%和19.6%。

        3.2.2 高效液相色譜法

        HPLC法可以通過測定多糖水解后單糖的含量之和,間接推算多糖含量。此法測定單糖含量時又可以分為非衍生化法和衍生化法,具體方法特點參考單糖測定方法。由于HPLC法間接測定多糖含量存在操作繁瑣、多糖水解不徹底等缺點而未能得到廣泛應用,不過其準確度比傳統(tǒng)比色法高,是目前較好的替代方法。張國偉等[62]采用HPLC-RID法測量豬苓多糖水解后單糖含量,相加后得到豬苓多糖含量,并與比色法測定豬苓多糖含量對比發(fā)現(xiàn)HPLC-RID法具有更好的精密度。

        4 食用菌多糖的定性分析

        多糖定性分析包括單糖組成分析、分子質量分析、低級結構表征和高級結構表征。目前食用菌多糖結構的表征方法仍然以傳統(tǒng)化學方法為主,儀器方法為輔。值得一提的是,由李紹平等[63]提出的糖譜法逐漸被廣泛接受,此方法以圖譜形式展現(xiàn)水解后的單糖和低聚糖,可以直觀地表征多糖結構片段。

        4.1 單糖組成分析方法

        單糖組成分析方法可分為衍生化法和非衍生化法。衍生化法常用氣相色譜-質譜(gas chromatography-mass spectrometry,GC-MS)聯(lián)用法和HPLC-紫外檢測器(ultraviolet detector,UV)法。近些年也出現(xiàn)一些非衍生化方法,這些方法無需將單糖衍生,實驗過程簡單,可以快速鑒定單糖組成。

        4.1.1 氣相色譜-質譜法

        GC-MS法在食用菌單糖組成分析領域應用廣泛,但由于單糖本身沒有揮發(fā)性,因此需將單糖衍生化為可揮發(fā)、熱穩(wěn)定的衍生物后,方可進行GC-MS分析。常用單糖衍生物有糖腈乙酸酯衍生物、糖醇乙酸酯衍生物、三甲基硅醚衍生物和糖肟三甲基硅醚衍生物[64]。單糖的硅烷化會產(chǎn)生多個衍生物異構體,即使一種單糖也會產(chǎn)生多個衍生物峰,因此不利于單糖鑒定,單糖乙酸酯衍生物很好地解決了硅烷化的問題。Cheng Hua等[65]將松茸多糖TMP-5II水解并乙?;?,利用GC-MS分析得到其單糖組成為D-葡萄糖、D-巖藻糖、D-甘露糖和D-半乳糖。

        4.1.2 高效液相色譜-紫外檢測器法

        由于單糖沒有紫外吸收基團,因此采用HPLC-UV法分析單糖組成同樣需要衍生化,常用的衍生化試劑有1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(1-phenyl-3-methyl-5-pyrazolinone,PMP)、對氨基苯甲酸、2-氨基吡啶和N,N-二甲基氨基萘-5-磺酰肼等。Cao Hui等[66]將雞腿菇胞內和胞外多糖使用三氟乙酸水解成單糖,PMP衍生化后采用HPLC-UV分析其單糖組成。

        4.1.3 高效毛細管電泳法

        高效毛細管電泳(high performance capillary electrophoresis,HPCE)法是以高壓電場為驅動力,以毛細管為分離通道,依據(jù)樣品中各組分遷移速率不同而實現(xiàn)物質分離的液相技術。該法檢測單糖時需要使用PMP衍生,使其帶電并且能被紫外檢測器檢識[67]。由于此法相比GC-MS法、HPLC-UV法并不能解決單糖衍生的問題且儀器普及率低,使其在食用菌單糖檢測方面應用不多。

        4.1.4 高效液相色譜-質譜法

        MS作為一種通用檢測器,從原理上在檢測單糖時可以不經(jīng)衍生化直接檢測,但由于單糖種類多、結構相似且多為立體異構體、分離難度大,因此采用HPLC-MS法進行食用菌單糖組成分析時常常采用PMP柱前衍生化[68]。

        4.1.5 高效液相色譜-示差折光檢測器法

        RID作為通用檢測器與HPLC聯(lián)用可以直接檢測單糖,但如何獲得較好的單糖分離度是本方法的難點。同時RID的缺點限制了該方法在本領域的應用。

        4.1.6 高效液相色譜-蒸發(fā)光散射檢測器法

        蒸發(fā)光散射檢測器(evaporative light scattering detector,ELSD)法常用于無紫外吸收和揮發(fā)性低于流動相的成分檢測。與其他通用型檢測器相比,ELSD靈敏度較低,并且由于單糖分離困難等原因,使得其在食用菌單糖檢測方面應用不多。

        4.1.7 高效液相色譜-電噴霧檢測器法

        電噴霧檢測器(charged aerosol detection,CAD)與ELSD和RID類似,是一種不依賴被測物化學結構的通用型檢測器,特別適用于無紫外吸收的非揮發(fā)性成分的檢測。與ELSD相比,CAD靈敏度和精密度更高,動態(tài)檢測范圍更廣,與RID相比其受溫度影響較小且可以梯度洗脫,但同樣單糖分離困難限制了該方法的應用。

        4.1.8 高效陰離子交換色譜-脈沖安倍檢測器法

        高效陰離子交換色譜-脈沖安倍檢測器(h i g h performance anion exchange chromatography-pulse ampere detector,HPAEC-PAD)通過測量單糖在適當電位下的工作電極表面發(fā)生氧化還原反應時所產(chǎn)生的電流變化而對其進行測定。HPAEC分離單糖的原理與傳統(tǒng)糖分析柱不同,對單糖立體異構體分離度較好,有望被廣泛使用,如Chen Yun等[69]采用HPAEC-PAD法分析松茸多糖的單糖組成為L-巖藻糖、D-半乳糖、D-葡萄糖、D-木糖和D-甘露糖。

        4.1.9 食用菌單糖組成分析方法總結

        表4總結了各種單糖組成分析方法的特點、常用色譜柱和流動相。

        表4 食用菌單糖組成分析方法Table 4 Methods for monosaccharide composition analysis of edible mushroom polysaccharides

        4.2 多糖分子質量分析方法

        多糖的理化性質和生物活性與其分子質量及分布密切相關,因此準確測定其分子質量十分必要。但由于多糖分子質量大且分布范圍較廣,目前無法像小分子一樣測定多糖的精確分子質量。

        4.2.1 HPGPC結合多糖標準品對照法

        HPGPC與RID[82]、ELSD[56]和CAD[28]等通用檢測器聯(lián)用,通過測定系列多糖標準品的保留時間,建立多糖標準品分子質量與保留時間的標準曲線,然后根據(jù)標準曲線和待測多糖的保留時間計算得到待測多糖的分子質量。這種方法的測定結果與標準品的選擇密切相關,可能存在較大誤差。Song Guanglei等[82]利用HPGPC-RID分析黑木耳多糖,基于一系列葡聚糖標準品建立的標準曲線計算得到黑木耳多糖的分子質量為1.20×106Da。

        4.2.2 HPGPC-多角度激光散射檢測器法

        HPGPC聯(lián)用多角度激光散射檢測器(multiangle laser light scattering,MALLS)法是利用散射光光強與分子質量和溶液濃度成正比,將HPGPC和MALLS聯(lián)用,表征粗多糖分子質量及其分布的方法[83]。與傳統(tǒng)方法相比,該法不需要對照品,更加準確高效。如Xia Yonggang等[84]利用HPGPC-MALLS測定了黑木耳粗多糖中4 個色譜峰的分子質量分別為4.342×106、4.572×105、4.408×104kDa和6.991×104kDa。吳定濤等[85]利用HPGPC-MALLS測定了6 批不同產(chǎn)地的長裙竹蓀多糖,得到了多糖分子質量和分散指數(shù),表征了不同地區(qū)竹蓀多糖的差異。

        4.3 多糖結構表征方法

        4.3.1 低級結構表征方法

        4.3.1.1 儀器方法

        核磁共振氫譜(1H nuclear magnetic resonance,1H NMR)、核磁共振碳譜(13C nuclear magnetic resonance,13C NMR)和傅里葉變換紅外光譜(Fourier transform infrared spectrum,F(xiàn)T-IR)常被用來表征多糖低級結構。一般情況下,呋喃環(huán)的端基質子信號在化學位移δ5.4左右,J1,2<2 Hz,而吡喃環(huán)α-構型的糖殘基端基質子信號在δ4.8~5.3,碳信號在δ98~103,β-構型分別為δ4.4~4.8、δ103~108[86]。Zhang Ying等[50]利用核磁共振技術測定黑木耳胞外多糖端基質子信號分別為δ4.9和δ5.3,結合碳譜及其他實驗將這兩個氫信號分別歸屬為(1→4)-α-D-Glcp和(1→6)-α-D-Glcp的端基質子。

        在多糖的FT-IR圖譜中吡喃環(huán)α-端基和β-端基差向異構體C-H振動分別在840~810 cm-1和890~870 cm-1,而呋喃環(huán)的α-端基和β-端基差向異構體信號基本出現(xiàn)在820~780 cm-1[50,87]。He Jinzhe等[88]利用FT-IR檢測了4 種食用菌的多糖,發(fā)現(xiàn)它們在880 cm-1左右具有典型的吡喃環(huán)β-糖苷鍵峰型,利用FT-IR初步表征了這4 種食用菌多糖糖苷鍵類型。

        4.3.1.2 化學方法

        甲基化[89]和高碘酸氧化、Smith降解[90]仍然是目前多糖結構表征的重要方法。甲基化反應通過將多糖水解部分甲基化來判斷糖苷鍵類型、多糖分支和取代程度;高碘酸氧化通過測定甲酸的生成量和高碘酸消耗量,獲得糖苷鍵連接方式及其比例;Smith降解是將高碘酸氧化產(chǎn)物還原后酸水解再衍生,之后使用氣質分析產(chǎn)物以此判斷糖苷鍵連接方式和比例。Li Jia等[74]從靈芝中分離、純化得到兩種多糖GLP-1和GLP-2,通過甲基化反應發(fā)現(xiàn)→6)-β-D-Glcp-(1→和→3)-β-D-Glcp-(1→這兩種結構片段在GLP-1中比例為38.2∶13.1,在GLP-2中比例為50.3∶13.7。Liu Jicheng等[91]使用高碘酸氧化和甲基化,發(fā)現(xiàn)→6)-α-Galp-(1→、→2,6)-α-Glcp-(1→和→α-Glcp-(1→這3 種結構在猴頭菇多糖中比例為1∶1∶1。

        4.3.2 高級結構表征方法

        4.3.2.1 儀器方法

        原子力顯微鏡(atomic force microscope,AFM)、掃描電子顯微鏡(scanning electron microscope,SEM)和透射電子顯微鏡(transmission electron microscopy,TEM)都可以對多糖單分子和聚集體成像,觀察多糖表面形態(tài)特征[92]。圓二色譜(circular dichroism,CD)利用具有三股螺旋結構的多糖可以與剛果紅在堿性條件下,190~200 nm波長處產(chǎn)生許多異常峰來檢測多糖立體構象[92]。Li Jia等[74]利用AFM證實從靈芝中提取純化得到的兩種多糖GLP-1和GLP-2的形態(tài)分別為無定形線狀和短棒狀。Ma Lishuai等[93]采用SEM觀察分別以真空冷凍干燥、熱風干燥和真空干燥制得的白樺茸多糖的分子表面形態(tài),發(fā)現(xiàn)真空冷凍干燥多糖為蓬松面粉狀,而熱風干燥和真空干燥多糖則為致密的小石子狀。

        4.3.2.2 化學方法

        剛果紅可與具有三股螺旋鏈的多糖形成絡合物,在堿性溶液中絡合物的最大波長與剛果紅比較會發(fā)生紅移,因此利用剛果紅反應可以判斷多糖是否為三股螺旋結構[75]。Liu Jicheng等[91]使用剛果紅反應證實姬松茸多糖具有三股螺旋結構。Ma Fengming等[94]從黑木耳中提取多糖,并使用過氧化氫等離子體降解溶液降解該多糖,使用剛果紅反應發(fā)現(xiàn)黑木耳多糖與降解后的多糖都不具有三股螺旋結構。

        4.3.3 食用菌多糖結構表征方法總結

        表5總結了食用菌多糖結構表征的常用方法及其結構。

        表5 食用菌多糖結構表征方法Table 5 Methods for structural analysis of edible mushroom polysaccharides

        4.4 糖譜法

        傳統(tǒng)多糖定性方法的一般步驟是多糖提取、分離、純化、純度鑒別、單糖組成分析、分子質量測定和結構表征(如糖苷鍵的類型、糖鏈重復單元、高級結構等),操作過程復雜冗長,不利于多糖的快速定性分析。李紹平[63]和Guan Jia[95]等提出糖譜法可用于多糖定性定量分析,該方法通過系列定位酶切技術聯(lián)用各種色譜技術(HPGPC、高效薄層色譜)、熒光輔助凝膠電泳(polysaccharide analysis by carbohydrate gel electrophoresis,PACE)等,同時結合多糖活性評價,可實現(xiàn)基于活性結構特征的多糖定性分析,并成功應用于食用菌多糖的質量控制。如吳定濤等[85]利用三氟乙酸和β-1,3-葡聚糖苷酶、β-葡聚糖苷酶、α-淀粉酶等水解酶將竹蓀多糖水解后與PACE技術聯(lián)用,比較不同產(chǎn)地長裙竹蓀多糖結構差異,結果表明不同產(chǎn)地的長裙竹蓀多糖具有較高的相似性。

        5 結 語

        本文系統(tǒng)總結了食用菌多糖提取、分離、純化和定性、定量分析方面的文獻。總體來看,近年來國內外對食用菌多糖的研究逐漸增多,并取得了很多新的進展,多糖領域的許多技術在食用菌多糖研究中得以廣泛應用,研究方法也更加全面。但是仍有一些多糖研究技術未在食用菌多糖領域應用,如可提取植物多糖的低共溶溶劑提取法[96]、基于多糖濃度與多糖比折光指數(shù)增量值的關聯(lián)方程直接計算中藥多糖含量的HPGPC-MALLSRID法[97]、對食品中非淀粉多糖定量的GC-MS法[98]等。食用菌多糖在未來具有廣闊的應用前景,但目前其分離、純化和定性、定量分析等相關化學研究方法和技術體系還不夠完善,仍然比較依賴傳統(tǒng)方法,缺乏快速精準的分析手段,限制了人們對食用菌多糖的認識。相信隨著科學技術的發(fā)展,多糖化學研究方法和技術體系將日趨成熟和完善,對食用菌多糖結構和活性研究也將會取得更大進步。

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