李雪松 王立平 譚佳音

【摘 要】目的：研究緊密連接蛋白Claudin6在乳腺癌中的表達及臨床意義。方法：收集2018年8月到2019年7月齊齊哈爾醫(yī)學院病理診斷中心標本，其中乳腺癌組織78例和對應的癌旁正常組織44例，采用免疫組化法檢測乳腺癌組織中Claudin6的表達情況。結果：乳腺癌中Claudin6陽性表達率低于癌旁正常組織，Claudin6在乳腺癌中的表達（66.67%）與癌旁正常組織的表達（88.64%）比較差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。結論：為后續(xù)研究Claudin6在乳腺癌的發(fā)生、侵襲和轉移中的作用奠定基礎，也為臨床治療提供依據。

【關鍵詞】乳腺癌，Claudin6，免疫組化法

【中圖分類號】R737.9 【文獻標識碼】B ? ?【文章編號】1002-8714（2020）07-0047-01

乳腺癌是影響我國女性健康的最常見的惡性腫瘤之一，乳腺癌的發(fā)病率居于我國女性癌癥發(fā)病率第一位[1]。緊密連接蛋白Claudins是緊密連接復合物的主要構成成分，參與維持緊密連接的選擇性滲透和細胞極化[2]。有研究顯示，Claudins蛋白可能在多種腫瘤的發(fā)生，浸潤及轉移中發(fā)揮重要作用[3]。到目前為止，已有 27種 Claudins 蛋白家族成員在人體內被發(fā)現(xiàn)，其序列的一致性為12.5%～69. 7%，大部分相對分子質量為20000～27000，目前已有 21 種被鑒定在人類身體中存在[4]。Claudin6是Claudins蛋白家族的 27 個成員之一。本實驗通過免疫組化的方法分析Claudin6在乳腺癌組織中的表達為后續(xù)研究Claudin6 在乳腺癌發(fā)生發(fā)展及轉移過程中可能起到的作用奠定基礎。

1 材料與方法

1.1材料來源：收集2018年8月到2019年7月齊齊哈爾醫(yī)學院病理診斷中心標本，其中乳腺癌組織78例和對應的癌旁正常組織44例患者術前均未經任何抗癌治療。乳腺癌組織標本均為女性，患者年齡最大78歲，最小22 歲，平均年齡為47.8 歲。乳腺癌標本及癌旁正常組織用10%中性緩沖福爾馬林液常溫固定后脫水包埋，制成蠟塊。

1.2主要儀器和試劑：光學顯微鏡，電熱恒溫培養(yǎng)箱，Claudin6羊抗人多克隆抗體，SP免疫組化試劑盒。

1.3免疫組織化學染色 采用免疫組織化學SP法對78 例乳腺癌組織和 44例癌旁正常組織的Claudin6進行了檢測。固定包埋乳腺癌組織標本，以 2-3?m 厚切片，脫蠟水化;抗原修復;滴加 3% H2O2，室溫孵育 15min，PBS沖洗，5min×3 次;滴加即用型正常山羊血清，室溫孵育 30min，滴加 0.01M PBS 稀釋的一抗（1：100 PBS 稀釋羊抗人 Claudin6 多克隆抗體），4°C冰箱過夜。PBS 沖洗，5 min×3 次;滴加生物素標記的二抗，室溫孵育 20 min。PBS 沖洗，5 min×3 次;滴加鏈霉素親生物素-過氧化物酶溶液，室溫孵育 20 min，PBS 沖洗，5 min×3 次;滴加新鮮配制的 DAB 顯色劑，顯微鏡下觀察顯色;自來水沖洗，蘇木精復染，酒精脫水，二甲苯透明，中性樹膠封片。以PBS 代替一抗做陰性對照。

1.4免疫組化結果判定 Claudin6表達在細胞胞膜或者胞漿中， 呈棕黃色或者棕褐色均勻或者有顆粒狀染色。觀察陽性細胞的數(shù)量與分布， 在20×10倍顯微鏡下任意選取5個視野， 計算出平均每個視野中陽性細胞百分率， 陽性細胞數(shù)<5%為陰性， 陽性細胞數(shù)≥5%為陽性。

1.5 統(tǒng)計學分析 所有數(shù)據資料應用SPSS22.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據統(tǒng)計處理， P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

78例乳腺癌組織中52例Claudin6表達陽性，陽性率為66.67%（52∕78）。44例癌旁正常組織中39例Claudin6陽性表達，陽性率為88.64%（39∕44）。Claudin6 在乳腺癌組織中的表達低于癌旁正常組織，棕褐色顆粒定位于乳腺癌細胞及癌旁正常細胞的細胞膜或者細胞漿中，但兩者比較差異無顯著性（P>0.05）。

3 討論

Claudin6 在乳腺癌組織中的表達課題組在前期研究工作中克隆和鑒定了與乳腺癌表型抑制相關的Claudin6 基因，同時發(fā)現(xiàn)在鼠和人的乳腺癌細胞中此基因表達很低，推測Claudin6可能靶向作用于TJs，或許在抑制乳腺癌表型中能夠起到一定的作用。最新研究顯示，TJs 與某些人類腫瘤細胞的侵襲和轉移有關。目前認為，Claudins 家族不同成員在不同腫瘤中表達各不相同，所代表的生物學意義也有所不同[5]。為了探討Claudin6 在乳腺癌發(fā)生發(fā)展及轉移過程中的作用，本實驗采用免疫組化技術對78例乳腺癌標本和44例癌旁正常組織進行Claudin6表達的檢測。結果顯示，Claudin6主要表達于乳腺組織的胞膜和胞漿中，而在乳腺癌組織中Claudin6 多表達于胞漿。本實驗結果顯示，Claudin6在乳腺癌的表達（陽性率66.67%）低于癌旁正常組織（陽性率88.64%），但差異無顯著性（P>0.05）。這也為后續(xù)研究Claudin6在乳腺癌的發(fā)生、侵襲和轉移中的作用奠定基礎，同時也為臨床治療提供參考依據。

參考文獻

[1] 駱麗，馬國榮，劉鳳閣，等. 緊密連接蛋白-1、3、4在乳腺癌患者中的表達及其臨床意義[J]疑難病雜志，2017.16（6）.610-613

[2] 邢曉輝，李力仙，郭天林.等.Claudin蛋白在緊密連接中的作用機制及與疾病的關系[J/OL].中華臨床醫(yī)師雜志·電子版，2013.7（23）：10839-10841

[3] 劉麗麗，趙霞.Claudin蛋白在卵巢癌中的研究進展[J].四川解剖學雜志，2014，22（ 1） ：

22-25.

[4] 于鳳嬌，達林泰Claudins 蛋白與惡性腫瘤轉移相關性的研究進展[J] 醫(yī)學綜述，2017 .7（23）.

1316-1319

[5] 劉亞芳，李久霞，張廣超.等.緊密連接蛋白CLDN6在卵巢癌、肝癌以及腦膜瘤組織中的表達及意義[J] 吉林大學學報（醫(yī)學版）2010.7（4）.698-702