徐曉芳， 程黎明， 陳樑， 黃興華， 李怡巍， 李宗恒

(1.德陽市人民醫(yī)院， 四川 德陽 618000； 2.西南醫(yī)科大學， 四川 瀘州 646000)

宮頸癌是婦科中發(fā)病率較高的惡性腫瘤，且發(fā)病率與死亡率每年都在增加，嚴重威脅女性健康[1]。近年來，臨床針對宮頸癌術后患者的預后評估主要參考宮頸癌國際婦產科聯(lián)盟分期(international federation of gynecology and obstetrics，F(xiàn)IGO)，但由于這一標準無法客觀評估宮旁與盆壁累及范圍，尚未納入淋巴結轉移狀態(tài)[2-3]。有研究報道，F(xiàn)IGO分期與手術病理分期總符合率僅占60%，所以對宮頸癌患者術后預后的評估應盡早找到特異性高的指標。腫瘤生物標志物是新興的篩查指標，是在機體惡性腫瘤發(fā)生發(fā)展或人體處于異常狀態(tài)而產生的特殊物質，目前已作為癌癥早期篩查、診斷、預后評估與療效評價的有效指標[4-5]。人附睪蛋白4(human epididymis protein 4，HE4)、共刺激分子B7-H3(costimulatory molecule B7-H3,B7-H3)是目前婦科惡性腫瘤中新型的標志物，宮頸癌的發(fā)生及發(fā)展與HE4、B7-H3密切相關，但目前應用于宮頸癌患者術后預后評估報道較少，本研究重點分析HE4、B7-H3表達水平對宮頸癌術后患者預后的評估價值，為宮頸癌預后評估提供參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2012年1月—2014年1月收治的行腹腔鏡宮頸癌根治術患者300例為宮頸癌組，280例宮頸上皮內瘤變患者為良性組，選擇同期體檢健康的女性280例為對照組。納入標準：(1)經(jīng)組織病理學確診，符合宮頸上皮內瘤變或宮頸癌診斷標準；(2)未接受過系統(tǒng)抗癌治療者；(3)年齡25～74歲。排除標準：(1)術前進行治療者；(2)合并嚴重心肝腎功能不全，其它腫瘤患者；(3)HIV陽性。300例宮頸癌患者：宮頸癌組FIGO分期[6]，Ⅰ期76例、Ⅱ期88例、Ⅲ期79例、Ⅳ期57例；腫瘤細胞分化程度，低分化112例、中分化108例、高分化80例；組織病理學分類，鱗癌158例、腺癌121例、腺鱗癌21例；腫瘤直徑，≥5 cm 85例、<5 cm 215例；浸潤深度，淺肌層92例、深肌層208例，淋巴結轉移102例；平均(48.52±6.81)歲、絕經(jīng)者68例。良性組平均(48.36±6.79)歲，絕經(jīng)70例。對照組平均(48.85±6.80)歲，絕經(jīng)者65例。各組年齡、絕經(jīng)情況等資料比較，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。本研究所有入選者皆為自愿參與本研究、且簽署知情同意書；本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會批準。

1.2 方法

1.2.1HE4水平檢測 宮頸癌組、良性組在術后非月經(jīng)期間采集晨起空腹靜脈血3 mL，對照組在非月經(jīng)期間體檢時采集晨起空腹靜脈血3 mL，采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測血清HE4水平。

1.2.2B7-H3水平檢測 在收集的靜脈血中加入B7-H3單抗，標本和標準品中的B7-H3與單抗結合，PBS液體洗滌5 min，按照1 ∶500的比例，加入羊標志的一抗5 mL，4℃放置過夜，PBS緩沖液洗滌3次，5 min/次，加入鼠來源的二抗2 mL，室溫放置2 h，PBS液體洗滌5 min；加入顯色底物，辣根過氧化物酶會使無色的顯色劑現(xiàn)藍色，加終止液變黃，讀取酶標儀(型號SpectraMax Paradigm，Molecular Devices)450 nm處吸光度(OD)值，并按照B7-H3測定的標準曲線換算為濃度值。

1.3 觀察指標

觀察各組被檢者及不同宮頸癌臨床特征(年齡、月經(jīng)狀態(tài)、腫瘤直徑、病理類型、FIGO分期、分化程度、淋巴結轉移、浸潤深度)患者的血清HE4、B7-H3水平，宮頸癌患者隨訪5年分析生存情況、比較死亡與存活患者血清HE4及B7-H3水平；分析血清HE4、B7-H3水平對宮頸癌術后患者預后的評估價值。

1.4 統(tǒng)計學方法

2 結果

2.1 血清HE4及B7-H3水平

結果顯示，宮頸癌組、良性組患者HE4、B7-H3水平高于對照組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，宮頸癌組HE4、B7-H3水平高于良性組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。見表1。

表1 各組被檢者血清HE4、B7-H3水平Tab.1 Levels of serum HE4 and B7-H3 in

2.2 血清HE4及B7-H3水平與宮頸癌臨床特征的關系

結果顯示，不同F(xiàn)IGO臨床分期、分化程度、淋巴結轉移的宮頸癌患者的HE4及B7-H3水平比較，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；而不同年齡、月經(jīng)狀態(tài)、腫瘤直徑、病理類型、浸潤深度宮頸癌患者的HE4、B7-H3水平比較，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。見表2。

表2 不同臨床特征宮頸癌患者血清HE4和B7-H3水平Tab.2 Levels of serum HE4 and B7-H3 in patients with cervical cancer of different clinical characteristics

2.3 血清HE4、B7-H3水平與宮頸癌術后患者預后的關系

結果顯示，300例宮頸癌術后患者持續(xù)隨訪5年，死亡率42.67%(128/300)，存活率57.33%(172/300)，死亡組血清HE4、B7-H3水平高于存活組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。見表3。

表3 宮頸癌術后5年存活或死亡患者血液HE4、B7-H3水平Tab.3 Levels of blood HE4 and B7-H3 in patients with cervical cancer survival or

2.4 血清HE4、B7-H3單獨或聯(lián)合檢測對宮頸癌患者預后的評估價值

結果顯示，300例宮頸癌術后患者的HE4、B7-H3指標分析發(fā)現(xiàn)，HE4、B7-H3對宮頸癌術后患者預后均有良好的預測價值，但HE4、B7-H3單一指標的預測價值低于2項指標聯(lián)合的預測價值。見表4。

表4 血清HE4、B7-H3單獨或聯(lián)合檢測對宮頸癌患者預后的評估價值Tab.4 Evaluation value of serum HE4 and B7-H3 alone or in combination for the prognosis of cervical cancer patients

圖1 血清HE4、B7-H3單獨或聯(lián)合檢測對宮頸癌患者預后的ROC曲線Fig.1 ROC curve of serum HE4 and B7-H3 alone or combined detection for the prognosis of cervical cancer patients

3 討論

臨床治療宮頸癌首選方式為根治手術，切除宮頸癌患者的腫瘤組織而控制惡性腫瘤細胞擴散，由于大部分宮頸癌患者就診時已為中晚期，病情危重，手術治療后預后較差[7-9]。近年來。臨床中評估預后主要依賴于影像學及血清學檢查，但由于影像學手段對病灶或淋巴結轉移診斷效果不理想，并且受到影像學診斷結果敏感度、特異度等多方面局限而影響應用[10-11]。

HE4為新型、潛在的腫瘤標志物。臨床研究報道，在健康或良性瘤變組織或血清中含量不高，但在宮頸癌患者血清中水平升高，是目前作為宮頸癌早期篩查的有效指標[12]。關于HE4與宮頸癌術后預后的報道較少，近年來基礎與臨床研究提示，HE4可能與宮頸癌腫瘤生物學行為具有相關性，但該對患者術后預后的臨床價值仍在研究中[13-14]。研究報道，在健康組織中HE4來源于輸卵管、子宮內膜及宮頸中，而在惡性腫瘤的血清與組織中表達明顯升高[15-16]。Stella等[17]研究報道中檢測HE4標記物發(fā)現(xiàn)在宮頸癌中呈現(xiàn)高表達，并且發(fā)現(xiàn)HE4在宮頸癌中有預測價值，且發(fā)現(xiàn)HE4表達與宮頸癌病理類型、臨床分期、分化程度及淋巴結轉移密切相關。本研究結果發(fā)現(xiàn)，宮頸癌組、良性組HE4表達水平高于對照組，宮頸癌組HE4表達水平高于良性組，提示在宮頸癌術后患者HE4水平仍高于良性腫瘤及健康者。同時本研究進一步分析發(fā)現(xiàn)，隨著不同F(xiàn)IGO臨床分期、淋巴結轉移HE4表達水平明顯升高，而分化程度越高，HE4表達水平下降，分化程度越低惡性程度越高，說明HE4可作為預測宮頸癌術后預后評估具有重要意義。B7-H3是B7免疫共刺激分子超家族的成員。大量研究報道，B7-H3在大量腫瘤組織中均呈現(xiàn)高表達，譬如前列腺癌、乳腺癌、肝癌、結腸癌、血液系統(tǒng)惡性腫瘤等等，B7-H3表達水平高低與腫瘤預后與病程進展密切相關，B7-H3表達水平升高提示不良預后或疾病進一步發(fā)展[18-20]。近年來，B7-H3在宮頸癌發(fā)生與發(fā)展的參與機制并未有準確的定論。本研究結果發(fā)現(xiàn)，宮頸癌組、良性組B7-H3表達水平高于對照組，宮頸癌組B7-H3表達水平顯著高于良性組，隨著不同F(xiàn)IGO臨床分期、淋巴結轉移、B7-H3表達水平明顯升高，而分化程度越高，B7-H3表達水平下降，分化程度越低惡性程度越高，提示B7-H3高表達加快了宮頸癌的進展。本研究隨訪5年分析其生存情況發(fā)現(xiàn)，300例宮頸癌術后患者持續(xù)隨訪5年，死亡率42.67%(128/300)，存活率57.33%(172/300)，死亡組HE4、B7-H3表達水平高于存活組，提示HE4、B7-H3呈高表達水平加快患者疾病復發(fā)或轉移，宮頸癌患者預后變差。與既往研究報道宮頸癌患者術后疾病進展時大量腫瘤標志物表達上調相符[21-22]。Jose等[23]研究報道，B7-H3在乳腺癌細胞中異常高表達是加快腫瘤進展的危險因素之一，同時與淋巴結轉移密切相關。Cong等[24]報道B7-H3高表達是預測前列腺癌擴散與預后不良的獨立預測因子。本研究結果發(fā)現(xiàn)，HE4、B7-H3單一預測的價值低于HE4聯(lián)合B7-H3預測宮頸癌術后臨床預后。HE4、B7-H3及HE4聯(lián)合B7-H3診斷宮頸癌術后預后的靈敏度及特異度分別為88.89%和87.45%、89.02%和87.64%、94.44%和90.45%，提示聯(lián)合檢測預后評估效果更準確。

綜上所述，HE4、B7-H3表達水平對宮頸癌術后預后評估具有重要意義，可作為輔助診斷宮頸癌術后進展的有效指標，HE4聯(lián)合B7-H3檢測可提高宮頸癌術后診斷的價值。