周 洋 佘小漫 藍國兵 于 琳 金寶紅 何自福

(1 東方市農(nóng)業(yè)服務中心 海南東方 572600;2 廣東省農(nóng)業(yè)科學院植物保護研究所 廣東廣州 510640;3 廣東省植物保護新技術重點實驗室 廣東廣州 510640)

辣椒（Capsicum annuumL.）屬茄科（Sola‐naceae）辣椒屬（Capsicum）植物，為一年生或多年生作物，原產(chǎn)于中南美洲熱帶地區(qū)，明末清初時引入中國［1］。辣椒因富含胡蘿卜素、維生素A及維生素C等，并有芬芳的辛辣味而廣受歡迎，成為一種世界蔬菜［2-5］。2016 年中國辣椒的播種面積超過133.33 萬hm2，占世界辣椒播種面積的35%，總產(chǎn)值超過700億元［6］。辣椒是海南省冬種主要蔬菜之一，種植面積逐年擴大，已由2007 年3.14 萬hm2擴大至2018 年4.089 6 萬hm2，占蔬菜種植面積的14.08%，居于各種蔬菜種植面積之首［7-8］。

由茄科雷爾氏菌（Ralstonia solanacearum）侵染引起的辣椒青枯病是辣椒生產(chǎn)上主要病害之一。辣椒青枯病在中國辣椒產(chǎn)區(qū)發(fā)病率極高，特別是高溫、高濕的南方辣椒產(chǎn)區(qū)發(fā)病更為嚴重，一般田間發(fā)病率20%～30%，嚴重田塊達50%以上，甚至絕收［9-11］。茄科雷爾氏菌的生理生化特性較復雜。根據(jù)寄主范圍差異分為5個生理小種［12-14］；根據(jù)對碳水化合物（乳糖、麥芽糖、纖維二糖、甘露醇、山梨醇、甜醇）的利用情況，茄科雷爾氏菌分又為6個生化變種［15-17］。此外，基于演化型特異性復合PCR 還可以將茄科雷爾氏菌分為4 個演化型［18-19］。到目前為止，國內(nèi)外還沒有研發(fā)出針對青枯病十分有效的農(nóng)藥［20-21］，種植抗病品種是防治該病害最經(jīng)濟、綠色有效的措施。

國內(nèi)關于辣椒對青枯病抗性鑒定的報道較少。羅香文［22］從13 個辣椒品種中篩選出6 個高抗青枯病品種。黨峰峰等［23］用不同接種方法評價了106份辣椒材料對青枯病的抗性水平，獲得14 份高抗青枯病的材料。譚清群等［24］對收集的24 份辣椒材料青枯病抗性進行了鑒定。本研究對海南生產(chǎn)上推廣應用的17個辣椒品種進行青枯病抗性鑒定，以期為海南辣椒生產(chǎn)上品種布局與推廣應用供科學依據(jù)，也為辣椒品種選育提供指導。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 待鑒定辣椒品種

供試的17 個辣椒品種來自中國熱帶農(nóng)業(yè)科學院熱帶作物品種資源研究所和三亞豐茂同和農(nóng)業(yè)開發(fā)有限公司，具體見表1，這些品種在海南均有推廣應用。

1.1.2 鑒定用菌株

辣椒青枯病菌株GY-2（強致病力）和QY-2（中等致病力）由廣東省農(nóng)業(yè)科學院植物保護研究所提供。將2株青枯菌在無菌條件下分別接入150 mL的TTC液體培養(yǎng)基（10 g 蛋白胨、1 g干酪素、10 g 葡萄糖、加蒸餾水至1 000 mL，pH 7.2）中，以30℃振蕩培養(yǎng)24 h。將這2 個菌株按1∶1 （V∶V） 混合，制備接種菌液，接種菌液濃度為1×108cfu/mL［25-26］。

1.2 方法

1.2.1 供試辣椒材料育苗

播種前，用10 %磷酸三鈉溶液浸泡上述17 個辣椒品種種子20 min，進行消毒處理，然后用清水清洗3 次，30℃恒溫催芽；待有20%～30%的種子露出胚根時，將其播種至盛有滅菌土的苗盤上進行育苗；出苗后，水肥按常規(guī)管理，辣椒長至5～6葉期時用于接種［25-26］。

1.2.2 接種

采用菌液浸根接種法。將辣椒苗從育苗盤中拔起，用自來水沖去植株根部的泥土，浸入辣椒青枯病菌液中20 min；然后移植于盛滅菌土的塑料杯中。每處理32株，3次重復，隨機排列。接種移植后各處理的水肥按常規(guī)管理［25-26］。

1.2.3 調(diào)查及數(shù)據(jù)統(tǒng)計

接種后每周調(diào)查一次，記錄各個處理的發(fā)病情況。當各處理的病情基本穩(wěn)定、無新病株出現(xiàn)時，統(tǒng)計各處理的病株率，用DPS （V7.05）進行統(tǒng)計分析，評價各個辣椒品種對青枯病的抗性水平。

辣椒對青枯病的抗性標準［25］：

高抗（HR）：病株率≤20%；

抗病（R）：20%＜病株率≤40%；

耐病（MR）：40%＜病株率≤60%；

感?。⊿）：60%＜病株率。

表1 供試的17個辣椒品種

2 結(jié)果與分析

2.1 辣椒品種接種后發(fā)病情況

采用菌液浸根接種方法鑒定了17 個辣椒品種對茄科青枯菌的抗性。結(jié)果表明，接種后第7 天，接種處理的部分辣椒植株頂端葉片開始出現(xiàn)萎蔫下垂，葉片仍為綠色，其中‘熱甜3號’品種最先表現(xiàn)出感病癥狀（圖1-A），而‘金艷’和‘金嬌紅玉’發(fā)病較慢；隨著時間的推移，各接種處理的辣椒植株陸續(xù)出現(xiàn)葉片萎蔫下垂癥狀，病株數(shù)量不斷增加，病株的病情不斷加重（圖1-B）；在接種后28 d，辣椒苗病情趨于穩(wěn)定，各處理不再出現(xiàn)新病株，而病株的病情也趨于嚴重，最終病株基本上都逐漸干枯。

2.2 不同辣椒品種接種茄科青枯菌的病情調(diào)查結(jié)果

接種后28 d，各處理辣椒植株病情趨于穩(wěn)定時，對各品種的抗性進行評價。調(diào)查與統(tǒng)計結(jié)果表明，供試的17個辣椒品種病株率存在明顯差異，其中‘金艷’的病株率最低，為13.54%；‘熱甜3號’的病株率最高，為100%；表現(xiàn)高抗的品種為‘金艷’及‘金驕紅玉’，病株率為13.54%～19.79%；表現(xiàn)抗病的品種為‘泰麗’、‘熱辣4號’、‘紅妃’、‘湘辣十七號’、‘金驕3.0’、‘金驕M6’，病株率為22.92%～39.59%；表現(xiàn)耐病的品種為‘權(quán)御天下’、‘湘研珍麗’和‘湘研6A’，病株率為51.04%～54.17%；表現(xiàn)感病的品種為‘金驕神龍’、‘長艷’、‘熱辣3 號’、‘熱辣2 號’、‘熱甜5號’和‘熱甜3 號’，病株率為63.54%～100%。方差分析結(jié)果表明，供試的17 個辣椒品種中，除‘紅妃’與‘湘辣十七號’、‘金嬌3.0’與‘金嬌M6’、‘湘研珍麗’與‘湘研6A’品種病株率的差異不顯著外，其他品種病株率的差異均達到顯著水平（表2）。

表2 17個辣椒品種苗期對辣椒青枯病的抗性鑒定結(jié)果

2.3 不同辣椒品種對茄科青枯菌的抗性水平

根據(jù)上述室內(nèi)人工接種茄科青枯菌后各辣椒品種發(fā)病情況調(diào)查結(jié)果，并參照辣椒對青枯病的抗性標準可知，在供試的17個辣椒品種中，‘金驕紅玉’及‘金艷’2 個品種對青枯病表現(xiàn)高抗（占11.77%），‘泰麗’、‘熱辣4號’、‘紅妃’、‘湘辣十七號’、‘金驕3.0’和‘金驕M6’6 個品種對青枯病表現(xiàn)抗病（占35.29%），‘權(quán)御天下’、‘湘研珍麗’和‘湘研6A’3個品種對青枯病表現(xiàn)耐病（占17.65%），‘金驕神龍’、‘長艷’、‘熱辣3號’、‘熱辣2號’、‘熱甜5號’和‘熱甜3號’6個品種對青枯病表現(xiàn)感?。ㄕ?5.29%）。

3 討論與結(jié)論

采用室內(nèi)人工接種法鑒定作物抗病性是一種科學評價方法。人工接種方法主要包括傷根灌注接種法和浸根接種法［22，25，27］。采用傷根灌注接種法時，各接種植株接觸病原菌的量差異較大，即使抗性相近的品種，其發(fā)病程度也可能出現(xiàn)差異。浸根接種法，各接種植株接觸病原菌的機會均等，且操作簡便，是一種較優(yōu)的接種方法［23，28］。鑒于此，本文采用苗期浸根接種法，在辣椒幼苗長至5～6 片葉子時進行接種，選用強致病力和中等致病力的2個菌株作為病原，盡可能降低因單一菌株對寄主植物的致病力不同而導致的鑒定誤差。

不同類型的辣椒對青枯病抗性存在一定差異。7 個朝天椒品種中，‘金艷’表現(xiàn)高抗，‘紅妃’、‘金驕M6’、‘泰麗’及‘金驕3.0’表現(xiàn)抗病，‘權(quán)御天下’表現(xiàn)耐病，僅有‘長艷’一個品種表現(xiàn)感病。3個線椒品種中，‘熱辣4號’和‘湘辣十七號’表現(xiàn)抗病，‘金驕神龍’表現(xiàn)感病。3 個牛角椒品種中，‘湘研6A’和‘湘研珍麗’表現(xiàn)耐病，熱辣3號表現(xiàn)感病?？梢?，朝天椒對青枯病的抗性普遍較好，線椒次之，牛角椒抗性較差。

一個作物品種在田間的抗病性表現(xiàn)，不僅與自身的抗病基因有關，而且還受栽培管理水平、土壤條件、氣候條件等環(huán)境因子以及病原菌的致病力等諸多因子影響。因此，生產(chǎn)上防控辣椒青枯病，在種植抗病品種的同時，還要開展輪作、改良土壤、科學施肥管水等栽培管理措施，以實現(xiàn)對辣椒青枯病的持續(xù)有效控制。

本文采用室內(nèi)人工苗期接種方法評價了來自海南市場上的17個辣椒品種對青枯病的抗性水平。17 個辣椒品種對青枯病的抗性存在明顯的差異，其中表現(xiàn)高抗的品種有2 個，表現(xiàn)抗病的品種6個，表現(xiàn)耐病的品種3 個，表現(xiàn)感病的品種6 個，該結(jié)果為海南辣椒品種選育與布局提供了理論指導，也為這些品種的推廣應用提供了科學依據(jù)。