曾雪愛 周春權 張一帆

摘要?目的：觀察松郁安神方對對氯苯丙氨酸（Para-chlorophenylalanine，PCPA）致失眠模型大鼠血漿中內(nèi)源性睡眠促進物質(zhì)前列腺素D2（Prostaglandin?D2，PGD2）的影響。方法：采用腹腔注射對氯苯丙氨酸（PCPA）建立失眠大鼠模型，用高、中、低劑量松郁安神方進行治療，通過酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）測定大鼠血漿中前列腺素D2（PGD2）的含量。結果：中、高劑量松郁安神方可提高PCPA失眠模型大鼠血漿中PGD2含量（P<0.05或P<0.01）。結論：松郁安神方改善睡眠的機制之一可能是通過調(diào)節(jié)內(nèi)源性睡眠促進物質(zhì)PGD2發(fā)揮作用。

關鍵詞?失眠;內(nèi)源性睡眠促進物質(zhì);前列腺素D2;松郁安神方

Effect?of?Songyu?Anshen?Formula?on?Levels?of?Plasma?Prostaglandin?D2?（PGD2?）?in?Insomnia?Rats?Induced?by?Para-chlorophenylalanine（PCPA）

ZENG?Xueai，ZHOU?Chunquan，ZHANG?Yifan，WANG?Xiufeng，ZHANG?Yu，HUANG?Junshan

（Fujian?Academy?of?Traditional?Chinese?Medicine，F(xiàn)uzhou?350003，China）

Abstract?Objective：To?observe?the?effect?of?Songyu?Anshen?Formula?on?the?endogenous?sleep-promoting?substance?PGD2?in?the?plasma?of?insomnia?rats?induced?by?PCPA.Methods：The?rat?model?of?insomnia?was?established?by?intraperitoneal?injection?of?PCPA.?The?rats?were?given?Songyu?Anshen?formula?intragastrically，?and?the?content?of?PGD2?in?plasma?was?determined?by?enzyme-linked?immunosorbent?assay?（ELISA）.?Results：The?content?of?PGD2?in?the?plasma?of?PCPA?could?be?increased?by?the?middle?and?high?dose?of?Songyu?Anshen?formula?（P<0.05?or?P<0.01?）?.?Conclusion：One?of?the?mechanisms?of?Songyu?Anshen?in?improving?sleep?quality?may?be?through?the?regulation?of?the?endogenous?sleep-promoting?substance?PGD2.

Keywords?Insomnia;?Endogenous?sleep-promoting?substances;?Prostaglandin?D2;?Songyu?Anshen?formula

中圖分類號：R256.23文獻標識碼：Adoi：10.3969/j.issn.2095-7130.2020.01.003

睡眠和覺醒的發(fā)生及轉換可能是通過腦內(nèi)神經(jīng)遞質(zhì)和內(nèi)源性睡眠促進物質(zhì)共同作用調(diào)節(jié)的。其中前列腺素D2（PGD2）和腺苷是最強效的內(nèi)源性睡眠促進物質(zhì)，參與生理性睡眠覺醒調(diào)節(jié)[1]。松郁安神方根據(jù)疏肝安神法，以甘松、郁金、玫瑰花為君藥，配伍酸棗仁、首烏藤、丹參、生龍骨、珍珠母、合歡皮組方，具有重鎮(zhèn)安神之功效，在臨床上治療失眠療效顯著[2-3]。本試驗通過觀察松郁安神方對內(nèi)源性睡眠促進物質(zhì)PGD2的影響，探討松郁安神方改善睡眠的作用機制。

1?材料

1.1?試驗動物?清潔級SD大鼠36只，雄性，體質(zhì)量（230±10）g，購自上海斯萊克試驗動物有限責任公司（生產(chǎn)許可證號：SCXK（滬）2017-0005;合格證編號：20170005004461）。動物置于安靜、恒溫、恒濕、12?h/12?h明暗光照環(huán)境中飼養(yǎng)，每天給予充足食物和水。試驗前采用隨機數(shù)字法將大鼠分為6組，分別為空白對照組、PCPA失眠組、中藥高、中、低劑量組、酸棗仁湯陽性對照組，每組6只。

1.2?主要試劑與儀器?Rat?PGD2?ELISA?Kit（上海酶聯(lián)生物科技有限公司，批號：Dec2018）;對氯苯丙氨酸（PCPA）（Sigma公司，批號：SHBH7873）;中藥飲片（福建鷺燕藥業(yè)股份有限公司）;酶標儀（美國BioTek，800TS）。

2?方法

2.1?PCPA失眠模型建立?參考文獻[4]方法，于臨用前將PCPA溶于弱堿性生理鹽水，配成混懸液，大鼠腹腔注射PCPA（300?mg/kg），1次/d，連續(xù)2?d。若大鼠晝夜節(jié)律消失，白天活動增多，睡眠減少甚至消失，飲水量增加，表明造模成功。

2.2?給藥方法?PCPA造模第1天開始灌胃中藥。松郁安神方組成：甘松10?g、郁金15?g、玫瑰花10?g、丹參15?g、酸棗仁15?g、首烏藤30?g、珍珠母30?g、生龍骨30?g、合歡皮15?g，藥物經(jīng)煎煮及過濾濃縮至3.4?g/mL備用。中藥低、中、高劑量組分別按8.5?g/kg、17?g/kg、34?g/kg體質(zhì)量灌胃給藥，陽性對照組灌胃酸棗仁湯（14.4?g/kg），空白對照組和失眠模型組均灌胃同等體積蒸餾水，1次/d，共7?d。

2.3?酶聯(lián)免疫吸附測定?試驗結束后，在麻醉狀態(tài)下腹主動脈取血，置于EDTA抗凝管中，靜置30?min后，2500×g離心10?min，取上層血漿進行檢測。PGD2含量檢測方法依據(jù)ELISA檢測試劑盒操作說明進行。

2.4?統(tǒng)計學方法?采用SPSS?16.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計分析。計量資料以（±s）進行描述，組間比較采用單因素方差分析，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

3?結果

3.1?動物一般狀態(tài)觀察?空白對照組大鼠精神狀態(tài)良好，毛發(fā)有光澤，晝夜節(jié)律規(guī)律，每天體質(zhì)量逐漸增加。注射PCPA后，大鼠晝夜節(jié)律消失，白天活動增多，易激惹，毛發(fā)豎起且無光澤，飲水明顯增多，體質(zhì)量下降。不同劑量松郁安神方干預后，中、高劑量組大鼠精神狀態(tài)、反應情況、體質(zhì)量等一般狀態(tài)較失眠模型組明顯改善。

3.2?松郁安神方對PCPA失眠模型大鼠血漿中PGD2含量的影響?如圖1所示，與空白對照組比較，PCPA失眠組大鼠血漿中PGD2含量明顯降低，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05），給予不同劑量松郁安神方治療7?d后，PGD2含量均有所增加，與PCPA失眠組比較，高、中劑量松郁安神方組差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05或P<0.01），與酸棗仁湯陽性對照組比較差異無統(tǒng)計學意義。其中，標準曲線結果顯示吸光度與PGD2濃度具有良好的線性關系（R2=0.998?6）。見圖2。

3?討論

失眠的病因病機復雜，五臟功能失調(diào)皆可導致失眠，其中以肝為首。結合古代醫(yī)書和前人經(jīng)驗，我們認為失眠病機應以肝郁為主。我們前期臨床觀察也發(fā)現(xiàn)肝郁化火型失眠占多數(shù)，運用松郁安神方治療在臨床中取得明顯療效[2-3]。

PGD2是目前公認的內(nèi)源性睡眠促進物質(zhì)[1]，已有研究發(fā)現(xiàn)，在睡眠相關腦區(qū)注射PGD2，能增加大鼠非快動眼和快動眼期睡眠，且睡眠性質(zhì)與生理性睡眠相似[5]。本研究觀察到PCPA致失眠后，大鼠血漿中PGD2含量明顯降低，給予不同劑量松郁安神方治療后，血漿中PGD2含量均有不同程度增加，中、高劑量松郁安神方組與失眠模型組比較均有統(tǒng)計學意義，表明松郁安神方可調(diào)節(jié)失眠大鼠血漿中PGD2含量，這一結果提示，松郁安神方改善失眠的作用機制可能與提高失眠大鼠血漿中內(nèi)源性睡眠促進物質(zhì)PGD2含量有關。本試驗結果也提示，血漿中內(nèi)源性睡眠促進物質(zhì)的變化可以在一定程度上反映大鼠的睡眠狀況，可作為臨床診斷失眠的輔助指標。

參考文獻

[1]岳小芳，邱梅紅，曲衛(wèi)敏，等.內(nèi)源性睡眠促進物質(zhì)研究進展[J].中國臨床藥理學與治療學，2011，16（6）：672-678.

[2]黃俊山，曾雪愛，黃兆遷，等.松郁安神方對不同中醫(yī)證型失眠患者血漿中5-羥色胺及多巴胺水平的影響[J].中醫(yī)雜志，2011，52（24）：2119-2124.

[3]黃俊山，吳文寶，曾雪愛，等.針刺合松郁安神方治療肝郁化火型不寐40例療效觀察[J].福建中醫(yī)藥大學學報，2012，22（3）：1-2.

[4]肖成榮，馬增春，李海靜，等.PCPA失眠大鼠模型的制作及其機制[J].毒理學雜志，2007，21（4）：326.

[5]Inoue?S，Honda?K，Komoda?Y，et?al.Differential?sleep-promoting?effects?of?five?sleep?substances?nocturnally?infused?in?unrestrained?rats[J].Proc?Natl?Acad?Sci?USA，1984，81（19）：6240-6244.