巫結(jié)冰　何炳聯(lián)　馮文?！￡悅|　梁玉萍　張慧紅

【摘 要】目的：探討10種散裝感冒涼茶對(duì)甲型H1N1流感病毒的體外抑制作用。采用CCK-8法先測(cè)定感冒涼茶對(duì)MDCK細(xì)胞的毒性作用。再分別通過(guò)預(yù)防給藥、治療給藥、藥液和病毒直接混合殺滅三種途徑進(jìn)行體外試驗(yàn)，在450nm波長(zhǎng)下檢測(cè)各對(duì)應(yīng)OD值并計(jì)算其對(duì)甲型H1N1流感病毒的抑制率。結(jié)果顯示10種感冒涼茶能抑制甲型H1N1流感病毒的生長(zhǎng)，預(yù)防效果和治療效果相當(dāng)，兩者無(wú)差異。涼茶自身含微量細(xì)胞毒性。

【關(guān)鍵詞】 感冒涼茶; 甲型H1N1流感病毒; 抑制作用;CCK-8

【中圖分類號(hào)】R511.7【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A【文章編號(hào)】1005-0019（2020）13--02

1 材料

隨機(jī)選取10家散裝感冒涼茶經(jīng)除菌處理;經(jīng)廣東省CDC復(fù)檢符合甲型H1N1自分離毒株。DMEM、PBS、胎牛血清、0.5%胰酶、0.25胰酶等購(gòu)自美國(guó)GIBCO公司;CCK-8購(gòu)自美國(guó)MCE公司;酶標(biāo)儀RT6100購(gòu)自深圳雷杜公司。

2 方法

2.1H1N1 TCID50測(cè)定80%成片MDCK細(xì)胞經(jīng)PBS洗滌2遍。用病毒維持液將甲型H1N1流感病毒原液按原液、10-0.5～10-7進(jìn)行稀釋后接種細(xì)胞，每孔接種100?l，每個(gè)稀釋度接種4孔，并設(shè)對(duì)照孔。5%CO235℃培養(yǎng)72h，觀察各孔CPE，利用Reed-Muench法計(jì)算出病毒的TCID50。

2.210種感冒涼茶TC50與TC0測(cè)定80%成片細(xì)胞洗滌后。用維持液將10種感冒涼茶各自按原液、2-1～2-7進(jìn)行稀釋后接種細(xì)胞，每孔接種100?l，每種感冒涼茶每個(gè)稀釋度接種4孔，同時(shí)設(shè)照孔。5%CO235℃培養(yǎng)72h后觀察CPE。吸走藥液，PBS洗滌細(xì)胞2遍，每孔加入含10%的CCK-8顯色液100?l，35℃顯色2h后用自動(dòng)酶標(biāo)儀450nm波長(zhǎng)下測(cè)出各孔OD值。利用Reed-Muench法計(jì)算出TC50和TC0各自所對(duì)應(yīng)的稀釋倍數(shù)。

2.3 體外給藥試驗(yàn)以2.2計(jì)算出的H1N1病毒TCID50配制含100TCID50濃度的病毒液備用。按2.2得到的10種感冒涼茶各自TC0濃度稀釋液為母液，分別按2-1、2-2、2-3、2-4 稀釋后進(jìn)行體外試驗(yàn)。三個(gè)實(shí)驗(yàn)組培養(yǎng)96h后，按2.2檢測(cè)各孔OD值計(jì)算各自對(duì)應(yīng)的病毒抑制率。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3遍。

3 結(jié)果與分析

3.110種感冒涼茶細(xì)胞毒性檢測(cè)（TC50與TC0）結(jié)果

通過(guò)檢測(cè)，10種感冒涼茶均帶有微量細(xì)胞毒性。

3.210種感冒涼茶三種給藥途徑體外實(shí)驗(yàn)結(jié)果

三種給藥途徑的體外實(shí)驗(yàn)，以≥90%為有效抑制，抑制結(jié)果排序?yàn)轭A(yù)防給藥組（0）<治療給藥組（10%）<直接滅活組（70%）（為55.93，Ρ<0.01; >95%為可信）。預(yù)防給藥組和治療給藥組對(duì)比Ρ >0.01，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。具體各結(jié)果見(jiàn)表格。

討論

通過(guò)對(duì)隨機(jī)10種散裝感冒涼茶的細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)這10種感冒涼茶均帶有一定的細(xì)胞毒性，TC50在0.05ml～0.177mL之間，中位數(shù)為0.088mL。TC0則在0.031mL～0.125mL之間，中位數(shù)為0.062mL，證明這10款感冒涼茶自身所帶的細(xì)胞毒性是微小的。當(dāng)然，涼茶本身存在的細(xì)胞毒性也證明了“是藥三分毒”的中醫(yī)理論。

直接滅活試驗(yàn)結(jié)果表明10種感冒涼茶在各自TC0的濃度下對(duì)甲型H1N1流感病毒是一定的抑制作用。而治療給藥和預(yù)防給藥相對(duì)比，整體對(duì)甲型H1N1流感病毒的治療效果較低，可能與藥物進(jìn)入細(xì)胞的效率有關(guān)?，F(xiàn)代研究表明，病毒是通過(guò)相應(yīng)的受體成功吸附在細(xì)胞表面的[1]。感冒涼茶成分復(fù)雜，常見(jiàn)的有效成分堿類、苷類和黃酮類等物質(zhì)缺乏受體，主要是通過(guò)被動(dòng)運(yùn)輸進(jìn)入細(xì)胞[2]，進(jìn)入濃度隨給藥濃度增加而增加[3]。實(shí)驗(yàn)結(jié)論，散裝感冒涼茶口服吸收率較低，大部分有用成分不能被細(xì)胞直接吸收，但細(xì)胞毒性溫和，適合日常預(yù)防飲用。

參考文獻(xiàn)

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