張華

【摘 要】目的：探討產(chǎn)前遺傳性疾病診斷中染色體微陣列分析技術(shù)的價值。方法： 選取2018/3-2019/4間成功隨訪的852名因血清學篩查高風險或高齡而進行產(chǎn)前診斷孕婦，根據(jù)其所運用的檢測方法分為實驗組和對照組，實驗組運用染色體微陣列分析技術(shù)對照組運用熒光原位雜交技術(shù)。結(jié)果：實驗組21-三體，13-三體，18-三體，X和Y非整倍體與核型分析結(jié)果對比，復(fù)合率100%。實驗組染色體拷貝數(shù)變異檢出率高于對照組。結(jié)論：染色體微陣列分析技術(shù)檢測周期短，結(jié)果可靠，染色體拷貝數(shù)變異檢出率高，在產(chǎn)前遺傳性疾病診斷中有很好的應(yīng)用價值，可以廣泛推廣。

【關(guān)鍵詞】染色體微陣列分析技術(shù);產(chǎn)前遺傳性疾病

【中圖分類號】R714.5【文獻標識碼】B 【文章編號】1002-8714（2020）05-0117-01

引言：遺傳性疾病主要包括染色體病、單基因病、多基因病和線粒體病。對于產(chǎn)前遺傳性疾病來說，主要是指染色體病和單基因病。染色體病是指各種原因引起的染色體數(shù)目異常和結(jié)構(gòu)異常的疾病，種類達1萬多種。[1]絕大多數(shù)染色體數(shù)量異常的胎兒會導(dǎo)致孕早期自然流產(chǎn)、早產(chǎn)、死胎或嚴重畸形。只有少數(shù)染色體平衡性結(jié)構(gòu)異常和個別染色體三體異常能夠存活，但也會影響其生活質(zhì)量，增加家庭經(jīng)濟負擔。此外，由于染色體拷貝數(shù)變異（chromosome copy number variations，CNV）在人類基因組中普遍存在且與眾多疾病相關(guān)，如精神分裂癥，微缺失微重復(fù)綜合征，因此也成為產(chǎn)前遺傳病檢測的關(guān)注點。因此，為了提高人口質(zhì)量，降低出生缺陷，需要進行產(chǎn)前遺傳性疾病檢測。對此，本院對852例需要排除產(chǎn)前遺傳性疾病的孕婦進行研究，以下是相關(guān)研究內(nèi)容。

1 對象及方法

1.1對象

2018/3-2019/4間因血清學篩查高風險或高齡而要求排除產(chǎn)前遺傳性疾病的孕婦852例，對照組340例運用熒光原位雜交法，實驗組512例運用染色體微陣列分析技術(shù)。所有孕婦均知情同意。實驗組：年齡范圍是19-40歲，平均年齡是（25.35±3.16）歲;孕周17-22周，平均孕周是（19±1.25）周;對照組：年齡范圍是21-39歲，平均年齡是（24.12±2.08）歲;孕周16-21周，平均孕周是（18.12±1.07）周。對全體患者的以上資料進行對比，組間無差異，能夠開展對比研究實驗（P>0.05）[2]。

1.2方法

實驗組以染色體微陣列分析法進行檢測，染色體微陣列分析法又稱為基因芯片，是一種分辨率極高的全基因組檢測技術(shù)，不僅能夠檢測出染色體非整倍體，而且也能夠檢測出染色體拷貝數(shù)變異。具體流程是：①通過羊水穿刺術(shù)獲得羊水，根據(jù)標準流程提取DNA，對樣本的DNA進行純化、擴增、標記，再以染色體DNA探針實施全面覆蓋，使其與支持物固定在一起，和樣本中的標記分子進行雜交;②對其中的DNA雜交信號進行監(jiān)測，收集樣本分子的數(shù)量及序列等信息，通過相應(yīng)的生物信息技術(shù)、CHAS軟件對其進行檢測;③按照復(fù)制數(shù)散點區(qū)域面積來判斷是否缺損、交叉等。

對照組以熒光原位雜交法進行檢測，具體流程是：①實施玻片預(yù)處理，將10mL羊水離心5min后去上清液，于35℃條件下消化15min，再次離心5min，然后將低滲液、固定液依次加入，固定3次，漂洗2次，然后浸泡于溶液中15min②在預(yù)冷100%、80%、60%乙醇中脫水5min，待玻片干燥后，對其加熱使其溫度升至58℃，然后進行FISH實驗;③在實施預(yù)處理期間，需要將干燥涂片置于58℃烤箱內(nèi)受熱15min，然后把玻片浸泡在甲醇溶液內(nèi)3min，后取出再浸泡在乙醇溶液內(nèi)8min，再進行干燥、脫水處理。

1.3指標分析

比較兩組技術(shù)方法的21三體、13三體、18三體、X、Y和CNV計數(shù)結(jié)果。

1.4統(tǒng)計學分析

以上實驗數(shù)據(jù)均轉(zhuǎn)錄至SPSS22.0統(tǒng)計軟件中進行處理，其中，計數(shù)資料以%進行說明，并實施X2檢驗;計量數(shù)據(jù)則實施t檢驗，若P<0.05，代表組間差異顯著，能夠開展統(tǒng)計學研究。

2 結(jié)果

2.1對比兩組21三體、13三體、18三體、X和Y計數(shù)結(jié)果如表1

2.2對比兩組CNV檢測率如表2。

3 討論

產(chǎn)前胎兒染色體檢測是降低出生缺陷的重要措施，其技術(shù)方法主要是傳統(tǒng)的染色體核型分析，該方法能夠檢測出胎兒染色體非整倍體及大的結(jié)構(gòu)重排，包括平衡易位，倒位等平衡性結(jié)構(gòu)重排和片段缺失、重復(fù)等非平衡型結(jié)構(gòu)重排，在臨床中得到廣泛應(yīng)用。但其局限性也逐漸顯露出來，核型分析首先要進行細胞培養(yǎng)，診斷周期長且具有培養(yǎng)失敗的風險，因此可能導(dǎo)致無法得到檢測結(jié)果。另外，由于核型分析分辨率有限而無法檢出微小的結(jié)構(gòu)異常，導(dǎo)致一些染色體拷貝數(shù)變異被漏診。對此，隨著臨床基因檢測技術(shù)的不斷優(yōu)化，熒光原位雜交技術(shù)、染色體微陣列分析法逐漸應(yīng)用于臨床。1986年，Gremer等證實熒光原位雜交技術(shù)可以檢測染色體非整倍體，從而開辟了間期細胞遺傳學研究的新領(lǐng)域。[2]多項研究表明熒光原位雜交技術(shù)是產(chǎn)前檢測非整倍體的有效途徑。[3-4]但是，目前熒光原位雜交技術(shù)所用的探針主要針對13，18，21，X和Y五條染色體，無法一次性檢測46條染色體。其次，由于步驟繁多，容易造成信號丟失，造成假陰性結(jié)果。本研究中染色體微陣列分析技術(shù)相較于熒光原位雜交，一次可以檢測46條染色體非整倍體和全基因組水平染色體拷貝數(shù)變異。本研究結(jié)果表明，應(yīng)用染色體微陣列技術(shù)可以快速準確的檢出13，18，21，X，Y染色體非整倍體，與核型檢測結(jié)果一致，檢出率和準確率100%。同時，染色體微陣列分析技術(shù)還檢出染色體拷貝數(shù)變異72例，檢出率顯著高于對照組，P<0.05。Hillman[5]等所做的Meta分析結(jié)果表明，在產(chǎn)前診斷中，染色體微陣列分析技術(shù)較常規(guī)染色體顯帶技術(shù)增加2.9%的異常檢出率。另有研究表明運用染色體微陣列分析技術(shù)進行產(chǎn)前診斷時，檢出率有所提高。[8-9]需要注意的是，雖然染色體微陣列分析法相比于熒光原位雜交法存在一定的優(yōu)勢，其應(yīng)用也存在一定的局限性：第一，不能檢出染色體平衡性重排。第二，染色體微陣列分析技術(shù)檢出的染色體拷貝數(shù)變異中，很多是意義未明的，這對遺傳咨詢和妊娠選擇帶來了一定的困擾。但鑒于其對常見染色體病和染色體拷貝數(shù)變異的檢出率和準確率都優(yōu)于熒光原位雜交法，所以在產(chǎn)前遺傳性疾病的檢測中更有應(yīng)用價值，可以推廣。

參考文獻

邊旭明. 實用產(chǎn)前診斷學[M]. 背景：人民軍醫(yī)出版社，2011：71

Gremer T，Landegent J， Bruckner A， et al. Detection of chromosome aberrations in the human interphase nucleus by visualization of specific target DNAs with radioactive and non-radioactive in situ hybridization techniques： diagnosis of trisomy 18 with probe L1.84 [J].Hum Genet. 1986，74（4）：346-352.

梁毓，楊洋，余蘭等，熒光原位雜交快速產(chǎn)前檢測非整倍體的臨床應(yīng)用研究[J]。中國優(yōu)生與遺傳雜志。

劉慈，尹紅亞，劉學軍等，熒光原位雜交技術(shù)快速產(chǎn)前診斷胎兒常見染色體非整倍體異常研究[J]。Chinese General Practice.

Hillman SC， Pretlove S， Coomarasamy A， et al. Additional information from array comparative genomic hybridization technology over conventional karyotyping in prenatal diagnosis： a systematic review and meta-analysis [J]. Ultrasound Obstet Gynecol， 2011，37（1）：6-14

Lee CN， Lin SY， Lin CH， et al. Clinical utility of array comparative genomic hybridization for prenatal diagnosis： a cohort study of 3171 pregnancies [J]. BJOG，2012，119（5）：614-625

Shaffer LG， Rosenfeld JA，Dabell MP， et al. Detection of clinically significant genomic alterations by microarray analysis for specific anomalies detected by ultrasound [J]. Prenat Diagn，2012，32（10）：986-995