郭克鋒 常英英 李宗民 柳玉花

肝細(xì)胞癌(HCC)是一種常見的惡性腫瘤,具有發(fā)展迅速、侵襲性強(qiáng)、預(yù)后差等特點(diǎn)[1-2]。長非編碼RNA(lncRNA)是指長度超過200個(gè)核苷酸，缺乏蛋白質(zhì)編碼能力的RNA[3]。很多l(xiāng)ncRNA已被證實(shí)在腫瘤中異常表達(dá)，參與各種腫瘤的發(fā)生和進(jìn)展過程[4]。這些異常表達(dá)的lncRNA可以作為生物學(xué)標(biāo)志物用于判斷腫瘤的進(jìn)展情況及評價(jià)預(yù)后[5-6]。

Cui等人[7]通過比較早期復(fù)發(fā)的有轉(zhuǎn)移的HCC組織和晚期復(fù)發(fā)的無轉(zhuǎn)移的HCC組織的lncRNA表達(dá)譜，確定了SNHG7可能參與HCC細(xì)胞轉(zhuǎn)移，并在體外證實(shí)SNHG7參與了肝細(xì)胞癌細(xì)胞的侵襲。然而，SNHG7與HCC患者臨床指標(biāo)及預(yù)后的關(guān)系尚未有相關(guān)報(bào)道。因此，本研究通過檢測SNHG7在HCC組織中的表達(dá)情況，分析其表達(dá)的臨床意義。

資料和方法

一、研究對象

本研究經(jīng)本院研究倫理委員會批準(zhǔn)，所有患者均獲得知情書面同意。組織從我院60例肝癌患者的術(shù)后腫瘤組織及相應(yīng)的正常肝組織標(biāo)本中采集，所有腫瘤均經(jīng)手術(shù)標(biāo)本病理證實(shí)。所有患者均未接受術(shù)前放化療，臨床基本特征見表1。

二、細(xì)胞培養(yǎng)

采用含90%DMEM高糖+10%FBS的培養(yǎng)基培養(yǎng)人肝癌細(xì)胞系HepG2、Huh6、Huh7、Hep3B和人正常肝細(xì)胞系LO2(ATCC)。細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境為37℃和5%二氧化碳。

三、組織RNA提取及qRT-PCR

根據(jù)說明書，用Trizol試劑(Invitrogen)提取總RNA。采用Primer- Script one step RT-PCR kit試劑盒(Takara)將RNA逆轉(zhuǎn)錄成cDNA，使用ABI Prism 7900HT(Biosystems)系統(tǒng)進(jìn)行qPCR。以GAPDH的表達(dá)為內(nèi)參，SNHG7的相對表達(dá)量用2-ΔΔCt法計(jì)算。引物序列，SNHG7-F: 5′-GTGTGTCCCT-TGGTGGAGAG-3′, SNHG7-R: 5′-TCCCAGATACCAGCG-AAGGA-3′；GAPDH-F: 5′-CGCTCTCTGCTCCTCCTGTTC-3′, GAPDH-R: 5′-ATCCGTTGACT-CCGACCTTCAC-3′。

四、統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS 17.0軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示。使用t檢驗(yàn)或χ2檢驗(yàn)比較兩組間差異，采用Kaplan-Meier法繪制生存曲線，Cox比例風(fēng)險(xiǎn)回歸模型進(jìn)行單因素及多因素分析。P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

一、SNHG7在HCC組織和細(xì)胞系中高表達(dá)

首先，我們采用qRT-PCR檢測了60對肝癌組織及相應(yīng)的肝正常組織(NLT)中SNHG7的表達(dá)水平。結(jié)果顯示，肝癌組織中SNHG7的表達(dá)水平明顯高于正常肝組織(P<0.05)。而且，人肝癌細(xì)胞系HepG2、Huh6、Huh7和Hep3B中SNHG7的表達(dá)水平明顯高于人正常肝細(xì)胞系LO2(P<0.05)。此結(jié)果表明SNHG7在HCC組織和細(xì)胞系中高表達(dá)。

二、 SNHG7表達(dá)與HCC患者臨床病理因素的相關(guān)性

用SNHG7表達(dá)的中位數(shù)將HCC患者分為SNHG7高表達(dá)組(n=30)和SNHG7低表達(dá)組(n=30)，并與患者臨床病理因素進(jìn)行比較。結(jié)果表明SNHG7表達(dá)與TNM分期、腫瘤數(shù)目及腫瘤微血管侵犯密切相關(guān)(P<0.05)(表1)。

表1 SNHG7表達(dá)與HCC患者臨床病理因素比較

三、SNHG7高表達(dá)與HCC患者低生存率有關(guān)

我們用Kaplan-Meier法對兩組患者進(jìn)行生存分析。結(jié)果顯示，SNHG7高表達(dá)的HCC患者無瘤生存時(shí)間(DFS)和總體生存時(shí)間(OS)較短(P<0.05)(圖1)。這個(gè)結(jié)果表明SNHG7高表達(dá)提示HCC患者低生存率。

圖1 SNHG7高表達(dá)與低表達(dá)的HCC患者的無瘤及總體生存比較

四、SNHG7表達(dá)是影響HCC患者預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素

用COX單因素分析尋找影響HCC患者預(yù)后的因素，將P<0.05的因素納入COX多因素分析，結(jié)果表明，TNM分期、腫瘤數(shù)目、腫瘤微血管侵犯和SNHG7表達(dá)是影響HCC患者無瘤生存的獨(dú)立危險(xiǎn)因素；TNM分期、腫瘤微血管侵犯和SNHG7表達(dá)是影響HCC患者總體生存的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。因此，SNHG7表達(dá)是影響HCC患者預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。

討 論

我們的研究發(fā)現(xiàn)，SNHG7在HCC組織中的表達(dá)明顯高于正常肝組織，而且，SNHG7在HCC細(xì)胞系中的表達(dá)亦明顯高于人正常肝細(xì)胞系。研究表明，SNHG7可作為癌基因在多種腫瘤中表達(dá)上調(diào)并發(fā)揮促進(jìn)腫瘤發(fā)展的作用。例如，Zhang等[8]報(bào)道SNHG7在黑色素瘤中高表達(dá)，可通過上調(diào)SOX4促進(jìn)黑色素瘤細(xì)胞的侵襲和遷移；Sun等[9]證實(shí)SNHG7在乳腺癌中上調(diào)，并通過miR-34a啟動(dòng)EMT和Notch-1通路促進(jìn)乳腺癌的發(fā)生和進(jìn)展。因此，HCC中高表達(dá)的SNHG7也可能發(fā)揮癌基因的作用促進(jìn)腫瘤進(jìn)展。

也有研究表明，SNHG7的表達(dá)與腫瘤的預(yù)后相關(guān)。例如，Cheng等[10]的研究表明SNHG7在胰腺癌組織和細(xì)胞系中高表達(dá)，其高表達(dá)與胰腺癌預(yù)后不良相關(guān)；Chi等[11]發(fā)現(xiàn)在神經(jīng)母細(xì)胞瘤中上調(diào)的SNHG7與神經(jīng)母細(xì)胞瘤患者的低生存率相關(guān)。本研究中，我們將SNHG7的表達(dá)與HCC患者的臨床病理因素進(jìn)行了對比，結(jié)果表明SNHG7的表達(dá)與TNM分期、腫瘤數(shù)目及腫瘤微血管侵犯密切相關(guān)。生存分析發(fā)現(xiàn)，SNHG7高表達(dá)提示HCC患者低無瘤生存率和總體生存率。同時(shí)，COX單因素和多因素分析表明SNHG7表達(dá)是影響HCC患者預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。因此我們認(rèn)為SNHG7在HCC中有作為臨床生物學(xué)標(biāo)志物的潛力。

綜上，我們的結(jié)果表明，SNHG7在HCC中高表達(dá)，其表達(dá)與腫瘤的進(jìn)展情況及不良預(yù)后密切相關(guān)。SNHG7在HCC發(fā)生和發(fā)展過程中的作用及相關(guān)分子機(jī)制需進(jìn)一步研究。