匡繼才，濮永華*，肖嘯，龔興建，周開艷，段寧，楊新周，楊家恒，張繼平

(1.保山市動物疫病預防控制中心，云南 保山 678000； 2.云南農(nóng)業(yè)大學動物醫(yī)學院，云南 昆明 650201；3.龍陵縣動物疫病預防控制中心，云南 龍陵 678300；4.龍陵縣勐糯鎮(zhèn)畜牧獸醫(yī)工作站，云南 龍陵 678307)

安格斯牛原產(chǎn)于英國蘇格蘭東北部，目前分布于世界各地，對環(huán)境的適應(yīng)性強，生長發(fā)育快，早熟，易肥，胴體品質(zhì)好，凈肉率高，大理石花紋明顯，是生產(chǎn)雪花牛肉的主要肉牛品種，1974年后我國開始陸續(xù)從英國和澳大利亞引進安格斯牛[1]。牛巴貝斯蟲病是由巴貝斯科巴貝斯屬的原蟲寄生于牛紅細胞內(nèi)引起的疾病，舊名稱為“焦蟲病”，又稱“蜱熱”，臨床特征為高熱、貧血、黃疸、血紅蛋白尿[2]。巴貝斯蟲是一種血液寄生蟲，蜱為主要的傳播媒介，對紅細胞感染率為5%～10%，嚴重的可達30%～40%，臨床以出血、高熱、呼吸困難、心衰、牛胃有硬物等為主要特征，剖檢見脾臟、腎臟、淋巴結(jié)等腫大。巴貝斯蟲對各種家畜和人危害嚴重，多年來，為了控制巴貝斯蟲病，世界各國均開展了大量的研究工作。近年來，保山市龍陵縣制定激勵政策大力發(fā)展肉牛產(chǎn)業(yè)，而本地能繁母牛來源不足，需大量跨省跨國購進母牛，所以對巴貝斯蟲病的有效防治尤顯重要。

1 發(fā)病情況

2019年9月2日，龍陵縣勐糯鎮(zhèn)某牛場從澳大利亞引進的一群安格斯牛部分出現(xiàn)精神沉郁，其中10頭出現(xiàn)體溫升高、食欲減退或廢絕、排淡紅或黑紅色尿液、站立不穩(wěn)的癥狀。該鎮(zhèn)獸醫(yī)站技術(shù)人員按胃腸道疾病、農(nóng)藥殘留中毒治療9頭，未見療效，1周內(nèi)死亡4頭，在市級專家開展診斷期間又相繼死亡3頭。觀察全群，挑出病牛，400頭安格斯牛先后發(fā)病13頭，死亡7頭，發(fā)病率3.25%，病死率53.85%。

2 臨床癥狀

患病牛出現(xiàn)體溫升高，食欲減退，反芻減少或不反芻，有的牛還會出現(xiàn)便秘或腹瀉，甚至是交替出現(xiàn)，呼吸加快，站立不穩(wěn)，黏膜蒼白，口鼻流液，排尿頻繁，尿色呈淡紅色或黑紅色，死亡后口鼻流出泡沫狀液體，尸體腹部鼓氣、四肢僵直等。發(fā)病牛多在一周內(nèi)死亡。

3 病理剖檢

剖檢病死牛2頭，可見皮下組織和肌間脂肪黃染；鼻腔內(nèi)有瘀血和出血點；淋巴結(jié)腫大，切面有暗紅色病灶；心包積液，心臟瘀血，表面和心內(nèi)膜出血；肝臟呈棕黃色，有灰白色結(jié)節(jié)和暗紅色病灶；脾臟腫大、質(zhì)脆，脾髓色暗，脾細胞突起；肺臟腫大，有肉樣病變，纖維素性炎癥，與胸膜粘連；膽囊腫大，充滿濃稠膽汁；腎臟腫大，淡紅黃色；瘤胃積食，瓣胃阻塞、內(nèi)容物干硬，皺胃大面積出血，內(nèi)容物為血水樣；膀胱膨大，內(nèi)有血水樣內(nèi)容物；鼻腔內(nèi)有瘀血和出血點。

4 實驗室檢測

4.1 主要儀器

超凈工作臺、光學顯微鏡、PCR儀、電泳儀等。

4.2 主要試劑

姬姆薩染色試劑盒購自北京百奧萊博科技有限公司，核酸提取試劑盒及PCR相關(guān)試劑購自北京索萊寶科技有限公司，核酸染色劑購自大連寶生物有限公司，引物由生工生物工程(上海)股份有限公司提供，引物見表1。

表1 引物

4.3 姬姆薩染色鏡檢

取血樣滴至清潔載玻片右1/3處， 用另一塊載玻片以45°角接觸血滴，由右向左將血滴推成均勻的火焰狀薄層，自然晾干，放入染缸染色2min，取出用水輕輕洗去多余染液。400×目鏡鏡檢，結(jié)果顯示紅細胞內(nèi)有巴貝斯蟲蟲體。

4.4 PCR病原學檢測

參照核酸提取試劑盒說明提取DNA。反應(yīng)體系為Premix TaqTM25μL、RNase Free dH2O 22 μL、上游引物1μL、下游引物1μL、模板1μL。反應(yīng)條件：MS1/ MS2為第一套引物，PCR反應(yīng)程序為 95℃ 5min；95℃ 30s，56℃ 30s，72℃ 60s,30個循環(huán)；72℃ 10min，4℃保存。 MS3/ MS4為第二套引物，PCR反應(yīng)程序為95℃ 5min；95℃ 30s、55℃ 30s，72℃ 60s,30個循環(huán)；72℃ 10min,4℃保存。

電泳：取10μL PCR擴增產(chǎn)物于1.5%的瓊脂糖凝膠電泳。陽性PCR擴增產(chǎn)物進行測序,將測序結(jié)果在BLAST進行比對。檢測結(jié)果為陽性，354bp處出現(xiàn)目的條帶。如圖1所示。

1～9.牛全血樣品；-.陰性對照；M.DL 2000 DNA Marker。

5 治療結(jié)果

使用貝尼爾(血蟲凈)注射殺蟲，病牛按每千克體重3.5～4mg計算，用生理鹽水配成5%～7%的溶液，在50℃水中水浴10min以上，深部肌肉注射，間隔48h后再注射1次。對重癥病牛進行抗貧血治療，靜脈注射葡萄糖生理鹽水、維生素C、維生素B12和補血的藥物；肌肉注射科特壯增強免疫力和促進新陳代謝；心臟衰弱的注射強心劑；食欲不振的病牛投服消食健胃劑；并發(fā)呼吸道疾病的進行抗菌消炎。

經(jīng)過殺蟲和對癥治療后，患病牛全部治愈。且該牛場后期無該病發(fā)生。

6 小結(jié)與討論

6.1 病因分析

(1)牛感染巴貝斯蟲病主要因蜱蟲叮咬，也與牛自身的營養(yǎng)供應(yīng)、自然環(huán)境和社會條件等因素有關(guān)。

(2)保山市龍陵縣勐糯鎮(zhèn)為干熱河谷地區(qū)，氣候炎熱，6—8月氣溫高達35℃，牛蜱等吸血昆蟲較多，歷史上曾發(fā)生過?！敖瓜x病”，診斷過程中在發(fā)病牛群體表找到大量牛蜱，多則20～30個，少則5～6個。本次國外引進肉牛，剛好在夏秋換季，草料由青貯料改為全株青玉米，正值發(fā)情配種期(病死牛均為孕畜)。被牛蜱叮咬感染后，受換季、換草料、配種等外部條件變化影響誘發(fā)本病。

(3)當?shù)孬F醫(yī)人員按胃腸疾病、農(nóng)藥殘留中毒進行治療，未見療效，甚至加速死亡。經(jīng)現(xiàn)場調(diào)查，該牛場存欄牛650頭，其中安格斯牛400頭、西門塔爾212頭、云嶺牛24頭、本地黃牛14頭。近兩個月來，全部牛均飼喂當?shù)禺a(chǎn)全株青玉米，當天收割切碎當天飼喂。因當?shù)叵募景l(fā)生過草地貪夜蛾蟲害，牛發(fā)病后懷疑全株青玉米農(nóng)藥殘留引起中毒，隨即改喂外地產(chǎn)玉米秸稈青貯料和皇竹草。飼喂同樣的草料，其他品種牛均未發(fā)病，僅安格斯牛群發(fā)病，由此排除胃腸疾病、農(nóng)藥殘留中毒。該群安格斯牛8個月前從澳大利亞引進，正在適應(yīng)期，抵抗力差，受牛蜱叮咬感染及氣候環(huán)境等條件變化的影響，發(fā)生巴貝斯蟲病的可能性較大。

(4)牛場的飼草主要以當?shù)氐母收嵘?、皇竹草、稻草、玉米秸稈等為主，沒有按照牛的營養(yǎng)需要“精、青、粗”合理搭配，從未補充蛋白質(zhì)飼料和微量元素，這是導致牛營養(yǎng)不良、體況變差的原因之一，故剖檢發(fā)現(xiàn)病死牛胃內(nèi)有土團和毛團。

(5)目前，各地都在大力發(fā)展養(yǎng)牛業(yè)，牛源偏緊，有的地方為了在短期內(nèi)購到大量的繁殖母牛，長途跨省區(qū)、跨境引進母牛，由于氣候環(huán)境、飼養(yǎng)條件變化大，誘發(fā)疾病或輸入疫病，給養(yǎng)殖場(戶)造成損失，危害當?shù)仞B(yǎng)牛業(yè)。本次發(fā)病的安格斯牛，從遙遠的澳洲漂洋過海到達龍陵縣勐糯鎮(zhèn)，飼養(yǎng)條件從廣闊草場放牧到全舍飼，氣候條件從南半球到北半球，旅途顛簸，季節(jié)交替，出現(xiàn)應(yīng)激。

6.2 防治措施

防治本病的關(guān)鍵在于消滅牛體表及周圍環(huán)境中的蜱[3]，也有報道稱感染病畜血液中會長期帶蟲，對周圍環(huán)境的牛會造成感染[4]，因此，在防治牛巴貝斯蟲感染時，要加強周期性的環(huán)境消毒和滅蟲工作。治療本病的藥物主要為血蟲凈(貝尼爾、三氮脒)、伊維菌素、咪唑苯脲[3]，注射血蟲凈時肌注一定量的鹽酸消旋山莨菪堿注射液可以消除副作用，再結(jié)合對癥治療和支持療法[5]。環(huán)境殺蟲使用0.5%敵百蟲[6]、0.05%雙甲脒液、0.1%～0.5%殺蟲脒溶液噴灑[3-7]。

通過典型的臨床癥狀和病理剖檢初診，再結(jié)合實驗室檢測技術(shù)確診本次牛因感染寄生蟲發(fā)病。采取針對性的治療方案和預防措施，近半年該牛場再未發(fā)生過此類感染，全場牛群健康狀況得到了顯著改善。說明及時準確的診斷、治療和預防措施有效。

6.3 管理措施

聘請專業(yè)技術(shù)人員和管理人員駐場，加大對基層獸醫(yī)人員特別是駐場獸醫(yī)和村級獸醫(yī)的培訓力度，提高養(yǎng)殖診療水平和防疫意識。建議規(guī)模場應(yīng)嚴格按照養(yǎng)殖技術(shù)要求，在運輸、進場飼養(yǎng)等過程中規(guī)范性管理。在引進繁殖母牛時，注意氣候、環(huán)境和飼喂條件的變化，進場前進行隔離，確保引進母牛健康。

致謝：本文實驗室檢測和文稿撰寫得到云南農(nóng)業(yè)大學動物醫(yī)學院代飛燕老師、張安潔碩士指導幫助，特此致謝！