李曉波 范紅霞

摘 ?要：對(duì)于生豬肺臟病變的相關(guān)研究，目前在國(guó)內(nèi)外發(fā)展研究中逐漸增多，但是對(duì)于屠宰生豬肺臟病變的研究還在進(jìn)行延伸，為了對(duì)屠宰生豬肺臟檢疫進(jìn)行相關(guān)性檢疫工作，在實(shí)驗(yàn)中對(duì)湛江地區(qū)大量屠宰生豬肺臟病變進(jìn)行觀察研究，對(duì)病變部位通過(guò)切片染色觀察。對(duì)屠宰生豬肺臟的病變數(shù)量和類型進(jìn)行對(duì)比，對(duì)分析生豬肺臟病變起到輔助性作用，更為生豬屠宰檢疫工作提供了保障。

關(guān)鍵詞：生豬;肺臟;病變

1豬肺臟的解剖結(jié)構(gòu)

健康生豬的肺粉紅色，質(zhì)輕而軟，富有彈性，分為左右兩肺。通常右肺比較大。肺門是支氣管、肺動(dòng)脈、肺靜脈和神經(jīng)等出入肺臟的地方。這些通道組織被結(jié)締組織包圍在一起稱為肺根。左右肺都有三個(gè)面：肋面接觸胸腔側(cè)壁，有肋骨壓跡?？v隔面接觸縱隔，有心臟、食管，血管壓跡。膈面和橫膈膜接觸。肺臟的分葉：豬的肺臟左三右四共分七葉。左肺三葉：尖葉、心葉、隔葉;右肺四葉：尖葉、心葉、膈葉和內(nèi)側(cè)的副葉。肺臟表面的漿膜是肺胸膜，肺胸膜的結(jié)締組織將肺臟分成若干錐體形小葉，底部朝向表面，頂部朝向肺門。

2.屠宰生豬肺臟病變的觀察

生豬的養(yǎng)殖階段，呼吸系統(tǒng)是比較容易發(fā)生疾病的系統(tǒng)，特別是肺臟和胸膜，在近幾年來(lái)，因呼吸道問(wèn)題導(dǎo)致的疾病讓養(yǎng)殖戶越發(fā)的頭疼，從而給農(nóng)戶帶來(lái)很大的損失。而在生豬屠宰過(guò)程中也發(fā)現(xiàn)許多肺臟的病變，由于傳染性疾病很多都會(huì)通過(guò)肺部的病變表現(xiàn)出來(lái)，所以作為檢疫人員能否快速的通過(guò)觀察肺臟的病理特征，做出相應(yīng)的檢疫處理至關(guān)重要。

2.1材料與方法

2.1.1儀器和試劑

輪轉(zhuǎn)式切片機(jī)：德國(guó)萊卡公司;顯微鏡：Nikon公司。

采樣工具：采樣袋、手術(shù)剪刀、鑷子、解剖刀、酒精燈、酒精棉、一次性無(wú)菌橡膠手套等。無(wú)水乙醇;氯化鈉;甲醛;二甲苯;生物切片石蠟;蘇木精;伊紅;中性樹膠。

2.1.2樣品采集記錄

在2013-5至2014-5期間，對(duì)某地區(qū)兩所生豬屠宰場(chǎng)屠宰的30個(gè)生豬畜群共計(jì)6000頭生豬進(jìn)行采樣，其中4000頭生豬來(lái)自1號(hào)屠宰場(chǎng)的20個(gè)畜群，2000頭生豬來(lái)自2號(hào)屠宰場(chǎng)的10個(gè)畜群的。所有生豬均完成標(biāo)準(zhǔn)免疫程序，且體重大于120kg，年齡約7—8月齡。共采集有效的肺臟樣品5850份。在屠宰場(chǎng)檢疫崗位上，采集1×1cm的不同病變肺臟組織塊?？焖賹⒔M織用紗布包好固定于10%中性甲醛液（5—10倍于組織體積），用于組織切片以及病理學(xué)觀察。

2.2病理剖檢

2.2.1懸掛觀察檢驗(yàn)

從氣管環(huán)之間掛起肺臟器官，觀察肺的表面色澤、形態(tài)、大小有無(wú)異常，觸摸兩肺實(shí)質(zhì)，檢查有無(wú)結(jié)節(jié)或硬變。

2.2.2剖檢左右支氣管淋巴結(jié)

用檢驗(yàn)鉤鉤住靠近主動(dòng)脈弓的左支氣管部分，稍向左拉，右手用刀切開動(dòng)脈弓和氣管間的脂肪組織直到左支氣管分叉處，剖檢左支氣管淋巴結(jié);在用檢驗(yàn)鉤鉤住右肺尖葉，向左側(cè)拉，使其翻轉(zhuǎn)，在肺的尖葉和氣管之間緊靠氣管切開并檢查。有時(shí)還要剖檢縱隔淋巴結(jié)。

2.2.3對(duì)生豬進(jìn)行平案檢查

先將肺放在檢驗(yàn)臺(tái)上，肺臟的隔面向上，左肺在檢驗(yàn)人員左側(cè)。用左手拇指和食指提起主動(dòng)脈靠近支氣管部分，其余三指托住左肺隔面，然后稍向外翻，就可以按懸掛檢驗(yàn)方法剖檢左支氣管淋巴結(jié)。然后再用左手拇指和食指抓住右肺尖葉的基部，其余手指和手掌托住肺心葉隔面，提起肺臟并向內(nèi)翻轉(zhuǎn)，就可以使得尖葉，右肺隔葉基部和支氣管分叉處露出。

（1）組織塊的修整和沖洗：將固定好的肺臟組織用外科手術(shù)刀片將組織塊分別切成厚約5mm左右的薄塊，把修整好的肺臟組織塊放到大燒杯中并用紗布包緊瓶口，在紗布中央切開一小口放入橡皮管，橡皮管的另一端與水龍頭連接來(lái)沖洗，時(shí)間約12h左右，之后放到各級(jí)濃度酒精中進(jìn)行組織的脫水。

（2）載玻片的處理：1.清洗，將載玻片放于含有洗衣粉的自來(lái)水中浸泡2h，用擦鏡紙清洗表面，晾干后在酸缸中浸泡24h。自來(lái)水沖洗數(shù)次后，用蒸餾水洗三次，再置于無(wú)水乙醇中浸泡24h，最后再用蒸餾水清洗三次，用干凈的紗布擦干即可，2.粘片劑包被，用彎嘴鑷子將擦干凈的載玻片小心垂直放入盛有50倍丙酮稀釋的APES溶液中，停留20s，取出，放入盛有蒸餾水的燒杯中，上下提拉，直至提出玻片時(shí)蒸餾水從玻片兩邊聚集到中間成一條線流下，然后將載玻片取出放入37℃溫箱晾干即可。

（3）組織塊的脫水和透明：組織塊每前移一次，都先將組織上的殘留液體用干凈的吸水濾紙吸干，以免影響酒精和二甲苯的濃度。根據(jù)肺臟組織的特性，二甲苯透明時(shí)間約在7min左右。透明時(shí)間太短二甲苯無(wú)法完全滲透組織，時(shí)間太長(zhǎng)容易使組織變脆，切片的時(shí)候，容易把組織切碎，無(wú)法切出完整的組織形態(tài)結(jié)構(gòu)。

（4）肺臟組織塊的浸蠟與包埋：將已透明好的肺臟組織塊移入熔化的石蠟內(nèi)，置于58℃的電熱恒溫干燥箱內(nèi)，并使其溫度保持恒溫，然后將透明好的的肺臟組織塊放入蠟杯。將包埋盒放在已經(jīng)加熱的溫臺(tái)上，從溫箱中取出盛放純凈石蠟的蠟杯，倒入包埋盒中，迅速輕輕地將組織平放于紙盒底部，用鑷子把組織排列整齊。等石蠟完全凝固后即可取出蠟塊進(jìn)行切片。

（5）石蠟切片的制作：切片前先修整蠟塊，切去組織周圍過(guò)多的石蠟，留下約3mm寬度。將修整好的蠟塊固定在木塊上，調(diào)整石蠟塊與刀口之間的角度與位置，刀片與石蠟切片約成巧度左右。切片厚度為5 m。調(diào)整好后勻速轉(zhuǎn)動(dòng)把手，進(jìn)行切片。切出完整的蠟片后用毛筆將其放入溫水浴展片機(jī)內(nèi)展開，取一片蒸餾水清洗過(guò)的載玻片，一端放入水中慢慢靠近展好的蠟片使其貼在載玻片上。然后把載玻片放在平盤上編好記號(hào)，置于65℃烤片機(jī)溫箱中烘干，每個(gè)組織塊撈片2——3張，1一1.5h干燥后取出存放于切片盒待染。

（6）將染完色的組織切片從（二甲苯II）中取出，用吸水濾紙或紗布擦去材料周圍多余的二甲苯。在材料中央滴一小滴中性加拿大樹膠，然后，用鑷子加蓋蓋玻片從樹膠的一側(cè)傾斜放入蓋玻片，以便避免樹膠中產(chǎn)生氣泡，影響組織鏡檢觀察。切片封好后，放在切片托盤上自然干燥24h后，用普通光學(xué)顯微鏡觀察。

3.結(jié)果

3.1肺臟病變統(tǒng)計(jì)

對(duì)8850頭生豬肺臟樣品進(jìn)行觀察，記錄，統(tǒng)計(jì)，病變肺臟數(shù)量是3215頭，占到總數(shù)的36.3%;類型主要有氣腫，淤血，出血，混合感染（肉變），水腫和不同類型的肺炎等。其中肺炎占病變肺臟的最大比例，比例為42.5%，肺出血次之，比例為35.7%。

3.2剖檢病變

圖A為正常肺臟，顏色正常，邊緣清晰，無(wú)壞死，出血。圖B：兩側(cè)肺臟尖葉、心葉、隔葉散在分布著多個(gè)斑塊狀、大小不一紅的病灶，病灶與周圍正常組織界限分明，外觀呈紅褐色，質(zhì)地變實(shí)。圖C：兩側(cè)肺隔葉可見大面積病灶，呈橘紅色，有的呈暗紅色，病灶呈實(shí)變狀。圖D：肺臟紫紅色，體積增大，質(zhì)地變韌，重量增加，肺臟的表面有散在的出血點(diǎn)。圖E：肺腫大，間質(zhì)增寬，質(zhì)地實(shí)在，有明顯的肝變區(qū)，肺胸膜附有纖維素薄膜，呈淡黃色。

4.討論

4.1不同肺臟病變的鑒別

在D圖中，從眼觀上看肺臟呈紫紅色，體積變大，質(zhì)地變韌，重量增加，胸膜由于緊張而變得閃光，切面的氣管和組織內(nèi)混有泡沫血液的樣品。說(shuō)明該病變可能是肺出血或是肺淤血的病變。若是肺淤血，則有可能發(fā)生于左心功能不全，導(dǎo)致肺靜脈血回流左心房時(shí)受到阻礙而滯留在肺臟，使得肺臟體積變大呈紫紅色。若是肺出血，則有可能是由寄生蟲、電麻、豬瘟等傳染病這三個(gè)原因引起。寄生蟲移行到肺部引起的出血，如：蛔蟲，細(xì)頸囊尾蝴，肺絲蟲等。電麻引起的肺出血導(dǎo)致肺臟的尖葉，心葉，隔葉的背側(cè)緣被摸下出血新鮮的出血點(diǎn)，并且支氣管淋巴結(jié)也會(huì)出血。豬瘟等傳染性疾病引起的肺出血表現(xiàn)為肺臟漿膜面出血斑或噴血狀的出血，而且在尖葉，心葉，隔葉有發(fā)生肺炎。

在E圖中，從肉眼看肺臟腫大，間質(zhì)增寬，質(zhì)地實(shí)在，有明顯的肝變區(qū)，肺胸膜附有纖維素薄膜，呈淡黃色。從形態(tài)上可以分為四個(gè)時(shí)期：充血期、紅色肝變期、灰色肝變區(qū)、消散期。而該圖中的病變應(yīng)該是處于紅色肝變區(qū)。若是充血期，肺臟顏色是暗紅色，腫大，硬度適中，在顯微鏡下觀察只有少量紅細(xì)胞，肺泡壁也沖血，肺泡內(nèi)有粉紅色液體。若是灰色肝變區(qū)，肺臟顏色已轉(zhuǎn)為灰紅或灰色，呈顆粒狀外表，切面干燥，在顯微鏡下，肺泡壁的充血程度就較輕微，肺抱內(nèi)有團(tuán)狀纖維素，而中性粒細(xì)胞和紅細(xì)胞已經(jīng)消失，由于充血的減輕和出血消失才導(dǎo)致灰色肝變。若是消散期，此時(shí)的肺臟灰黃色，質(zhì)軟，呈半透明，顯微鏡下，肺泡壁血管己經(jīng)恢復(fù)通血，上皮再生，肺泡腔內(nèi)的纖維素開始溶解，白細(xì)胞和巨噬細(xì)胞溶解，氣體進(jìn)入肺泡。

4.2造成病變假象的可能人為因素

4.2.1加工引起出血性變化與病理性出血變化

肺臟嗆血是指在刺殺放血過(guò)程中，血液被豬吸進(jìn)肺臟，發(fā)生在一側(cè)或兩側(cè)肺的背側(cè)緣有時(shí)限于肺的尖葉，嗆血區(qū)大小不一，暗紅色，有彈性，切面鮮紅或暗紅，支氣管內(nèi)有凝血塊。嗆血部位水中不下沉。支氣管淋巴結(jié)一般不腫大。電麻出血是由于電麻的電壓過(guò)高或者電麻時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，引起的全身多個(gè)器官出血，其中肺臟比較明顯。在肺臟的胸膜下以及實(shí)質(zhì)中，散在大小不一的鮮紅色出血點(diǎn)。如果同時(shí)吸入燙毛池的污水，出血點(diǎn)色澤變暗。而病理性出血?jiǎng)t是散在肺的表面，出血點(diǎn)數(shù)量一般不多，但豬瘟出血點(diǎn)大或出血性浸潤(rùn)，支氣管淋巴結(jié)出血，其他臟器也會(huì)出血病變。

4.2.2加工引起水腫變化與肺水腫、肺炎性水腫

豬在刺殺放血以后處于瀕死期被投入燙毛池?zé)崴?，湯池中的臟水被吸入或者壓入肺臟稱為嗆水。嗆水多墮積于尖葉或其他肺葉下垂部分，呈淺灰色或黃褐色，透明，濕潤(rùn)。切開流出多量溫?zé)釡啙嵋后w，可能混有湯池雜物，支氣管無(wú)異常變化。而肺水腫在各個(gè)肺葉都能發(fā)生，肺臟膨大，蒼白，同時(shí)存在淤血呈暗紅色，被摸光亮濕潤(rùn)，間質(zhì)增寬，膠樣浸潤(rùn)，切面流出泡沫狀液體。支氣管淋巴結(jié)充血，水腫。而肺炎常對(duì)稱性發(fā)生在尖葉心葉、中間葉和隔葉前緣，主要見于急性氣喘病。肉眼觀察病區(qū)紫色，質(zhì)地較硬，外觀半透明，膠樣浸潤(rùn)狀，支氣管淋巴結(jié)顯著腫大，切面多汁質(zhì)地較硬，可有出血。

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